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中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准动物性食品中10种利尿药残留量的测定液相色谱-串联质谱法04中华人民共和国国家标准备案号:XXXX-XXXXICS67.050X31658.25—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationoftendiureticsresiduesinanimalderivedfoodsbyliquidchromatography-tandemmassspectrometryGB2022 09 20发布--2023 02 01--实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB3165825—2022前 言本文件按照GB/T11—2020«标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB3165825—2022食品安全国家标准动物性食品中10种利尿药残留量的测定液相色谱G串联质谱法1 范围本文件规定了动物性食品中10种利尿药残留量的制样和液相色谱G串联质谱测定方法.本文件适用于猪、牛、羊、鸡、鸭的肌肉、鸡蛋和牛奶中乙酰唑胺、4G氨基G6G氯苯G1,3G二磺酰胺、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氯噻酮、呋塞米、卞氟噻嗪、氨苯蝶啶、螺内酯、坎利酮10种利尿药残留量的测定.2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.4 原理试样经乙腈G水溶液提取,正己烷除脂,反相混合型亲水亲脂固相萃取柱净化,液相色谱G串联质谱仪测定,内标法定量.5 试剂与材料除另有规定外,所有试剂均为色谱纯,水为符合GB/T6682规定的一级水.51 试剂511 乙腈(CH3CN).512 甲醇(CH3OH).513 正己烷(C6H14).514 二甲基亚砜(C2H6OS).515 乙酸铵(CH3COONH4).52 溶液配制521 90%乙腈水溶液:取乙腈900mL,加水稀释至1000mL.522 50%乙腈水溶液:取乙腈50mL,加水稀释至100mL.523 5mmol/L乙酸铵缓冲溶液:取乙酸铵0385g,加水溶解,稀释至1000mL.524 90%乙腈甲醇溶液:取甲醇10mL,用乙腈稀释至100mL,混匀.525 乙腈饱和正己烷溶液:取相同体积的乙腈和正己烷,置于分液漏斗中,振荡,静置分层,取上层溶液.53 标准品531 利尿药标准品:乙酰唑胺、4G氨基G6G氯苯G1,3G二磺酰胺、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氯噻酮、呋塞米、卞氟噻嗪、氨苯蝶啶、螺内酯、坎利酮,纯度均≥980%.或经国家认证并授予标准物质证书的标准品.标准品1GB3165825—2022信息见附录A中的表A1.532 同位素内标标准品:乙酰唑胺GD3、4G氨基G6G氯苯G1,3G二磺酰胺G15N2、氯噻酮GD4、氢氯噻嗪G13CD2、氯噻嗪G13C15N2、呋塞米GD5、卞氟噻嗪GD5、氨苯蝶啶GD5、坎利酮GD6,纯度均≥980%.或经国家认证并授予标准物质证书的标准品.同位素内标信息见附录A中的表A1.54 标准溶液制备541 标准储备液(01mg/mL):分别称取利尿药标准品各约10mg,精密称定,用甲醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中,混匀,配制成浓度为01mg/mL的利尿药标准储备液.氨苯蝶啶标准品需先用1mL二甲基亚砜溶解,再用甲醇稀释并定容至刻度.-20℃保存,有效期6个月.542 内标储备液(01mg/mL):分别称取利尿药内标标准品各约10mg,精密称定,用甲醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中,混匀,配制成浓度为01mg/mL的利尿药内标标准储备液.氨苯蝶啶GD5标准品需先用1mL二甲基亚砜溶解,再用甲醇稀释并定容至刻度.-20℃保存,有效期6个月.543 混合标准工作液:精密量取氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞氟噻嗪和坎利酮的标准储备液(01mg/mL)各1mL,氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、螺内酯、4G氨基G6G氯苯G1,3G二磺酰胺、氨苯蝶啶的标准储备液(01mg/mL)各25mL,于同一100mL棕色容量瓶中,用甲醇定容至刻度,配制成的混合标准工作液中氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞氟噻嗪和坎利酮的浓度为1μg/mL;氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、螺内酯和4G氨基G6G氯苯G1,3G二磺酰胺、氨苯蝶啶的浓度为25μg/mL.4℃以下避光保存,有效期1个月.544 内标工作液:精密量取内标储备液(01mg/mL)各1mL,于100mL棕色容量瓶中,用甲醇定容至刻度,配制成浓度为1μg/mL的内标标准工作液.4℃以下避光保存,有效期1个月.545 混合标准系列工作液精确吸取利尿药混合标准工作液100μL、200μL、500μL、100μL、200μL、500μL以及内标工作液200μL,分别置于10mL棕色容量瓶中,用50%乙腈水溶液定容至刻度.其中氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞氟噻嗪和坎利酮的浓度依次为100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL;氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、螺内酯、4G氨基G6G氯苯G1,3G二磺酰胺、氨苯蝶啶的浓度依次为250ng/mL、500ng/mL、125ng/mL、250ng/mL、500ng/mL、125ng/mL,标准系列工作液中内标溶液的浓度为200ng/mL.