科晓仪器色谱培训班资料(二)

科晓仪器色谱培训班资料（二）液相色谱仪维护手册科晓仪器济南分公司色谱技术服务中心地址：济南市华能路19号446室中国(济南)留学人员创业园二期电话：[phone]转801传真：[phone]网址：杭州科晓化工仪器设备有限公司济南分公司色谱仪-金牌服务专业经营：色谱仪及其它实验室设备★GC1690型高性能气相谱仪全国范围2005年销量达350台★上海伍丰LC-100系列高效液相色谱仪一级经销商及售后服务点★上海精密科学仪器有限公司色谱及光谱产品华东、华中总代理及服务中心★兰化所毛细管柱及大连依利特液相色谱柱山东、河北、河南地区代理★上海海欣、上海科创、温岭福立、山东鲁南等色谱仪的经销及维修★上海雷磁、安亭、博迅、恒平、亚荣等厂家特约经销及维修点★岛津、安捷伦气液相色谱仪、普析通用光谱仪特约经销及维修点★国内外数十种实验室分析仪器销售及售后服务点★气、液相色谱仪配件及耗材供应站（批发和零售）新型的GC1690型气相色谱仪(科晓公司生产)1690型气相色谱仪是科晓仪器公司采用国际先进技术，整合国内气相色谱仪的优点，而研发出的最新一代气相色谱，具有优异的性能和极高的性价比，标志着国产仪器已经达到一个新的水平。上海精密科学仪器有限公司分析仪器(总代理)作为国产分析行业龙头老大，以市场导向、规范管理、品质领先、追求卓越为企业追高目标,为市场和新老客户提供值得信赖的优异产品。上海伍丰LC-100系统高效液相色谱仪(总代理)科晓公司作为上海伍丰LC-100系列S-HPLC智能全控制液相色谱仪总代理，为了将这款优异的新型产品介绍给更多的新老客户，特举行增值派送活动回报社会！科晓仪器----精诚服务联系电话：0531-8803236288034128技术服务中心:0531-88039532-809科晓化工仪器有限公司色谱技术培训资料高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程1)．严格过滤色谱纯流动相，根据需要选择不同的滤膜。2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气20-30分钟。3)．打开色谱工作站，连接好流动相管道，连接检测系统。4)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，冲洗时速度不要超过10ml/min。5)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000psi。选用合适的流速。6)．设定不同样品的检测器分析参数。7)．等基线走稳即可进样分析，分析样品时对样品的前处理非常重要。8)．关机时，先关检测器，泵不要关掉，应改用流动相冲洗泵，不同的流动相冲洗时间不同，一般冲洗30min，若是缓冲盐作流动相应先用水冲洗30min，再用纯甲醇冲洗。9)．然后关液相泵。10)．需要把进样阀冲洗干净，另把注射器等工具清理整洁。11)．填写登记本，由负责人签字。注意事项：1.首先必须是HPLC级的，这一条相信大家都做到了。2.脱气。由于流动相里含有微量空气，经泵的压力作用，会在流通池里产生气泡，这对分析产生一定的影响，如噪音增大，甚至于掩盖信号峰。因此，流动相在使用前必须经超声脱气20分钟以上。3.过滤。由于流动相里有很微小的垃圾，如不经过过滤，偶尔会卡在单向阀门中，从而产生压力波动。这一点很多用户不太注意，等到产生压力波动又不知道什么原因产生的。科晓仪器----精诚服务联系电话：0531-8803236288034128技术服务中心:0531-88039532-809科晓化工仪器有限公司色谱技术培训资料如何选择液相色谱仪一台品质优良的液相色谱系统应从以下几个方面考虑：一．主要技术指标优异：首先是如何看指标。液相色谱仪的指标很多，有泵的、检测器的、色谱柱等等。我们认为要看主要技术指标，根据国家标准，仪器的主要指标有噪音，漂移，最小检测浓度，定性定量重复性等。这些指标都要放在系统，回路里去看，去比较。就是需要把各单元装置都要联接好，如接好色谱柱，进样阀，并且要通上流动相。因为您在分析中也都是联接好以后才可以进行分析的，而不是单单用个检测器或是泵的。