DB51T 1367-2011 桑蚕中肠型脓病诊断技术规程

ICS65.020.20B47备案号：32711-2012DB51四川省地方标准DB51/T1367—2011桑蚕中肠型脓病诊断技术规程2011-12-28发布2012-03-01实施四川省质量技术监督局发布DB51/T1367—2011I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13术语和定义........................................................................14试剂..............................................................................15仪器、设备........................................................................16诊断..............................................................................1DB51/T1367—2011II前言本标准由四川省农业厅提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局发布。本标准起草单位：四川省蚕业管理总站、乐山市蚕种质量检疫检验站、内江市蚕种质量监督检验站。本标准主要起草人：吴钢、张学清、马露芸、颜建平、何东。DB51/T1367—20111桑蚕中肠型脓病诊断技术规程1范围本标准规定了桑蚕中肠型脓病诊断的技术要求。本标准适用于四川省桑蚕中肠型脓病诊断。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法DB/T1207桑蚕血液型脓病诊断技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1桑蚕中肠型脓病(质型多角体病)midgutpolyhedrosis桑蚕中肠型脓病是质型多角体病毒寄生桑蚕中肠圆筒状细胞，并在细胞质内形成多角体的蚕病，又称质型多角体病。4试剂4.1盐酸溶液[c(HCl)=1mol/L]。4.2分析用水按GB/T6682规定执行。5仪器、设备普通光学显微镜；相差显微镜；冰箱；载玻片；盖玻片；乳钵；乳棒；解剖剪；镊子；吸管；量筒；烧杯；样品袋；冻存管（1.8mL、5mL）。6诊断6.1肉眼诊断6.1.1外观观察DB51/T1367—20112肉眼观察蚕在幼虫阶段是否具有下列症状。a)群体症状：群体发育显著不齐。b)个体症状：病蚕体躯瘦小，食桑与行动不活泼，常呆伏于蚕座周边或蚕沙中；大蚕病蚕体色灰白，胸部半透明；缩小、吐液及下痢；严重时排便伴乳白色粘液。6.1.2解剖观察用手挤压具有上述病症的病蚕尾部，观察是否有乳白色粘液排出；用解剖剪从背中线剪开，观察中肠后部是否有乳白色皱褶。6.1.3初步诊断幼虫阶段的蚕出现6.1.1表述的症状，挤压病蚕尾部有乳白色粘液排出，解剖观察中肠后部有乳白色皱褶，初步诊断为中肠型脓病。6.2显微镜诊断6.2.1样品采集采集6.1.1表述的个体症状病蚕，置于样品袋或冻存管中。6.2.2样品处置6.2.2.1样品保存样品随机分成2份，一份作检样，另一份作备样。样品置于0℃～4℃冰箱中，保存期30d～60d。6.2.2.2样品制备挤压病蚕胸部与尾部，挤出排泄液和肠液，涂抹于载玻片上，制成肠液玻片样本。剪取病蚕中肠后部小块组织，置于载玻片上，滴入1滴～3滴蒸馏水，轻压，制成中肠组织玻片样本。6.2.3显微镜检查6.2.3.1直接检查法将6.2.2.2镜检标本置于显微镜（15×40倍或16×40倍）下观察有无多角体，每个样本观察不少于20个视野。6.2.3.2多角体与类似颗粒鉴别用盐酸溶解法。取病蚕中肠组织，用蒸馏水清洗后置于乳钵中磨碎，将磨碎液涂抹于载玻片上，阴干，用吸管滴1滴～3滴盐酸溶液[c(HCl)=1mol/L]；室温下放置3min～5min，用蒸馏水清洗去酸液，镜检（15×40倍或16×40倍）。类似颗粒溶解消失，多角体存在。6.2.3.3核型多角体和质型多角体鉴别用焦宁—甲基绿染色法。参见DB/T1207桑蚕血液型脓病诊断技术规程6.2.3.3。6.2.4判定镜检发现有多角体存在，呈六角形、不规则四角形及三角形，大小不整齐，样品可诊断为桑蚕中肠型脓病。DB51/T1367—20113磨碎液样本用盐酸溶解，类似颗粒消失、多角体存在，且用焦宁—甲基绿染色，多角体呈红色，样品确诊为桑蚕中肠型脓病。_________________________________