现用现配.55 材料551 固相萃取柱:通过式反相混合型亲水亲脂平衡共聚物固相萃取柱,200mg/6mL,或性能相当者.552 有机滤膜:022μm.6 仪器和设备61 液相色谱G串联质谱仪:配电喷雾离子源.62 分析天平:感量分别为000001g和001g.63 氮吹浓缩仪.64 涡旋混合器.65 超声波发生器.66 离心机:转速不低于8000r/min.67 固相萃取装置.68 均质机.7 试样的制备与保存71 试样制备取适量新鲜或解冻的空白或供试肌肉组织,绞碎,并均质.取适量新鲜或冷藏的空白或供试鸡蛋,去壳后混合均匀.2GB3165825—2022取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶,混合均匀.a) 取均质后的供试样品,作为供试试样;b) 取均质后的空白样品,作为空白试样;c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.72 试样保存猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鸭肉和鸡蛋试样于-18℃以下保存,牛奶试样于0℃~4℃保存.8 分析步骤81 提取811 猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鸭肉称取试料2g(准确至±005g),置于50mL离心管中,加入400μL内标工作液,加入90%乙腈水溶液80mL,于涡旋振荡器上剧烈振荡2min.超声提取15min,8000r/min离心5min,取上清液至离心管中.残渣加90%乙腈水溶液80mL重复提取1次,合并上清液.加入5mL乙腈饱和正己烷溶液,低速涡旋10s,8000r/min离心3min,取下层清液,用90%乙腈水溶液稀释至200mL备用.812 鸡蛋、牛奶称取试料2g(准确至±002g),于50mL离心管中,加入400μL内标工作液,加入乙腈80mL,于涡旋振荡器上剧烈振荡2min.超声提取15min,8000r/min离心5min,取上清液至离心管中.残渣加乙腈80mL重复提取1次,合并上清液.加入5mL乙腈饱和正己烷溶液,低速涡旋10s,8000r/min离心3min,取下层清液,用乙腈稀释至200mL备用.82 净化取备用液100mL过固相萃取柱,以不大于1mL/min的速率通过固相萃取柱,接收流出的样液,并用1mL90%乙腈甲醇溶液洗脱,接收全部洗脱液,于40℃下氮气吹干.用10mL50%乙腈水溶液溶解残余物,涡旋混匀,过022μm滤膜,供液相色谱G串联质谱仪测定.83 测定831 液相色谱参考条件a) 色谱柱:C18色谱柱(100mm×21mm,18μm),或相当者;b) 流动相:A为5mmol/L乙酸铵水溶液,B为乙腈,梯度洗脱条件见表1;c) 流速:03mL/min;d) 柱温:35℃;e) 进样量:5μL.表1 液相色谱梯度洗脱条件时间,minA,%B,%0973100973150802060040609002080100029812009731500973832 质谱参考条件a) 离子源:电喷雾(ESI)离子源;b) 扫描方式:氨苯蝶啶、螺内酯、坎利酮为正离子模式;乙酰唑胺、4G氨基G6G氯苯G1,3G二磺酰胺、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氯噻酮、呋塞米、卞氟噻嗪为负离子模式;3GB3165825—2022c) 检测方式:多反应监测;d) 离子化电压:正模式5500V,负模式-4500V;e) 温度:500℃;f) 气帘气:241kPa;g) 雾化气:345kPa;h) 辅助加热气:345kPa;i) 定性离子对、定量离子对、去簇电压及碰撞电压见附录B.833 测定法8331 定性测定在相同实验条件下,样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±25%之内;且样品中被测组分定性离子的相对离子丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对离子丰度进行比较,偏差不超过表2规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物.10种利尿药标准工作液和内标工作液的特征离子质量色谱图见附录C.表2 定性确证时相对离子丰度的允许偏差单位为百分号相对离子丰度允许偏差>50±2020~50±2510~20±30≤10±508332 定量测定按831和832设定仪器条件,取试样溶液和标准溶液,作单点或多点校准,按内标法以峰面积比计算.试样溶液及标准溶液中的10种利尿药的峰面积与其相应内标的峰面积比应在仪器检测的线性范围之内.10种利尿药的多反应检测特征离子质量色谱图见附录C.84 空白试验称取空白试样,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.9 结果计算和表述试样中待测药物的残留量按标准曲线或公式(1)计算.X=A×A′is×Cs×Cis×V1×V2×1000Ais×As×C′is×m×V3×1000(1)式中:X ———试样中被测物质残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);Cs———标准工作溶液中被测物质浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);Cis———试样溶液中内标浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);C′is———标准工作溶液中内标浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);A———试样溶液中被测物质的峰面积;A′is———标准工作溶液中内标的峰面积;Ais———试样溶液中内标的峰面积;As———标准工作溶液中被测物质的峰面积;V1———试样提取液总体积的数值,单位为毫升(mL);V2———净化后残余物溶解体积的数值,单位为毫升(mL);V3———试样提取液过柱净化体积的数值,单位为毫升(mL);m———试样质量的数值,单位为克(g);4GB3165825—20221000———换算系数.10 方法的灵敏度、准确度和精密度101 灵敏度本方法中氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞氟噻嗪和坎利酮的检出限为100μg/kg;定量限为200μg/kg.乙酰唑胺、4G氨基G6G氯苯G1,3G二磺酰胺、氯噻
本文标题:GB 31658.25-2022 食品安全国家标准 动物性食品中10种利尿药残留量的测定 液相色谱-
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