GB∕T 13087-2020 饲料中异硫氰酸酯的测定方法

书书书犐犆犛６５．１２０犅４６!#$%&’’()*犌犅／犜１３０８７—２０２０!ＧＢ／Ｔ１３０８７—１９９１!#$%&’()*+,-犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犻狊狅狋犺犻狅犮狔犪狀犪狋犲狊犻狀犳犲犲犱狊２０２００７２１./２０２１０２０１01’(+,-./012’()*3/0456./书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＧＢ／Ｔ１３０８７—１９９１《饲料中异硫氰酸酯的测定方法》。本标准与ＧＢ／Ｔ１３０８７—１９９１相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下：———删除了银量法（见１９９１年版的第二篇）；———增加了方法的检出限和定量限（见第１章）；———修改了方法的适用范围（见第１章，１９９１年版的第１章）；———修改了白芥子酶的制备方法（见４．１０，１９９１年版的３．５）；———修改了白芥子酶的用量（见７．１，１９９１年版的６．１）；———增加了异硫氰酸酯混合标准溶液的配制和应用（见４．１２、４．１３、７．３和第８章）；———修改了气相色谱测定条件（见７．２，１９９１年版的６．２）；———修改了测定结果计算公式（见第８章，１９９１年版的第７章）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（ＳＡＣ／ＴＣ７６）提出并归口。本标准起草单位：四川威尔检测技术股份有限公司、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、通威股份有限公司。本标准主要起草人：张凤枰、佟建明、张艳红、李德祥、杨发树。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：———ＧＢ／Ｔ１３０８７—１９９１。Ⅰ犌犅／犜１３０８７—２０２０饲料中异硫氰酸酯的测定方法１　范围本标准规定了饲料中异硫氰酸酯的气相色谱测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和饲料原料中异硫氰酸酯的测定。本标准的检出限为２ｍｇ／ｋｇ，定量限为５ｍｇ／ｋｇ。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ５５２０　粮油检验　发芽试验ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法ＧＢ／Ｔ２０１９５　动物饲料　试样的制备３　原理试样中的硫葡萄糖苷在ｐＨ７．０缓冲液中，在白芥子酶作用下生成丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯，用二氯甲烷提取，脱水、过滤后以气相色谱仪测定，内标法定量，结果以丙烯基异硫氰酸酯计。４　试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。４．１　水：ＧＢ／Ｔ６６８２，一级。４．２　二氯甲烷。４．３　石油醚（沸程３０℃～６０℃）。４．４　无水硫酸钠。４．５　柠檬酸溶液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）：准确称取４．２０ｇ柠檬酸（Ｃ６Ｈ８Ｏ７·Ｈ２Ｏ）溶解于水中，用水稀释并定容至２００ｍＬ，混匀。临用现配。４．６　磷酸氢二钠溶液（０．２ｍｏｌ／Ｌ）：准确称取２８．３９ｇ无水磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４）溶解于水中，用水稀释并定容至１Ｌ，混匀。临用现配。４．７　盐酸溶液（０．０１ｍｏｌ／Ｌ）：准确移取０．９ｍＬ浓盐酸，用水稀释并定容至１Ｌ，混匀。４．８　氢氧化钠溶液（０．