GB 31658.22-2022 食品安全国家标准 动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法04中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.050X31658.22—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationofβ-agonistsresiduesinanimalderivedfoodbyliquidchromatography-tandemmassspectrometricmethodGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCS代替GB/T22286—2008、GB/T21313—2007GB３１６５８􀆰２２—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件代替GB/T２２２８６—２００８«动物源性食品中多种βＧ受体激动剂残留量的测定　液相色谱串联质谱法»、GB/T２１３１３—２００７«动物源性食品中βＧ受体激动剂残留检测方法　液相色谱Ｇ质谱/质谱法».本文件与GB/T２２２８６—２００８相比,主要变化如下:a)　修改文本格式为食品安全国家标准文本格式;b)　增加了范围中的检测组织(见第１章);c)　增加了范围中的药物种类(见第１章);d)　灵敏度进一步提高,待测物在猪、牛、羊的肌肉、肝脏和肾脏中的检测限为０􀆰２μg/kg,定量限为０􀆰５μg/kg.本文件与GB/T２１３１３—２００７相比,主要变化如下:a)　修改文本格式为食品安全国家标准文本格式;b)　增加了范围中的检测组织(见第１章);c)　增加了范围中的药物种类(见第１章).本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:———GB/T２２９６８—２００８、GB/T２１３１３—２００７.ⅠGB３１６５８􀆰２２—２０２２食品安全国家标准动物性食品中βＧ受体激动剂残留量的测定液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了动物性食品中βＧ受体激动剂残留检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于猪、牛、羊的肌肉、肝脏和肾脏中克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特罗、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗、克仑丙罗、妥布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗、克仑潘特和羟甲基克仑特罗共１８种βＧ受体激动剂单个或混合物残留量的检测.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试料中残留的βＧ受体激动剂,酶解、高氯酸沉淀蛋白后,经乙酸乙酯、叔丁基甲醚萃取,固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱法测定,内标法定量.５　试剂和材料５􀆰１　试剂以下所用试剂,除特别注明外均为分析纯试剂,水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN):色谱纯.５􀆰１􀆰２　甲醇(CH３OH):色谱纯.５􀆰１􀆰３　甲酸(HCOOH):色谱纯.５􀆰１􀆰４　高氯酸(HClO４):７０％~７２％.５􀆰１􀆰５　氨水(NH３􀅰H２O).５􀆰１􀆰６　乙酸乙酯(CH３COOC２H５):色谱纯.５􀆰１􀆰７　叔丁基甲醚[CH３OC(CH３)３]:色谱纯.５􀆰１􀆰８　βＧ葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶(βＧGlucuronidase/arylsulfatase):３０U/６０U/mL.５􀆰２　溶液配制５􀆰２􀆰１　０􀆰２mol/L乙酸铵缓冲液:取乙酸铵１５􀆰４g,溶解于１０００mL水中,用乙酸调pH至５􀆰２.