ERK促进M2巨噬细胞活化在糖尿病肾病小鼠肾脏纤维化中的作用及肾衰方大黄酸的干预机制结题汇报

《ERK促进M2巨噬细胞活化在糖尿病肾病小鼠肾脏纤维化中的作用及肾衰方（大黄酸）的干预机制》结题汇报基本信息及完成情况名称：ERK促进M2巨噬细胞活化在糖尿病肾病小鼠肾脏纤维化中的作用及肾衰方（大黄酸）的干预机制课题编号：经费：共万，目前已使用万，还有部分待报。预期考核指标：1.揭示出ERK促进M2巨噬细胞活化在糖尿病肾病肾脏纤维化中的作用及肾衰方（尤其是大黄酸）对其干预的作用机制。2.发表核心期刊论文篇。已完成考核指标：科技报告篇、研究报告篇、培养研究生名、已发表SCI论文篇、待发表中文核心期刊篇。研究目的及方法目的：研究巨噬细胞替代活化在糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化中的作用及肾衰方对其干预机制。方法：1）动物模型制作：28只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（n=4），DN模型对照组（n=4）；肾衰方低剂量组（低剂量组）（n=4）；肾衰方中剂量组(中剂量组)（n=5）；肾衰方高剂量组（高剂量组）（n=5）；厄贝沙坦对照组（厄贝沙坦组）（n=6）。以小剂量链脲佐菌素+高脂饮食诱导糖尿病肾病模型。造模成功后低剂量组每日以肾衰方1.3g/100g体重灌胃治疗，中剂量组每日以肾衰方2.6g/100g体重灌胃治疗，高剂量组每日以肾衰方5.2g/100g体重灌胃治疗，厄贝沙坦组每日以厄贝沙坦1.38g/100g体重灌胃治疗，DN模型对照组组、正常对照组每日以生理盐水1.3g/100g体重灌胃。2）肾衰方浓缩颗粒：生大黄9g，黄芪30g，党参15g，麦冬15g，生地12g，丹参10g，益母草15g，茯苓15g，丹皮12g，淫羊藿10g，炙甘草3g，购自。3）各组大鼠肾组织病理学检验方法如下：形态学检测：HE染色M2巨噬细胞半定量检测：CD68、CD206免疫组化染色肾间质纤维化指标定量检测：Fibronectin、Collagen-ⅣWestern-Blotting检测结果1）与正常对照组相比，DN组大鼠肾小球体积增大，毛细血管增生，基底膜增厚，巨噬细胞趋化因子MCP-1、ICAM-1表达增多，伴有巨噬细胞（CD68阳性细胞）渗出增多、且以表达CD206的M2型巨噬细胞渗出增多、导致纤维化产物Fibronecin、CollagenIV表达随之增多。2）经肾衰方治疗后，DN大鼠上述病理改变减轻，以高剂量组及厄贝沙坦组减低最为显著。West-Blotting方法检测各组大鼠肾脏MCP-1、ICAM-1、Fibronecin的蛋白表达证实上述病理结果。3）与DN模型对照组相比，肾衰方高剂量组、厄贝沙坦组24h尿蛋白明显减少（P＜0.01）;24h尿微量白蛋白明显减少（P＜0.01）；尿白蛋白/肌酐（ACR）明显减低。图1：各组大鼠肾组织HE染色的差别（×400）DN模型对照组大鼠肾小球体积增大，毛细血管增生，基底膜增厚，高剂量组及厄贝沙坦组上述病理改变有所减轻。图2：各组大鼠肾组织MCP-1表达的差别（×400）DN模型对照组大鼠肾脏MCP-1表达增多，以肾小球为主，高剂量组及厄贝沙坦组MCP-1表达有所减低。图3：各组大鼠肾组织ICAM-1表达的差别（×400）DN模型对照组大鼠肾脏ICAM-1表达增多，以肾小球为主，高剂量组及厄贝沙坦组ICAM-1表达有所减低。图4：各组大鼠巨噬细胞渗出情况差别（×400）A：DN模型对照组大鼠肾脏巨噬细胞（CD68+细胞）渗出增多，以肾小球为主，高剂量组及厄贝沙坦组表达有所减低。B:DN模型对照组大鼠肾脏渗出巨噬细胞以表达CD206的M2巨噬细胞为主，经肾衰方及厄贝沙坦治疗后，M2巨噬细胞渗出有所减少。CD68阳性巨噬细胞表达情况（×400）CD206阳性巨噬细胞表达情况（×400）AB图5：各组大鼠肾组织纤维化产物表达差别（×400）A:DN模型对照组大鼠纤维化产物Collagen-Ⅳ表达增多，以肾小球为主，高剂量组及厄贝沙坦组表达有所减低。B:DN模型对照组大鼠纤维化产物Fibronectin表达增多，以肾小球为主，高剂量组及厄贝沙坦组表达有所减低。Collagen-Ⅳ表达情况（×400）Fibronectin表达情况（×400）ABABC*******A：Western-Blotting示各组大鼠MCP-1表达，以DN模型对照组最高，而高剂量组及厄贝沙坦组减低。B：Western-Blotting示各组大鼠ICAM-1表达，以DN模型对照组最高，而高剂量组及厄贝沙坦组减低。C：Western-Blotting示各组大鼠Fibronectin表达，以DN模型对照组最高，而中、高剂量组及厄贝沙坦组减低。*，与DN模型组对比，P0.05图5：各组大鼠肾组织MCP-1、ICAM-1及FN表达情况表1：治疗前后各组大鼠尿白蛋白/肌酐差别组别n治疗前(ug/mg)治疗后(ug/mg)正常对照组4模型对照组4高剂量组4中剂量组5低剂量组5厄贝沙坦组6*，与正常对照组相比,治疗前各组大鼠尿微量白蛋白/尿肌酐明显增多（p0.01）；#，与模型对照组相比，治疗后各组大鼠尿微量白蛋白/尿肌酐有所减少（p0.01）。结论1）M2巨噬细胞参与了糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化。2）肾衰方通过抑制M2巨噬细胞渗出、有效缓解DN大鼠肾间质纤维化，并减低尿蛋白漏出。