SN∕T 4675.32-2022 进出口葡萄酒中羧甲基纤维素钠的测定 分光光度法

ICS67.050CCSC53中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4675.32—2022进出口葡萄酒中羧甲基纤维素钠的测定分光光度法Determinationofsodiumcarboxymethylcellulose(CMC-Na)inwinesforimportandexport—Spectrophotometry2022-03-14发布2022-10-01实施中华人民共和国海关总署发布前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件是SN/T4675的第32部分。SN/T4675已经发布了以下部分:———第1部分:出口葡萄酒中甘油的测定酶法;———第2部分:出口葡萄酒中2,3-丁二醇的测定气相色谱法;———第3部分:出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定;———第4部分:出口葡萄酒中乳酸的测定酶法;———第5部分:出口葡萄酒中有机酸的测定离子色谱法;———第6部分:出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定;———第7部分:出口葡萄酒中乙醛的测定气相色谱-质谱法;———第8部分:出口葡萄酒中5-羟甲基糠醛的测定液相色谱法;———第9部分:出口葡萄酒中二甘醇的测定气相色谱-质谱法;———第10部分:出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法;———第11部分:出口葡萄酒中7种花色苷的测定超高效液相色谱法;———第12部分:出口葡萄酒中溶菌酶的测定液相色谱法;———第13部分:出口葡萄酒中2,4,6-三氯苯甲醚残留量的测气相色谱-质谱法;———第14部分:出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法;———第15部分:出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法;———第16部分:出口葡萄酒中富马酸的测定液相色谱-质谱/质谱法;———第17部分:出口葡萄酒中丁基锡含量的测定气相色谱-质谱/质谱法;———第18部分:出口葡萄酒中二硫代氨基甲酸酯残留量的测定顶空气相色谱法;———第19部分:出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定;———第20部分:出口葡萄酒中稀土元素的测定电感耦合等离子体质谱法;———第21部分:出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定离子色谱法;———第22部分:出口葡萄酒中总二氧化硫的测定比色法;———第23部分:出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法;———第24部分:出口葡萄酒福林肖卡指数的测定分光光度计法;———第25部分:出口葡萄酒颜色的测定CIE1976(L*a*b*)色空间法;———第26部分:出口葡萄酒浊度的测定散射光法;———第27部分:出口葡萄酒碱性灰分的测定;———第28部分:出口葡萄酒中细菌、霉菌及酵母的计数;———第29部分:出口葡萄酒中酒香酵母检验实时荧光PCR法;———第30部分:出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验SYBRGreenI荧光PCR法;———第31部分:出口葡萄酒中丙三醇碳稳定同位素比值的测定液相色谱-稳定同位素比值质谱法;———第32部分:进出口葡萄酒中羧甲基纤维素钠的测定分光光度法。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国北戴河海关、华南农业大学、中华人民共和国杭州海关。本文件主要起草人:张昂、齐鹏宇、王圣仪、刘亚新、杨志伟、雷红涛、谢文、陈瑞、王飞、张进杰。