５􀆰２􀆰２　０􀆰１mol/L高氯酸溶液:取高氯酸８􀆰７mL,用水稀释至１０００mL.５􀆰２􀆰３　１０mol/L氢氧化钠溶液:称取４０g氢氧化钠,用适量水溶解冷却后,用水稀释至１００mL.５􀆰２􀆰４　２％甲酸溶液:取甲酸２mL,用水稀释至１００mL.５􀆰２􀆰５　５％氨化甲醇溶液:取氨水５mL,用甲醇稀释至１００mL.１GB３１６５８􀆰２２—２０２２５􀆰２􀆰６　０􀆰１％甲酸乙腈溶液:取甲酸１mL,用乙腈稀释至１０００mL.５􀆰２􀆰７　０􀆰１％甲酸溶液:取甲酸１mL,用水稀释至１０００mL.５􀆰２􀆰８　甲醇Ｇ０􀆰１％甲酸溶液(１０＋９０,V/V):取甲醇１０mL和０􀆰１％甲酸溶液９０mL,混匀.５􀆰３　标准品５􀆰３􀆰１　βＧ受体激动剂:克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特罗、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗、克仑丙罗、妥布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗、克仑潘特和羟甲基克仑特罗,含量均≥９８􀆰０％,见附录A.５􀆰３􀆰２　同位素内标:克仑特罗ＧD９、盐酸莱克多巴胺ＧD６、沙丁胺醇ＧD３、西马特罗ＧD７、齐帕特罗ＧD７、氯丙那林ＧD７、特布他林ＧD９、西布特罗ＧD９、盐酸马布特罗ＧD９、盐酸班布特罗ＧD９、克仑丙罗ＧD７、盐酸妥布特罗ＧD９和羟甲基克仑特罗ＧD６,含量均≥９８􀆰０％.见附录A.５􀆰４　标准溶液的配制５􀆰４􀆰１　混合标准储备液:精密称取克仑特罗等标准品约１０mg,用甲醇溶解并定容至１０mL容量瓶中,配制成浓度为１􀆰０mg/mL的标准储备液.－１８℃以下保存,有效期１２个月.５􀆰４􀆰２　混合内标储备液:精密称取克仑特罗ＧD９等同位素内标约１０mg,用甲醇溶解并定容至１０mL容量瓶中,配制成浓度为１􀆰０mg/mL的内标储备液.－１８℃以下保存,有效期１２个月.５􀆰４􀆰３　混合标准工作液:精密量取１mg/mL的混合标准储备液１００μL,于１０mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的标准工作液.－１８℃以下保存,有效期６个月.５􀆰４􀆰４　混合内标工作液:精密量取１mg/mL的混合内标储备液１００μL,于１０mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的内标工作液.－１８℃以下保存,有效期６个月.５􀆰５　材料５􀆰５􀆰１　混合型阳离子交换固相萃取柱:６０mg/３mL,或相当者.５􀆰５􀆰２　微孔滤膜:０􀆰２２μm.６　仪器和设备６􀆰１　液相色谱Ｇ串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI).６􀆰２　分析天平:感量０􀆰００００１g.６􀆰３　天平:感量０􀆰０１g.６􀆰４　恒温振荡水浴摇床.６􀆰５　涡旋混合器.６􀆰６　高速离心机.６􀆰７　振荡器.６􀆰８　氮吹仪.６􀆰９　固相萃取装置.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样制备取适量新鲜或解冻的空白或供试样品,并均质.a)　取均质后的供试样品,作为供试试样;b)　取均质后的空白样品,作为空白试样;c)　取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.７􀆰２　试样保存－１８℃以下保存.２GB３１６５８􀆰２２—２０２２８　测定步骤８􀆰１　酶解与提取称取试料２g(准确至±０􀆰０５g),于５０mL离心管内,加０􀆰２mol/L乙酸铵缓冲溶液６mL、βＧ葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶４０μL,涡旋混匀,３７℃避光水浴振荡１６h,放置至室温,备用.８􀆰２　萃取、净化与浓缩取备用液,加１００ng/mL内标工作液１００μL,涡旋混匀,８０００r/min离心８min,取上清液,加０􀆰１mol/L高氯酸溶液５mL,涡旋混匀,用高氯酸调pH至１􀆰０±０􀆰２,８０００r/min离心８min后,将上清液用１０mol/LNaOH溶液调pH至１０±０􀆰５.