然后在这个基础上，我们再去比较这些主要指标。1．噪音是指由仪器的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动。噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度，噪音越大，检测的灵敏度就越低。对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好，否则噪音过大将会导致基线不稳，甚至影响分析结果。2．最小检测浓度（最小检测限）是反映仪器灵敏度的重要参数。CL=2×Nd×C/H（CL：最小检测浓度Nd:噪音C：样品浓度最小检测浓度H：样品峰高）由上式可见，最小检测浓度是和噪音成正比的，噪音越大，最小检测浓度就越大，灵敏度就越低。某些厂家回避了这个指标，说明他们不愿在最小检测浓度的基础上去比较噪音。3．漂移是指仪器稳定后一段时间内基线漂离原点的距离，通常用来衡量仪器稳定快慢。高品质的仪器能在较短的时间内达到稳定，从而在一定程度上提高了分析效率。4．定性定量重复性主要是考核仪器稳定性的指标，这对于分析样品来说是非常重要的。好的仪器其稳定性应该是十分优秀的，这就要求多次进样保留时间及含量的一致性，这样做出来的结果才能使人信服。有的朋友会认为这些指标好像都是检测器的。对的，但是就前面所说条件是要放在整个回路和系统里去看去比较。例如：泵的脉动会直接影响噪音指标，泵的流量准确度、精确度指标，以及密封性不好也会影响相关指标。所以要系统地看指标。例如：某些公司在公布的指标中，噪音和漂移指标写的条件是空池或有的干脆不写。这个指标只考核了UV检测器光学和电气的特性，与实际情况相差甚远，并没有考验泵的压力脉动，液流回路的阻尼和UV检测器流通池的性能。所以我们认为从以上的主要指标中可以反应出仪器的一些真实水平。二．操作方便：操作方便性无论是对新手还是成熟的用户都是很重要的。操作越简单，有利于提高分析效率，也为以后分析方法的拓展提供有力的帮助。上海伍丰科学仪器有限公司的WS-100工作站软件实科晓仪器----精诚服务联系电话：0531-8803236288034128技术服务中心:0531-88039532-809科晓化工仪器有限公司色谱技术培训资料现了真正的智能化操作。它摒弃了以往工作站软件只能起到数据处理的理念，率先在国内推出了集控制与后处理于一身的软件，在操作使用上给用户带来了极大的方便。三．系统的，整体开发这里指的是仪器的整体开发，是一个完整的系统。目前市场上有这个现象，说我的泵是进口的，或者是检测器怎么好，用了什么很多的进口件组装等等。其实这是个误区。液相色谱是个复杂的系统，不是整体开发的，各项指标之间、软件和硬件、硬件和硬件等都不匹配，整体水平不会高到哪里去，而且在售后服务方面对用户也是不负责任的。整体开发的主要优点有：各项技术指标统一、仪器各单元的通信协调、能够建立一个整体的数字化评价系统、体现了企业的科技及开发实力。国外知名的仪器生产厂家的产品也是整体开发的，所以能够保证仪器的整体水平。四．稳定可靠，故障率低这个大家都知道，就不多说了。从以上各方面比较，伍丰仪器的LC-100智能液相色谱系统完全符合一台优秀仪器的所有特点，代表了目前国产液相色谱的真正水平。高效液相色谱系统中气泡对检测的影响及其解决方法在我们进行液相色谱分析时，有时会遇到这样一个问题：系统的流路中存在气泡。由于气泡的存在，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。造成上述现象的主要原因有三条：一是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡；二是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净；三是在注入样品时不注意混入了空气。为了避免这类问题的出现，液相色谱实际分析过程中必须重视对流动相进行脱气处理。常用的脱气方法有以下几种：1.吹氦脱气法使用在液体中比空气溶解度低的氦气，在0.1Mpa压力下，以约60ml/min流速通入流动相10-15min以驱除溶解的气体。