TZZB 1406-2019 饲料微生物添加剂 地衣芽孢杆菌

ICS65.120B46T/ZZB1406—2019饲料微生物添加剂地衣芽孢杆菌Microorganismfeedadditive-Bacilluslicheniformis2019-12-06发布团体标准浙江省品牌建设联合会发布2019-12-31实施T/ZZB1206—2019I目次前言.............................................................................II1范围...............................................................................12规范性引用文件.....................................................................13术语和定义.........................................................................14基本要求...........................................................................15技术要求...........................................................................26试验方法...........................................................................47检验规则...........................................................................68标签、包装、运输和贮存.............................................................79质量承诺...........................................................................7附录A（资料性附录）.............................................................8T/ZZB1206—2019II前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准的某些内容可能涉及专利，本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由浙江省品牌建设联合会提出并归口管理。本标准由浙江省标准化研究院牵头组织制定。本标准主要起草单位：浙江惠嘉生物科技股份有限公司。本标准参与起草单位：中国计量大学，浙江省标准化研究院（排名不分先后）。本标准主要起草人：刘金松、杨彩梅、曹广添、曾新福、胡玉华、李慧、张玲玲、郗洪生、吕晓思。本标准评审专家组长：廖上富。本标准由浙江省标准化研究院负责解释。T/ZZB1206—20191饲料微生物添加剂地衣芽孢杆菌1范围本标准规定了饲料微生物添加剂—地衣芽孢杆菌的术语和定义、基本要求、技术要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存、质量承诺等内容。本标准适用于固态和液态的地衣芽孢杆菌饲料添加剂。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志GB4789.5食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验GB4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定法两层筛筛分法GB/T6435饲料中水分的测定GB10648饲料标签GB/T13079饲料中总砷的测定GB/T13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T13081饲料中汞的测定方法GB/T13082饲料中镉的测定方法GB/T13091饲料中沙门氏菌的测定GB/T13092饲料中霉菌检验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T17480饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法GB/T18869饲料中大肠菌群的测定GB19541饲料原料豆粕GB/T23530酵母抽提物NY/T119饲用小麦麸NY/T1444微生物饲料添加剂技术通则NY/T1461饲料微生物添加剂地衣芽孢杆菌国家质量监督检验检疫总局令第75号定量包装商品计量监督管理办法3术语和定义NY/T1461界定的术语和定义适用于本文件。4基本要求T/ZZB1206—201924.1设计研发4.1.1应具备自主筛选、培育菌种和优化发酵工艺的设计研发能力。4.1.2具有省级以上或同等能力的研发团队。4.2原辅材料4.2.1豆粕应符合GB19541中一级品以上要求。4.2.2酵母抽提物应符合GB/T23530中纯品型要求。4.2.3麸皮应符合NY/T119中二级品以上要求。4.3工艺装备4.3.1应采用液体发酵和喷雾干燥的工艺。4.3.2应配备发酵后处理、喷雾干燥、震动过筛和包装环节的自动化生产线。液体发酵应采用自动控制系统（DCS）。4.4检验检测应具备地衣芽孢杆菌含量、水分、粒度、重金属、总砷、微生物等项目的检验能力。5技术要求5.1微生物指标5.1.1菌体形态5.1.1.1染色：革兰氏染色为阳性。5.1.1.2形态特征：菌体细胞（营养体）呈直杆状，单个、成对或短链排列，大小为（0.6～0.8）µm×（1.5～3.0）µm，两端钝圆。有芽孢，芽孢近椭圆形，中生，大小为0.8µm×1.3µm，具有稀疏的周身鞭毛，能运动。孢子囊不膨大，内生孢子释放后孢子壳不是多处破裂。