加乙酸乙酯１５mL,中速振荡５min,５０００r/min离心５min,取上层有机相.下层水相中再加入叔丁基甲醚１０mL,中速振荡５min,５０００r/min离心５min,取上层有机相,合并,５０℃下氮气吹干,用２％甲酸溶液５mL溶解,备用.取混合型阳离子交换固相萃取柱,依次用甲醇、２％甲酸溶液各３mL活化,取备用液过柱,依次用２％甲酸溶液、甲醇各３mL淋洗,抽干,用５％氨化甲醇溶液３mL洗脱;洗脱液在５０℃下氮气吹干.残余物中加入甲醇Ｇ０􀆰１％甲酸溶液(１０＋９０,V/V)０􀆰５mL,充分溶解,过０􀆰２２μm微孔滤膜,供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.８􀆰３　标准曲线的制备精密量取混合标准工作液、混合内标工作液适量,用甲醇Ｇ０􀆰１％甲酸溶液(１０＋９０,V/V)稀释成浓度为１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL和５０ng/mL的系列标准工作液,含内标均为５ng/mL,供液相色谱Ｇ串联质谱法测定.以待测药物特征离子色谱峰的峰面积与对应内标物特征离子色谱峰的峰面积比值为纵坐标,相应的标准溶液浓度比为横坐标,绘制标准工作曲线,求回归方程和相关系数.８􀆰４　测定８􀆰４􀆰１　液相色谱参考条件a)　色谱柱:五氟苯基柱(５０mm×３􀆰０mm,２􀆰６μm),或相当者.b)　流动相:A相为０􀆰１％甲酸溶液,B相为０􀆰１％甲酸乙腈溶液.流动相梯度为０min~０􀆰５min保持５％B;０􀆰５min~５min,５％B线性变化到６０％B,５min~６􀆰５min,保持９５％B,６􀆰５min~８􀆰５min保持５％B.c)　流速:０􀆰４mL/min.d)　进样量:５μL.e)　柱温:３０℃.８􀆰４􀆰２　串联质谱参考条件a)　离子源:电喷雾离子源;b)　扫描方式:正离子扫描;c)　检测方式:多反应离子监测(MRM);d)　电喷雾电压:５５００V;e)　离子源温度:５５０℃;f)　辅助气１:５０psi;g)　辅助气２:６０psi;h)　气帘气:３０psi;i)　碰撞气:Medium.待测药物定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量参考值见表１.３GB３１６５８􀆰２２—２０２２表１　待测药物定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量参考值药物定性离子对m/z定量离子对m/z去簇电压V碰撞能量eV克仑特罗２７７􀆰０＞２０３􀆰０２７７􀆰０＞１６８􀆰１２７７􀆰０＞２０３􀆰０４０２１３８克仑特罗ＧD９２８６􀆰０＞２０４􀆰０２８６􀆰０＞２０４􀆰０５０２３莱克多巴胺３０２􀆰２＞１６４􀆰１３０２􀆰２＞１０７􀆰１３０２􀆰２＞１６４􀆰１４０２３５１莱克多巴胺ＧD６３０８􀆰１＞１６８􀆰１３０２􀆰２＞１６８􀆰１４０２３沙丁胺醇２４０􀆰２＞１４８􀆰１２４０􀆰２＞２２２􀆰１２４０􀆰２＞１４８􀆰１４０２４１５沙丁胺醇ＧD３２４３􀆰１＞１５１􀆰０２４３􀆰１＞１５１􀆰０３０２５西马特罗２２０􀆰０＞１６０􀆰０２２０􀆰０＞２０２􀆰０２２０􀆰０＞１６０􀆰０４０２２１３西马特罗ＧD７２２７􀆰２＞１６１􀆰１２２７􀆰２＞１６１􀆰１４０２３齐帕特罗２６２􀆰１＞１８５􀆰０２６２􀆰１＞２０２􀆰１２６２􀆰１＞１８５􀆰０４０３２２５齐帕特罗ＧD７２６９􀆰１＞１８５􀆰０２６９􀆰１＞１８５􀆰０４０３２氯丙那林２１４􀆰０＞１５４􀆰１２１４􀆰０＞１１８􀆰０２１４􀆰０＞１５４􀆰１４０２３３４氯丙那林ＧD７２２１􀆰０＞１５５􀆰０２２１􀆰０＞１５５􀆰０４０２３特布他林２２６􀆰２＞１５２􀆰０２２６􀆰２＞１０７􀆰１２２６􀆰２＞１５２􀆰０４０２１３６特布他林ＧD９２３５􀆰２＞１５３􀆰１２３５􀆰２＞１５３􀆰１４０２０西布特罗２３４􀆰０＞１６０􀆰１２３４􀆰０＞１４３􀆰０２３４􀆰０＞１６０􀆰１４０２１３４西布特罗ＧD９２４３􀆰２＞１６１􀆰１２４３􀆰２＞１６１􀆰１４０２１马布特罗３１１􀆰１＞２３７􀆰２３１１􀆰１＞２０２􀆰１３１１􀆰１＞２３７􀆰２４０２４４０马布特罗ＧD９３２０􀆰１＞２３８􀆰０３２０􀆰１＞２３８􀆰０４０２４溴布特罗３６７􀆰０＞２９