ⅠSN/T4675.32—2022进出口葡萄酒中羧甲基纤维素钠的测定分光光度法1范围本文件规定了葡萄酒中羧甲基纤维素钠的分光光度测定方法。本文件适用于进出口葡萄酒(白葡萄酒、桃红葡萄酒、红葡萄酒等)中羧甲基纤维素钠的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4方法提要通过沉降、透析等处理从葡萄酒中分离出羧甲基纤维素钠,其在酸性介质中水解生成的乙醇酸降解成甲醛,甲醛与2,7-二羟基萘在100℃的浓硫酸中反应生成紫蓝色的2,2,7,7-四羟基二萘甲烷(图1),在540nm处有特征吸收;以福林酚法间接定量样品中的基体干扰,扣减基体干扰后与标准比较进行定量。图1羧甲基纤维素钠与2,7-二羟基萘的反应过程5试剂和材料除非另有说明,本文件中所用试剂均为分析纯,实验用水为符合GB/T6682规定的一级水。5.1浓硫酸。1SN/T4675.32—20225.2氯化钠。5.3氢氧化钠。5.4碳酸钠。5.5浓盐酸:质量分数为37.5%。5.6酒石酸钾钠。5.7五水硫酸铜。5.8无水乙醇。5.9福林酚试剂(1mol/L)。5.102,7-二羟基萘(CAS号582-17-2,C10H8O2):色谱纯,纯度大于等于98%。5.11氯化十六烷基吡啶(CAS号6004-24-6,C21H38ClN·H2O):纯度大于等于99%。5.12羧甲基纤维素钠(CAS号9004-32-4,[C6H7O2(OH)2OCH2COONa]n):平均黏度为400mPa·s~1000mPa·s,取代度为0.60~0.95,纯度大于等于99%。5.130.2mol/L氯化钠溶液:称取11.7g氯化钠(5.2),用水溶解并定容至1L。5.140.4mol/L氢氧化钠溶液:称取16.0g氢氧化钠(5.3),用水溶解并定容至1L。5.158%碳酸钠溶液:称取80.0g碳酸钠(5.4),用水溶解并定容至1L。5.160.05mol/L盐酸:取4.17mL浓盐酸(5.5),用水稀释并定容至1L。5.174%酒石酸钾钠溶液:称取4.0g酒石酸钾钠(5.6),用水溶解并定容至100mL。5.182%五水硫酸铜溶液:称取2.0g五水硫酸铜(5.7),用水溶解并定容至100mL。5.190.05%二羟基萘溶液:称取0.5g(精确至0.001g)2,7-二羟基萘(5.10),用浓硫酸(5.1)溶解并定容至1L,28℃水浴中避光放置4h(正常呈浅蓝灰色,若泛红色,需重新配制),转至棕色试剂瓶中4℃贮存,有效期1个月。5.200.1%氯化十六烷基吡啶溶液:称取1.0g氯化十六烷基吡啶(5.11),用氯化钠溶液(5.13)溶解并定容至1L。5.21Lowry试剂:等体积0.4mol/L氢氧化钠溶液(5.14)与8%碳酸钠溶液(5.15)混合得试剂Ⅰ;等体积4%酒石酸钾钠溶液(5.17)与2%五水硫酸铜溶液(5.18)混合得试剂Ⅱ;试剂Ⅰ与试剂Ⅱ按体积比50∶1混匀得Lowry试剂,即配即用。5.22羧甲基纤维素钠标准储备液:称取0.1g(精确至0.0001g)羧甲基纤维素钠(5.12),用水溶解并定容至100mL,即储备液浓度为1mg/mL,4℃贮存,有效期1个月。5.23羧甲基纤维素钠标准工作液:分别吸取羧甲基纤维素钠储备液(5.22)0mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL,用水定容至100mL,对应溶液质量浓度分别为0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、30.0mg/L、40.0mg/L、50.0mg/L,现配现用。5.24基体干扰物质(Matrixinterference,以下简称MI)母液:基体干扰物质由实验室自制,制备方法见附录A。称取0.1g(精确至0.001g)MI,用水溶解并定容至100mL,4℃贮存,有效期1个月。5.25MI工作液:分别吸取MI母液(5.24)0mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL,用水定容至100mL,对应质量浓度分别为0mg/L、20.0mg/L、40.0mg/L、60.0mg/L、80.0mg/L、100.0mg/L,4℃贮存,即配即用。