GB 30615-2014 食品添加剂 竹叶抗氧化物

中华人民共和国国家标准GB30615—20142014-04-29发布2014-11-01实施食品安全国家标准食品添加剂竹叶抗氧化物GB30615—20141食品安全国家标准食品添加剂竹叶抗氧化物1范围本标准适用于以刚竹属(PhyllostachysSiet.EtZucc)竹种的叶为原料，经提取、精制而成的食品添加剂竹叶抗氧化物。注：用于生产食品添加剂竹叶抗氧化物的竹叶原料为被子植物门（Angiospermae）、单子叶植物纲（Monocotyledonae）、禾本目（Graminales）、禾本科（Graminae）、竹亚科（Bambusoideae）、刚竹属（Phyllostachys）品种1～2年生的叶子。2分类竹叶抗氧化物根据其溶解性分为水溶性产品和脂溶性产品。其水溶性产品的主要有效成分为竹叶碳苷黄酮（异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷）和对香豆酸、绿原酸等；脂溶性产品的主要有效成分为对香豆酸、阿魏酸、苜蓿素以及竹叶黄酮的酯化产物等。3主要成分的化学名称、结构式、分子式和相对分子质量3.1异荭草苷3.1.1化学名称5,7,3′,4′-四羟基黄酮-6-C-葡萄糖苷3.1.2分子式C21H20O113.1.3结构式3.1.4相对分子质量448.38（按2007年国际相对原子质量）3.2对香豆酸GB30615—201423.2.1化学名称3-（4-羟基苯基）-2丙烯酸3.2.2分子式C9H8O33.2.3结构式3.2.4相对分子质量164.16（按2007年国际相对原子质量）4技术要求4.1感官要求：应符合表1的规定。表1感官要求项目要求检验方法色泽黄色至黄棕色或黄褐色，吸湿时色渐变深取适量试样置于50mL烧杯中，在自然光下观察色泽和状态，嗅其气味气味水溶性产品具有典型的竹叶清香；脂溶性产品清香淡、略带酯味状态粉末状，允许有少量颗粒4.2理化指标：应符合表2的规定。表2理化指标项目指标检验方法水溶性脂溶性总酚,w/%≥40.020.0附录A中A.4异荭草苷,w/%≥2.0—附录A中A.5对香豆酸,w/%≥—0.5附录A中A.6水溶解度（25℃）/(g/100g)≥6.0—附录A中A.7乙酸乙酯溶解度（25℃）,(g/100g)≥—3.0附录A中A.8灼烧残渣,w/%≤5.03.0附录A中A.9干燥减量,w/%≤8.0GB5009.3总砷(以As计)/（mg/kg）≤3.0GB/T5009.11或GB/T5009.76铅（Pb）/（mg/kg）≤2.0GB5009.12或GB/T5009.75注：水溶性产品可用糊精稀释。GB30615—20143附录A检验方法A.1安全提示本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，操作时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风柜中进行。A.2一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质标准溶液、制剂及制品,在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。实验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.3鉴别试验A.3.1化学试剂鉴别A.3.1.1试剂和材料A.3.1.1.1乙醇水溶液（95+5）。A.3.1.1.2三氯化铁乙醇溶液：10g/L。A.3.1.1.3三氯化铝乙醇溶液:10g/L。A.3.1.2鉴别方法A.3.1.2.1称取约0.5g试样溶于100mL乙醇中，取此溶液1mL滴加2～3滴三氯化铁乙醇溶液，溶液显深蓝色或蓝紫色。A.3.1.2.2称取约0.5g试样溶于100mL乙醇中，取此溶液1mL滴加2～3滴三氯化铝乙醇溶液，溶液显鲜黄色。A.3.2光谱学鉴别A.3.2.1红外透射光谱鉴别采用溴化钾压片法，按照GB/T6040的规定进行试验，试样的红外光谱应与对照图谱一致（对照图谱见附录B）。A.3.2.2紫外吸收光谱鉴别称取约15mg试样溶于100mL色谱纯甲醇中，在200nm～600nm波长范围内进行紫外扫描，试样的紫外光谱应与对照图谱一致（对照图谱见附录C）。