流感病毒RT-PCR检测方法培训

呼吸道标本采集、运送及保存北京市CDC传地所石伟先2009年9月21日标本采集采集时间----何时采采集种类----采什么采集方法----怎么采标本的种类首选标本上呼吸道标本咽后壁拭子鼻咽拭子下呼吸道标本:气管吸取液或肺泡灌洗液血样:血清(急性期和恢复期血清)。标本的采集时限症状出现后尽早采集尽量在抗病毒药物使用前采集即使症状出现1周后也要采集可能的情况下多天多次采集标本的采集方法1.准备采集物品包2.如何采集标本采集物品包装好VTM的样品采集管聚酯纤维拭子痰或粘液吸取管压舌板采样杯或平皿吸管其它样品管冰袋PPE防水的Marker笔,用于标本的标记病毒运输液(VTM)用于咽拭和鼻拭的VTM:MEM、EMEM、DMEMPH7.4-7.6Hank’s庆大霉素(终浓度为1mg/ml)两性霉素B(终浓度为2μg/ml)在无菌的带螺旋塑料管分装2-3mlVTM。最好储存在:–20℃,4℃可放48–96h,室温1–2天。个人防护设备（PPE）口罩(N-95orN/P/R-100)手套帽子鞋套防护服(gownorapron)如何采集样本1.咽拭子容易操作请病人尽量把嘴张开当拭子触及咽后壁时病人不要往后躲，应该抵住病毒采样盒咽拭子器具咽拭子标本采集方法—咽拭子干采用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml采样液的螺口管中，尾部弃去，旋紧管盖。例子correctwrong标本采集方法—鼻拭子将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔。上述两根拭子浸入同一含3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。3.鼻咽吸取液的收集1.将吸液管与真空泵相连2.将软管与上腭平行插入鼻孔3.使用真空泵4.缓慢的移出同时轻轻旋转5.使用同一个管子采集另一鼻孔的液体6.收集的液体用3mlVTM冲洗出，放入采样管中标记样品被采样者的信息样品采集的日期样品采集的部位样本编号采集单位如何保存样品VTM中保存的样品尽快运到实验室48小时内可以检测的可以保存在4℃，超过48小时-70℃冻存。流感病毒在-20℃～-40℃时不稳定，故长期保存应在-70℃温度以下，不要冻存于-20℃，会降低流感病毒的检出率。避免反复冻融冰上一周也比冻融一次要好标本的包装和运输疑似人感染甲型H1N1流感感染病例列为A类，用UN2814包装运输—《甲型H1N1流感监测方案》附录3《甲型H1N1流感病毒实验室检测技术方案》2009年5月11日IATA对感染性物质的运输分类A类指人感染后发病的可能性大，传染性强，对人群危害性大的烈性感染性物质。高度怀疑具有严重危害性的感染性物质也属于A类。A类感染性物质感染性物质[联合国编号UN2814和UN2900(只导致动物致病)]采用PI602包装要求。A类之外，仅具有一般危险性，引起感染的机会较少的感染性物质为B类(联合国编号UN3373),采用PI650包装要求。感染性物质运输的包装系统三层包装系统：内层容器，中层包装外层包装。基本包装内层容器(装有样本)中层包装(含吸水性材料)外层包装内层容器标记合适的材料封口防漏防渗裹以软垫或分隔多个内层容器，防止碰撞破碎中层包装包含裹有软垫的内层容器吸水性材料防漏防渗外层包装放入中层容器内容物名细单封箱标识CategoryAINFECTIOUSSUBSTANCEIncaseofdamageorleakageImmediatelynotifyPublicHealthauthority流感样品的运输采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在－70℃以下保存。无－70℃条件的需在－20℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。标本需由专人运送，不得邮寄，最好使用专车。谢谢!