０１ｍｏｌ／Ｌ）：准确称取０．４０ｇ氢氧化钠加水溶解，用水稀释并定容至１Ｌ，混匀。４．９　ｐＨ７．０缓冲溶液：量取１７６．５ｍＬ柠檬酸溶液（４．５）于１０００ｍＬ容量瓶中，用磷酸氢二钠溶液（４．６）稀释并定容至１０００ｍＬ，混匀，用盐酸溶液（４．７）或氢氧化钠溶液（４．８）调整ｐＨ至７．０。临用现配。４．１０　白芥子酶：称取５０ｇ白芥（犛犻狀犪狆犻狊犪犾犫犪Ｌ．）种子（按照ＧＢ／Ｔ５５２０做发芽试验，７２ｈ内发芽率应大于８５％，保存期不超过两年）粉碎后，置于５００ｍＬ烧杯中，加入１００ｍＬ石油醚（４．３），搅拌２ｍｉｎ，静置，弃去上层液体，重复脱脂１０次，使脂肪含量低于２％，置通风橱内使溶剂挥干，然后再粉碎一次，１犌犅／犜１３０８７—２０２０８０％通过０．２８ｍｍ试验筛，装在密闭容器中，置于－１８℃以下保存，有效期为６个月。为保证白芥子酶活性，制备过程中环境温度应保持在３０℃以下，两次粉碎注意少量多次，防止粉碎机过热。４．１１　丁基异硫氰酸酯内标溶液（０．１ｍｇ／ｍＬ）：准确称取５０ｍｇ（精确至０．００００１ｇ）丁基异硫氰酸酯［ＣＨ３（ＣＨ２）３ＮＣＳ，ＣＡＳ号：５９２８２５，纯度≥９９％］于５００ｍＬ棕色容量瓶中，用二氯甲烷溶解并定容，混匀，于－１８℃以下保存，有效期为３个月。４．１２　异硫氰酸酯混合标准溶液（１．０ｍｇ／ｍＬ）：分别准确称取１０ｍｇ（精确至０．００００１ｇ）丙烯基异硫氰酸酯［ＣＨ２＝ＣＨＣＨ２ＮＣＳ，ＣＡＳ号：５７０６７，纯度≥９９．７％］、丁烯基异硫氰酸酯［ＣＨ２＝ＣＨＣＨ２ＣＨ２ＮＣＳ，ＣＡＳ号：３３８６９７８，纯度≥９５．０％］、戊烯基异硫氰酸酯［ＣＨ２＝ＣＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＣＳ，ＣＡＳ号：１８０６０７９２，纯度≥９５．０％］于１０ｍＬ棕色容量瓶中，用丁基异硫氰酸酯内标溶液（４．１１）溶解并定容，混匀，于－１８℃以下保存，有效期３个月。４．１３　异硫氰酸酯混合标准系列工作溶液：精确移取适量异硫氰酸酯混合标准溶液（４．１２）于１０ｍＬ容量瓶中，用丁基异硫氰酸酯内标溶液（４．１１）稀释定容配制成标准系列工作溶液，丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯的浓度分别为０ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ、０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ。丁基异硫氰酸酯内标浓度均为０．１ｍｇ／ｍＬ。临用现配。４．１４　定性滤纸：快速，内径７．０ｃｍ。５　仪器设备５．１　气相色谱仪：配有氢火焰检测器（ＦＩＤ）。５．２　分析天平：感量０．０１ｇ、０．０００１ｇ和０．００００１ｇ。５．３　实验用样品粉碎机。５．４　振荡器：往复，不低于２００次／ｍｉｎ。５．５　离心机：转速不低于５０００ｒ／ｍｉｎ。６　样品按照ＧＢ／Ｔ２０１９５规定制备试样，至少２００ｇ，粉碎使其全部过０．４２ｍｍ分析筛，混合均匀，装入密闭容器中，备用。７　试验步骤７．１　试样溶液制备平行做两份试验。称取约２．０ｇ（精确至０．０００１ｇ）试样置于１００ｍＬ具塞三角瓶中，加入０．５ｇ白芥子酶（４．１０）、５．０ｍＬｐＨ７．０缓冲溶液（４．９）、１０ｍＬ丁基异硫氰酸酯内标溶液（４．１１），于室温下２００次／ｍｉｎ振荡提取２ｈ，将具塞三角瓶中内容物全部转入离心试管中，５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取下层溶液，用铺有２ｇ～３ｇ无水硫酸钠层的定性滤纸过滤，滤液备用。７．２　气相色谱参考条件色谱柱：聚乙二醇（ＦＦＡＰ）毛细管柱，长３０ｍ，内径０．３２ｍｍ，膜厚０．２５μｍ，或性能相当者。色谱柱温度：起始温度１００℃，保持１０ｍｉｎ，以１０℃／ｍｉｎ升到２００℃，保持２ｍｉｎ。进样口温度：２２０℃。检测器温度：２３０℃。