广东省地方标准桉树无性系工厂化育苗

示例ICS65.020.01B61国家质量监督检验检疫总局备案号：15845-2004广东省地方标准DB44/T193—2004桉树无性系工厂化育苗MassSeedling-RaisingofEucalyptClone2004-08-23发布2004-10-23实施广东省质量技术监督局发布DB44DB44DB44DB44DB44/T193—2004I目次前言...................................................................................II1范围..................................................................................12规范性引用文件........................................................................13术语与定义............................................................................14无性系材料的选取......................................................................35桉树组织培养..........................................................................36组培苗的移栽..........................................................................57嫩枝扦插育苗..........................................................................58苗木出圃..............................................................................79工作档案..............................................................................8DB44/T193—2004II前言本标准由广东省林业局科技与对外合作处提出。本标准由广东省林业局归口。本标准起草单位：广东省林业科学研究院。本标准主要起草人：王振师、周丽华、曾雷。DB44/T193—20041桉树无性系工厂化育苗1范围本标准规范了桉树无性系工厂化育苗过程中无性系材料的选取、培养基的配制、无菌操作技术、外植体的培养、组培苗的育苗技术；规范了嫩枝扦插育苗采穗圃的建立与管理、嫩枝扦插育苗技术和苗木的质量标准等。本标准适用于国营、集体和个体的桉树无性系组培工厂、扦插育苗场。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6001-1999育苗技术规程GB/T16620-1996林木育种及种子管理术语LY/T1000-1991容器育苗技术3术语与定义下列术语和定义适用于本标准：3.1林木良种improvedmaterialofforesttree通过试验与鉴定，证明在一定造林区域内，其产量、质量、适应性、抗性等方面明显优于当前主栽材料的繁殖材料。3.2植物组织培养planttissueculture在无菌培养基上，对植物离体器官、组织或细胞进行培养，以形成再生植株或培养新的育种材料的生物技术。3.3优树superiortree,plustree在生长量、树形、抗性或在其它性状上，显著地优越于周围林木的树木。3.4幼化处理rejuvenizeDB44/T193—20042使繁殖材料保持和回复幼化状态的技术处理。3.5营养繁殖vegetativepropagation指用植物营养器官，如根、茎、叶、芽等营养体进行繁殖的系列方式。林业上的无性繁殖，通常为营养繁殖。3.6外植体culturematerial,cultures生长在培养基上的被培养的器官、组织或细胞。3.7培养基culturemedium为外植体的生长、发育提供所需物质的基质。3.8无性系clone由同一原株营养繁殖产生的植株总和。3.9母液mothersolution,motherliquid为称量准确和方便贮藏，将培养基的成份配制成相应浓度的溶液或混合溶液。3.10接种inoculation指在无菌条件下，将处理好的植物组织材料放置或插入培养基的操作过程。3.11瓶苗bottleseedling用玻璃瓶作容器，通过植物组织培养形成的完整植株的总称。3.12组培苗tissuecultureseedling通过植物组织培养过程所获得的再生植株。3.13炼苗exercisingseedling把组培生根的瓶苗从人工控制的培养环境，转移到近自然环境下培养,以提高瓶苗的木质化程度和适应自然环境能力的过程。3.14基质substrate,medium栽植组培苗或扦插育苗的基本物质。由黄心土、沙、泥炭土等材料混合而成。3.15采穗圃cuttingorchard提供优良穗条的母本种植园。3.16插穗cutting将枝条、苗干等种条截制成段，用于插条育苗和分殖造林，这种扦插材料称插穗。DB44/T193—200433.17采穗母株stockplant生产穗条的母本植株。3.18扦插cutting用植物的枝条或茎段，经处理后，插在适宜的基质中，促使其发生不定根和形成完整植株的过程。3.19嫩枝扦插shootcutting用生长健壮、半木质化的枝条进行扦插育苗的过程。