A.3.3有效成分分析及其指纹图谱A.3.3.1方法提要GB30615—20144试样用色谱纯甲醇溶解，以乙腈-乙酸水溶液（1+99）为流动相，用以C18为填料的液相色谱柱和紫外检测器或二级管阵列检测器，用含异荭草苷、荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸等八个对照品的标准图谱和试样图谱进行对照，确定竹叶抗氧化物产品的有效成分及类别差异。A.3.3.2试剂和材料A.3.3.2.1乙腈（色谱纯）。A.3.3.2.2甲醇（色谱纯）。A.3.3.2.3冰乙酸（优级纯）。A.3.3.2.4水（超纯水）。A.3.3.2.5异荭草苷、荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸标准品：纯度≥98.0%。A.3.3.2.6混标溶液：分别称取上述8个对照品（A.3.3.2.5）各5mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至10mL，混匀，置冰箱中保存，此溶液为八个对照品的混标溶液。A.3.3.3仪器和设备A.3.3.3.1高效液相色谱仪。A.3.3.3.2紫外光检测器：可变波长。A.3.3.3.3数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。A.3.3.4参考色谱条件推荐的色谱柱及典型操作条件见表A.1，竹叶抗氧化物指纹图谱测定典型高效液相色谱图见附录D中D.1和D.2。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。表A.1色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱C18ODS柱，柱长250mm，内径4.6mm，内装C18填充物，粒径5µm或是相当者柱温/oC40流动相A.乙腈；B.乙酸水溶液（1+99）梯度洗脱条件0min～15min，A15%，B85%；15min～25min，A15%～40%，B85%～60%；25min~34min，A40%，B60%；34min～40min，A40%～15%，B60%～85%流动速度/（mL/min）1检测器检测波长/nm330进样量/μL10A.3.3.5分析步骤A.3.3.5.1试样处理准确称取试样100mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至100mL，经微孔滤膜（0.45µm）过滤，即得试样溶液。A.3.3.5.2试样测定准确吸取试样溶液10μL，在规定色谱条件下，进行色谱分析，以保留时间定性。试样的高效液相色谱图应与对照图谱一致（对照图谱见附录D）。A.4总酚测定A.4.1方法提要GB30615—20145福林（Folin）试剂在碱性条件下极不稳定，可使酚类化合物还原而呈蓝色反应。在对羟基苯甲酸浓度0.0005mg/mL～0.016mg/mL范围内，其浓度与吸光度符合比尔定律，可用对羟基苯甲酸为对照品进行定量比色测定得试样的总酚含量。A.4.2试剂和材料A.4.2.1乙醇水溶液（3+7）。A.4.2.2乙醇水溶液（9+1）。A.4.2.3碳酸钠溶液：200g/L。A.4.2.4对羟基苯甲酸标准品：纯度≥98.0%。A.4.2.5对羟基苯甲酸标准溶液：0.250mg/mL，称取干燥至恒重的对羟基苯甲酸标准品25.0mg，用乙醇水溶液（A.4.2.1）溶解并定容至100mL。A.4.2.6福林试剂（自行配制或外购）：于2000mL磨口烧瓶中放入100g钨酸钠（Na2WO4•2H2O）、25g钼酸钠（Na2MoO4•2H2O）、700mL水、50mL85%磷酸（H3PO4）、100mL盐酸，小火沸腾回流10h，去除冷凝器后，加入50g硫酸锂（Li2SO4）、50mL水和数滴溴水（99%），摇匀，在通风柜内进行，再煮沸15min以去除过量的溴，冷却后加水定容至1000mL，混合均匀，过滤。试剂呈金黄色，储存于棕色瓶内，使用时以1份原液于2份水稀释均匀。A.4.3仪器和设备A.4.3.1分光光度计。A.4.3.2万分之一电子天平：感量0.0001g。A.4.3.3移液枪（或移液管）。A.4.3.4容量瓶。