此法使用于所有的溶剂，脱气效果较好，但在国内因氦气价格较贵，本法使用较少；2.加热回流法此法的脱气效果较好；3.抽真空脱气法此时可使用微型真空泵，降压至0.05-0.07MPa即可除区溶解的气体。显然使用水泵连接抽滤瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成过滤机械杂质和脱气的双重任务。由于抽真空会引起混合溶剂组成的变化，故此法适用于单一溶剂体系脱气。对多元溶剂体系应预先脱气后科晓仪器----精诚服务联系电话：0531-8803236288034128技术服务中心:0531-88039532-809科晓化工仪器有限公司色谱技术培训资料再进行混合，以保证混合后的比例不变。4.超声波脱气法它是目前实验室使用最广泛的脱气方法，将配制好的流动相连同容器一起放入超声波水漕中脱气10-20min即可。该方法操作简便，基本能满足日常分析的要求。5.在线真空脱气法把真空脱气装置串联到储液系统中，并结合膜过滤器，实现了流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。此法的脱气效果明显优于上述几种方法，并适用于多元溶剂体系。其二，在液相色谱系统开始工作前，可以用注射器连接恒流泵的排空阀，抽入流动相，将流路中的空气驱赶干净。其三，在注入样品前注意排出样品注射器中的空气。液相色谱仪的最小检测浓度和流通池光程的关系与含义某些国产仪器在公布其技术指标时，大多只写了噪音和漂移的指标。用户觉得指标都差不多，但却忽略了另外二个较为重要的指标：最小检测浓度和光程，这二个指标有什么作用呢？它们代表了什么含义？这里来解释一下：最小检测浓度是考验仪器的灵敏度。最小检测浓度数值大，仪器的灵敏度就小，不能反应真正的噪音和漂移水平。例如：我公司的最小检测浓度小于1×10-8g/ml(萘/甲醇溶液)，而某些仪器是：4×10-8g/ml(萘/甲醇溶液)。这就说明我们的仪器灵敏度大，可以检测更微量的样品。同样如我公司仪器把最小检测浓度调较得和其它产品是一样，也就表明我们可以做得比其它产品噪音和漂移低4倍。可以从这个公式看出：最小检测浓度=2×仪器的噪音×进样的样品浓度/样品的峰高值那光程又代表什么？我们先看下面一个公式，比尔定律：A=log(I0/I)=ΕclA是吸收率；I0代表参照池的光强；I为样品池的光强；ε为摩尔吸光系数；C是样品浓度；L就是流通池的光程。可以看出在同样的C样品浓度情况下，L流通池的光程越大,仪器的A吸收率也就越大。这样可以检测到的样品浓度就越小。为什么有些厂家把仪器的流通池光程做得很小，有些只有：3.5mm、4.5mm或5.5mm，而不是我公司的8mm。这是因为这些厂家不能有效的降低整个系统的噪音和漂移水平，只能牺牲流通池光程，也就是牺牲了仪器的检测灵敏度和最小检测浓度，来达到降低噪音和漂移水平目的。用通俗的说法比喻：HPLC就是一台音响，光程就是这台音响的音量控制键，光程越小就是把音量调小了，耳朵对音响本身的噪音和失真（可以理解为仪器的噪音和漂移）感觉就越小。但也就说明了这些仪器整体系统的制造水平不高。知道了这些道理,你在挑选液相色谱仪时别忘了这二点哦.科晓仪器----精诚服务联系电话：0531-8803236288034128技术服务中心:0531-88039532-809科晓化工仪器有限公司色谱技术培训资料怎样选择色谱柱现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。一．硅胶基质填料：1.正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其它具有极性官能团,如胺基团（NH2,APS）和氰基团（CN,CPS）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其它极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组份的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正己烷（Hexane）、氯仿（Chloroform）、二氯甲烷（MethyleneChloride）