实验十二食品中亚硝酸盐的测定

实验十二、食品中亚硝酸盐的测定（盐酸萘乙二胺分光光度法）一、实验目的1.明确亚硝酸盐在食品中的作用以及限量标准。2.掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项二、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，与标准系列比较定量。三、仪器1.722分光光度计，提前20min打开预热2.组织绞碎机，菜刀，砧板1-2套3.50mL烧杯500mL烧杯3L大烧杯4.电炉2个5.托盘天平6.200mL容量瓶500mL容量瓶7.恒温水浴锅8.25mL具塞比色管9.滴管，漏斗，滤纸，吸小球10.玻璃棒，温度计，标记笔，标签纸四、试剂（所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂。）1、亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氰化钾[K4Fe6(CN)·3H2O]，用水溶解后，稀释至1000mL。2、乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌[Zn(CH3C00)2·2H20]，加3mL冰乙酸溶于水，并稀释至100mL。3、饱和硼砂溶液：称取5.0g硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100mL热水中，冷却后备用。4、对氨基苯磺酸溶液(4g/L)：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20％的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保分装。5、盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。有致癌作用6、亚硝酸钠标准溶液（0.2g/L）：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每ml相当于200µg亚硝酸钠。7、亚硝酸钠标准使用液（0.2µg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚硝酸钠。五、实验步骤1、样品的处理：（1）取样：取适量的火腿肠，放入搅碎机内搅碎。准确称取5.0克经绞碎、混匀的样品，置于50毫升烧杯中。（2）沉淀蛋白质：①加12.5mL硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将样品洗入500mL容量瓶中，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。②一面转动一面加入5毫升亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质，（3）过滤：加水定容，放置0.5h，除去上层脂肪（上层脂肪用滴管吸除），清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。2标准曲线的绘制精密吸取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.50,2.00,2.50mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0、1、2、3、5、7、10、12.5µg亚硝酸钠)，分别置于50mL比色管中。各加2mL对氨基苯磺酸溶液(4g/L)，混匀，静置3-5min后各加入1mL0.2％盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度A，绘制标准曲线。3试样的侧定精密吸取按40.0mL样液于50mL比色管中。以下按标准曲线测定方法依次加入其它试剂。加水稀释至刻度，混匀，静置15min，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度A。同时做试剂空白。七、数据处理按下式计算：式中:X—试样中亚硝酸盐的含量，mg/kg；V1—测定时所取溶液体积，mL；V2—试样处理液总体积，mL；m—试样质量，g；A—试样测定液中亚硝酸盐的质量，µg；部分食品中亚硝酸盐的限量标准（以NaNO计）2品名限量标准mg/kg食盐（精盐）、牛乳粉≤2香肠（腊肠）香肚、酱腌菜、广式腊肉≤20鲜肉类、鲜鱼类、粮食≤3肉制品、火腿肠、灌肠类≤30蔬菜≤4其他肉类罐头、其他腌制罐头≤50婴儿配方乳粉、鲜蛋类≤5西式蒸煮、烟熏火腿及罐头、西式火腿罐头≤70