A.4.4测定步骤A.4.4.1试样处理准确称取竹叶抗氧化物试样100mg（精确至0.0001g），水溶性产品用乙醇水溶液（A.4.2.1）溶解并定容至100mL，脂溶性产品用少量乙醇水溶液（A.4.2.2）溶解后、再用乙醇水溶液（A.4.2.1）定容至100mL；用定性滤纸过滤，即得试样溶液。A.4.4.2标准曲线的绘制准确吸取对羟基苯甲酸标准溶液0mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.80mL、1.20mL，相当于对羟基苯甲酸0mg、0.0125mg、0.025mg、0.050mg、0.10mg、0.20mg、0.30mg移入25mL具塞试管中，分别用水稀释至10.0mL；各加入1.0mL福林试剂和2.0mL20%碳酸钠溶液，试管在50℃±1℃的恒温水浴中加热30min，然后用水冷却并稀释至25mL。室温放置30min，用1cm比色杯测定745nm的吸光度。以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线或求取线性回归方程。A.4.4.3试样测定准确吸取试样溶液1mL，按上述标准曲线制作中的操作步骤（A.4.4.2）于745nm处进行吸光度测定。根据标准工作曲线，求出相当于试样吸光度的对羟基苯甲酸含量。A.4.5结果计算总酚（以对羟基苯甲酸计）的质量分数w1按公式（A.1）计算：GB30615—20146100×××=)(1221vmvm%w1………………………………………………（A.1）式中：m1——依据标准曲线计算出的待测液中总酚含量的数值，单位为毫克（mg）；v2——待测液总体积的数值，单位为毫升（mL）；m2——供试样取样质量的数值，单位为毫克（mg）；v1——待测液分取体积的数值，单位为毫升（mL）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过5.0％。A.5异荭草苷测定A.5.1方法提要试样经甲醇溶解，以乙腈-乙酸水溶液（1+99）为流动相，用以C18为填料的液相色谱柱和紫外检测器或二极管阵列检测器，对试样中的异荭草苷进行反相高效液相色谱分离和测定，与标准品保留时间比较定性，峰面积外标法定量。A.5.2试剂和材料A.5.2.1乙腈（色谱纯）。A.5.2.2甲醇（色谱纯）。A.5.2.3冰乙酸（优级纯）。A.5.2.4水（超纯水）。A.5.2.5异荭草苷标准品：纯度≥98.0%。A.5.2.6异荭草苷标准溶液：准确称取异荭草苷标准品5mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至10mL，混匀，置冰箱中保存。此溶液1mL含异荭草苷0.5mg。A.5.3仪器和设备A.5.3.1高效液相色谱仪。A.5.3.2紫外光检测器：可变波长。A.5.3.3数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。A.5.4参考色谱条件推荐的色谱柱及典型操作条件见表A.2，其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。表A.2色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱C18ODS柱，柱长250mm，内径4.6mm，内装C18填充物，粒径5µm或是相当者柱温/oC40流动相A.乙腈；B.乙酸水溶液（1+99）梯度洗脱条件0min～15min，A15%，B85%；15min～25min，A15%～40%，B85%～60%；25min~34min，A40%，B60%；34min～40min，A40%～15%，B60%～85%流动速度/（mL/min）1检测器检测波长/nm330进样量/μL10GB30615—20147A.5.5分析步骤A.5.5.1试样处理准确称取竹叶抗氧化物试样100mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至100mL，经微孔滤膜（0.45µm）过滤，即得试样溶液。A.5.5.2标准曲线的绘制准确吸取一定量的异荭草苷标准溶液，分别稀释4、8、10、16、20和40倍，进样10μL，在规定色谱条件下，进行色谱分析。根据异荭草苷标准溶液的不同进样量及相应谱峰面积，以色谱峰面积为纵坐标、异