5.26透析袋(截留分子量6000Da~8000Da,MD:44mm):使用前裁剪成长度8.0±0.5cm的小段,置于烧杯中加适量水,煮沸10min,换水后备用,临用时处理。6仪器与设备6.1紫外可见分光光度计(波长范围含420nm、540nm、640nm),配光程为0.5cm石英比色杯。6.2离心机:转速不低于10000r/min。2SN/T4675.32—20226.3恒温水浴锅。6.4电子天平:感量为0.0001g。6.5旋涡混合器。6.6旋转蒸发仪。7分析步骤7.1标准曲线的制作7.1.1羧甲基纤维素钠标准曲线的制作取系列浓度羧甲基纤维素钠标准工作液(5.23)各2.0mL,装入透析袋(5.26)中,将透析袋放入装有2.0L水的烧杯中,透析15h,取0.5mL透析后工作液于20mL具塞玻璃试管,加入2,7-二羟基萘溶液(5.19)4.5mL,涡旋混匀,置沸水浴中2.0h,其间每0.5h震荡试管,反应结束后冷却至室温。以0mg/L反应液调零,分别于420nm和540nm处测得吸光值A420和A540,以标准工作液浓度为横坐标,吸光度差值Δ(A540-A420)为纵坐标,绘制羧甲基纤维素钠的标准曲线L1。7.1.2基体干扰物质工作曲线的制作7.1.2.1取系列MI工作液(5.25)0.50mL,加入0.5mL水,再加入Lowry试剂(5.21)1.0mL,涡旋混匀,25℃水浴中反应10min,再加入0.2mL福林酚试剂(5.9),2s内混匀,25℃水浴中反应30min,以0mg/L反应液调零,以MI浓度为横坐标,640nm处吸光值为纵坐标,绘制工作曲线L2。7.1.2.2取系列MI工作液(5.25)0.50mL于20mL具塞玻璃试管,加入2,7-二羟基萘溶液(5.19)4.5mL,反应条件同7.1.1;以0mg/L反应液调零,以MI浓度为横坐标,以420nm和540nm处吸光值为纵坐标,分别绘制420nm和540nm下的工作曲线L3和L4。7.2样品前处理取1.0mL(V1)样品(起泡葡萄酒需超声脱气5.0min)于10mL离心管中,加入1.5mL0.1%氯化十六烷基吡啶溶液(5.20),混匀后室温下静置20min,再加入5.0mL无水乙醇(5.8),静置15min,9000r/min离心15min,弃去所有液体,沉淀用2.0mL0.05mol/L盐酸溶液(5.16)复溶并转移至透析袋(5.26)中,透析条件同7.1.1,将透析后样品用移液管转入试管中,记录体积记为V2。注:透析体积和容器视实际情况选择,确保每毫升样品15h内使用2.0L水,可使用磁力搅拌,下同。8试样测定取0.5mL透析后样品于20mL具塞玻璃试管,加入2,7-二羟基萘溶液(5.19)4.5mL,反应条件同7.1.1,分别得到420nm和540nm处吸光值A1和A2。再取0.5mL透析后样品,加入0.5mL水,再加入Lowry试剂(5.21)1.0mL,涡旋混匀,25℃水浴中反应10min,再加入0.2mL福林酚试剂(5.9),2s内混匀,反应条件同7.1.2.1,测得640nm处下吸光值,代入标准曲线L2中得到样品中相当于MI的基体干扰浓度CMI,将CMI分别代入标准曲线L3、L4,得到基体干扰分别在420nm和540nm下吸光值A3和A4。计算测试样品和样品中基体干扰在相同波长下的吸光值之差(A1-A3)和(A2-A4),分别记为ΔA420和ΔA540,求得吸光度差值Δ=ΔA540-ΔA420,将Δ代入标准曲线L1得到透析后样品中待测物的浓度c,平行测定次数不少于两次。3SN/T4675.32—20229结果计算结果按式(1)计算:X=c×V2/V1…………………………(1)式中:X———试样中羧甲基纤维素钠的含量,单位为毫克每升(mg/L);c———由标准曲线L1得出的样液中羧甲基纤维素钠的浓度,单位为毫克每升(mg/L);V1———测定时所用试样的体积,单位为毫升(mL);V2———透析后样品的体积,单位为毫升(mL)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定