２犌犅／犜１３０８７—２０２０载气：高纯氮气。载气流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。氢气流速：３５ｍＬ／ｍｉｎ。空气流速：４００ｍＬ／ｍｉｎ。尾吹流速：２０ｍＬ／ｍｉｎ。进样量：１μＬ。分流比：５∶１。７．３　测定７．３．１　标准溶液和试样溶液测定在仪器的最佳条件下，分别取异硫氰酸酯混合标准系列工作溶液（４．１３）和试样溶液（７．１）上机测定。各异硫氰酸酯标准溶液的气相色谱图参见附录Ａ。７．３．２　定性和定量以保留时间定性，试样溶液中各异硫氰酸酯保留时间应与标准溶液中各异硫氰酸酯的保留时间一致，其相对偏差在±２．５％之内，内标法定量。８　试验数据处理试样中异硫氰酸酯（以丙烯基异硫氰酸酯计）的含量以质量分数狑计，数值以毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）表示，按式（１）计算：狑＝狑ａ＋狑ｂ×９９．１５１１３．１８＋狑ｐ×９９．１５１２７．２１……………………（１）　　式中：狑ａ、狑ｂ、狑ｐ　　　　———试样中丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯的含量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；９９．１５、１１３．１８、１２７．２１———分别为丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（ｇ／ｍｏｌ）。试样中各异硫氰酸酯的含量以质量分数狑犻计，数值以毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）表示，多点校正按式（２）计算，单点校正按照式（３）计算：狑犻＝ρ犻犞×１０００犿……………………（２）　　式中：ρ犻———由标准曲线得出的试样溶液中各异硫氰酸酯的质量浓度，单位为毫克每毫升（ｍｇ／ｍＬ）；犞———提取溶液的体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———试样质量，单位为克（ｇ）。狑犻＝犃犻犃′ｅｓρ犻ｓρｅｓ犞×１０００犃ｅｓ犃犻ｓρ′ｅｓ犿……………………（３）　　式中：犃犻　———试样溶液中各异硫氰酸酯色谱峰面积；犃′ｅｓ———混合标准溶液中丁基异硫氰酸酯内标的峰面积；ρ犻ｓ———用于校准的混合标准溶液中各异硫氰酸酯的质量浓度，单位为毫克每毫升（ｍｇ／ｍＬ）；ρｅｓ———试样溶液中丁基异硫氰酸酯内标的质量浓度，单位为毫克每毫升（ｍｇ／ｍＬ）；３犌犅／犜１３０８７—２０２０犞———试样提取溶液的体积，单位为毫升（ｍＬ）；犃ｅｓ———试样溶液中丁基异硫氰酸酯内标的峰面积；犃犻ｓ———用于校准的混合标准溶液中各异硫氰酸酯的峰面积；ρ′ｅｓ———混合标准溶液中丁基异硫氰酸酯内标的质量浓度，单位为毫克每毫升（ｍｇ／ｍＬ）；犿———试样质量，单位为克（ｇ）。测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留３位有效数字。９　精密度在重复性条件下，应符合下述规定：当异硫氰酸酯含量小于或等于１００ｍｇ／ｋｇ时，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不超过该算术平均值的１５％；当异硫氰酸酯含量大于１００ｍｇ／ｋｇ时，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不超过该算术平均值的１０％。４犌犅／犜１３０８７—２０２０附　录　犃（资料性附录）异硫氰酸酯标准溶液气相色谱图异硫氰酸酯标准溶液气相色谱图，见图Ａ．１。说明：１———丙烯基异硫氰酸酯；２———丁基异硫氰酸酯（内标）；３———丁烯基异硫氰酸酯；４———戊烯基异硫氰酸酯。图犃．１　异硫氰酸酯标准溶液（０．１犿犵／犿犔）气相色谱图５犌犅／犜１３０８７—２０２０