3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.15、3.16引用于GB/T16620。4无性系材料的选取采用营养繁殖表现优良的桉树林木良种，作为无性系工厂化育苗生产的材料。5桉树组织培养5.1外植体5.1.1采用经幼化处理的桉树良种的枝条作为营养繁殖的外植体。5.1.2为减少接种材料的污染，采取外植体时，应选择连续三天以上晴好天气后进行。5.1.3外植体消毒5.1.3.1将外植体用自来水冲洗5分钟。5.1.3.2在无菌条件下，用75%酒精消毒(5～10)秒，无菌水冲洗2次。5.1.3.3用1g/l升汞溶液，加吐温-20两滴浸没材料，轻微摇动，消毒(2～5)分钟，再用无菌水冲洗5次。5.2培养基的配制5.2.1培养基的成分a)芽增殖培养基：在培养基中加适量细胞分裂素和生长素，促进芽增殖生长的培养基。b)根诱导培养基：在培养基中加适量植物生长素，促进生根的培养基。5.2.2母液配制5.2.2.1母液用蒸馏水配制。5.2.2.2氮、磷、钾等无机盐配制的混合溶液称为大量元素母液，硫、钙、镁、锰、铜、锌、硼等无机盐配制的混合溶液称为微量元素母液，铁盐单独配成母液，有机成分和附加成分分别配成母液。母液按相应浓度配制。配制时，各种物质要充分溶解后混合，配制好的母液置于冰箱冷藏。DB44/T193—200445.2.3培养基配制5.2.3.1依照所设计的培养基配方，按比例吸取母液注入容量瓶内，加水定容，倒进不锈钢锅内。5.2.3.2加入凝固剂和糖。5.2.3.3边加热边搅拌以免煮糊，使凝固剂和糖完全溶解。5.2.3.4用盐酸或氢氧化钠溶液调整pH值。5.2.3.5将培养基尽快分装到培养瓶内，盖好瓶盖。5.2.3.6培养基消毒加热：把分装好的瓶装培养基放入高压消毒锅中密闭、加热。排气：当消毒锅的消毒室内气压达到0.05Mpa时，打开冷凝阀，排尽消毒室内冷空气。消毒时间：当消毒室内气压达到0.11Mpa、温度达到121℃时，开始计时，保持消毒20分钟。然后关闭开关，慢慢排放热气，待消毒室内的气压表读数为0时打开消毒锅盖，取出培养基，放置到经过消毒的接种室备料间内。5.3无菌操作5.3.1接种前的准备工作5.3.1.1接种操作人员要保持自身和穿着衣物的清洁。工作前用肥皂洗手，换工作服和拖鞋，戴口罩。5.3.1.2每次接种操作前都要用75%酒精擦手消毒。5.3.2超净工作台的准备工作5.3.2.1超净工作台连续工作4小时，再次使用时要进行消毒，方法是：用消毒酒精喷洒在工作台上的工具、出风板、台面和两边玻璃，再用灭菌纱布抹一次。5.3.2.2摆放好必用物品，放到超净工作台台面上的物品都要经过消毒。5.3.2.3开启超净工作台上和接种室内的紫外灯，消毒20分钟。5.3.2.4消毒结束后，开动超净工作台风机通风15分钟。5.3.3接种5.3.3.1接种动作要轻巧快捷，接种材料与培养基接触良好，深浅适中，分布均匀。5.3.3.2接种人员在接种过程中尽量不要说话，以防细菌传播，造成接种材料污染。5.3.3.3为防交叉污染，每瓶材料接种完后，盛装过接种材料的碟子、纸张须更换，使用过的镊子、刀具用消毒纱布擦干净，高温灭菌处理后方可再次使用。5.3.3.4接种后，盖上和扭紧瓶盖，标注材料名称、接种日期。做好超净工作台的清洁工作。5.4培养条件DB44/T193—200455.4.1培养室内的温度控制在28（±2）℃。5.4.2光照强度为(2000～3000)Lx，光照时间每天(8～12)小时。5.5组培生根瓶苗质量标准苗高(2.5～3.5)cm，生长正常，根白色，根系完整。6组培苗的移栽6.1炼苗将生根瓶苗置于炼苗温室或荫棚内炼苗(10～20)天，移苗前拧松或打开瓶盖，再炼苗(4～5)天。6.2移苗基质移苗基质为过筛的黄心土。育苗容器中装好基质后，在移栽前2天用(0.05～0.10)%高锰酸钾溶液淋透消毒。6.3移苗6.3.1移苗前洗干净粘附在生根苗根上的培养基，不要损伤组培苗的幼根。6.3.2移苗在早、晚或阴天进行，移植时，把根放进预先打好的小孔中，使根系舒展，填满土充分压实，使根土密接，要防止栽植过深、窝根或露根，每个容器内移苗一株，移植后随即浇透水。6.4移栽苗的管理6.4.1栽植后用塑料薄膜作小拱盖好小苗保湿，遮荫70%左右。6.4.2适当喷雾，保持湿度(80～95)%。6.4.3为防止发生病害，移苗后当天喷防病药剂一次，以后每星期喷药一次，常用药剂和施用方法参照GB/T6001附录E。6.4.4一周后打开小拱两头的塑料薄膜，以后逐渐打开小拱两边的塑料薄膜，15天后全部打开。6.4.5移植成活后，喷雾可改为用花洒淋水。每(7～10)天淋施3g/l的尿素或复合肥的水溶液，施肥后淋一次清水冲洗叶面。6.4.6生长弱的植株，适当增加喷施3g/l的尿素或磷酸二氢钾溶液。6.5组培苗出圃质量标准苗高(10～15)cm，地径(0.2～0.3)cm，生长正常，无病虫害。7嫩枝扦插育苗7.1扦插苗圃的建立根据产苗量决定桉树扦插苗圃建设的规模，扦插苗圃要作好采穗圃的规划，苗圃的规划、建立参照DB44/T193—20046GB/T6001的要求。7.1.1扦插荫棚7.1.1.1扦插荫棚的面积根据产苗量而定，荫棚内每平方米年产苗量约为1000株。7.1.1.2棚顶覆盖遮光网，遮光度为(50～70)%。7.1.1.3扦插棚内的地面为水泥地或碎石地，两边低中间略高，以利排水。在扦插苗出棚后，要清除杂物，刷洗地板并用漂白粉或生石灰等消毒剂消毒。对重复使用的物品和工具要进行清洗和消毒。7.1.2扦插场7.1.2.1扦插场为就地扦插就地炼苗出圃，不需固定荫棚的育苗场地。7.1.2.2扦插场的地面为实地，四周稍低中间略高，苗床插苗后作小拱，上盖遮光网，遮光度(60%～70%)，待扦插苗大部分生根后揭开遮光网，就地炼苗出圃。7.2育苗容器7.2.1塑料薄膜育苗袋：用厚度(0.02～0.06)mm的无毒塑料薄膜加工制作而成，在育苗袋的中下部