5.1.2菌落形态5.1.2.1LB营养琼脂培养基（Luria-BertaniAgar，LB）：菌落呈灰白色或乳白色，圆形或花瓣形。5.1.2.2营养琼脂培养基（NutrientsAgar,NA）：菌落呈杏仁白色，湿润有光泽，表面略有放射状条纹。5.1.2.3桑塔斯琼脂培养基（Sauton’sAgar,SA）：菌落呈乳脂色，湿润有光泽，不透明，中央凸起。5.1.2.4牛肉浸汁培养基（BeefextractAgar）：菌落呈乳脂色，湿润有光泽，不透明，边缘毛发状。5.1.3细胞壁化学T/ZZB1206—20193菌体细胞壁水解液含有内消旋二氨基庚二酸（meso-DAP）和甘氨酸，无特征性糖（糖型C），为细胞壁II型。5.1.4生理生化特征地衣芽孢杆菌生理生化特征应符合表1的要求。表1生理生化特征特征结果特征结果明胶液化＋生长温度范围15℃～55℃淀粉水解＋利用柠檬酸盐＋硝酸盐还原＋苯丙氨酸脱氨－0.001%溶菌酶生长＋酪素分解＋7%NaCl＋酪氨酸分解－pH5.5～8.7生长＋牛奶凝固－厌氧洋菜生长＋牛奶胨化＋V-P试验＋利用糖产酸葡萄糖＋卵黄反应－阿拉伯糖＋接触酶反应＋木糖＋吲哚反应－甘露醇＋注：＋为阳性反应；－为阴性反应。5.2感官指标产品性状可分为固态和液态两类，应符合包装上标明的产品固有的形状、色泽和气味等，均匀程度、杂志等，无异臭味、无发霉变质，无异物。5.3理化指标理化指标应符合表2的要求。表2理化指标项目指标水分（固态菌剂），%≤9.0粒度（固态菌剂，孔径850μm试验筛通过率），%≥95.0地衣芽孢杆菌菌数，cfu/（g或mL）≥1.0×10115.4卫生指标卫生指标应符合表3的要求。表3卫生指标项目指标黄曲霉毒素B1，μg/kg≤10.0砷（以As计）的允许量，mg/kg≤2.0T/ZZB1206—20194表3（续）项目指标铅（以Pb计）的允许量，mg/kg≤5.0汞（以Hg计）的允许量，mg/kg≤0.1镉（以Cd计）的允许量，mg/kg≤0.5杂菌率，%≤0.1霉菌总数的允许量，cfu/（g或mL）＜2.0×104大肠菌群的允许量，cfu/（100g或100mL）≤400沙门氏菌不得检出志贺氏菌不得检出金黄色葡萄球菌不得检出5.5净含量允差净含量允差应符合原国家质量监督检验检疫总局第75号令。6试验方法6.1抽样按GB/T14699.1的规定，进行样品的采集。采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属勺和刀。在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品，样品采集后应立即进行检测。6.2感官检验取适量样品（固态250g，液态250mL）于无色玻璃杯中进行感官检验，观察、嗅闻或触摸。6.3水分测定按GB/T6435规定执行。6.4粒度检测（固态菌剂）按GB/T5917.1规定执行。6.5地衣芽孢杆菌检测6.5.1菌体形态检验：6.5.1.1染色：革兰氏染色和芽孢染色。6.5.1.2形态检验：用营养琼脂，在30℃条件下，培养48h后，在无菌环境下，取菌体涂片染色，用光学显微镜观察菌体形态。6.5.2菌落特性检验：在LB营养琼脂、营养琼脂、桑塔斯琼脂和牛肉浸汁琼脂平板上，30℃培养48h后，观察菌落颜色、形态和色素等。T/ZZB1206—201956.5.3生理生化特征检验：参照《Bergey’sMannualofSystematicBacteriology》Vol.II和《常见细菌系统鉴定手册》的有关内容进行。6.5.4活菌计数6.5.4.1采用稀释倒平板法。按10倍稀释法制成不同浓度稀释液，从稀释液中分别吸取一定体积置于无菌培养皿中，每一稀释度做3次重复。将事先融化并冷却至50℃左右的营养琼脂培养基，向每个培养皿中倒入约12mL，摇匀，凝固后倒置培养24h，进行菌落计数。6.5.4.2对培养后的每个稀释度取5个～10个菌落的菌体，涂片染色，进行显微镜识别。6.5.4.3选择适宜的稀释度，菌落在30个～300个之间的平板进行计数。6.5.4.4计算公式见（1）、（2）：()()()mL1mLgmLmLcfu/g接种量数数或菌剂母液菌悬液体积稀释倍数菌落平均数、地衣芽孢杆菌×××=...（1）()100%×+=杂菌数目标活菌数杂菌数杂菌率.......................（2）6.6卫生检验6.6.1黄曲霉素B1检验按GB/T17480规定执行。6.6.2砷含量测定按GB/T13079规定执行。6.6.3铅含量测定按GB/T13080规定执行。6.6.4汞含量测定按GB/T13081规定执行。6.6.5镉含量测定按GB/T13082规定执行。6.6.6霉菌检测按GB/T13092规定执行。6.6.7大肠菌群检测按GB/T18869规定执行。6.6.8沙门氏菌检测按GB/T13091规定执行。6.6.9志贺氏菌检测T/ZZB1206—20196按GB4789.5规定执行。6.6.10金黄色葡萄球菌检测按GB4789.10规定执行。6.7净含量允差按原国家质量监督检验检疫总局第75号令执行。7检验规则7.1检验分类7.1.1检验类型分为出厂检验和型式检验。7.1.2出厂检验出厂检验项目见表4。表4检验项目序号检验项目检验类型技术要求试验方法出厂检验型式检验1微生物指标--√5.16.5.1、6.5.2、6.5.32感官指标√√5.26.23水分√√5.36.34粒度√√5.36.45地衣芽孢杆菌活菌数√√5.36.5.46杂菌率√√5.46.5.47黄曲霉素B1--√5.46.6.18砷（As）√√5.46.6.29铅（以Pb计）√√5.46.6.310汞（Hg）√√5.46.6.411镉（Cd）√√5.46.6.512霉菌总数√√5.46.6.613大肠菌群√√5.46.6.714沙门氏菌--√5.46.6.815志贺氏菌--√5.46.6.916金黄色葡萄球菌--√5.46.6.1017净含量允差√√5.56.7注：大肠菌群、铅和砷每2个月进行定期检验。7.1.3型式检验T/ZZB1206—20197一般情况下，企业半年进行一次型式检验，型式检验项目见表4。但有下列情况之一时，应进行型式检验，且生产用地衣芽孢