SNT 2316-2019 出口动物源食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量的检测方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN / T2316—2019出口动物源食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量的检测方法 Determinationofp-arsanilicacid、4-nitrophenylarsonicacid、3-nitro-4-hydroxy-phenylarsonicacidresiduesinanimalfoodsforexportICS 2019-12-27发布2020-07-01实施中华人民共和国海关总署发 布ISN / T2316 —2019前  言本标准按照GB / T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替SN / T 2316—2009《动物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量检测方法 液相色谱-电感耦合等离子体/质谱法》。本标准与SN / T 2316—2009相比，主要技术变化如下：——标准名称修改为“出口动物源食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量的检测方法”。——增加了液相色谱-原子荧光光谱法（LC-AFS）为第二法。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津海关动植物与食品检测中心、中华人民共和国合肥海关、北京海光仪器有限公司、上海新仪微波化学科技有限公司。本标准主要起草人：肖亚兵、董志珍、高健会、韩芳、宋伟、马兴、宋旭、杨爽、逯玉凤、徐渊。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——SN / T 2316—2009。1SN / T2316 —2019出口动物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、 洛克沙砷残留量的检测方法1 范围本标准规定了出口动物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量测定的高效液相色谱-电感耦合等离子体 / 质谱检测方法、液相色谱-原子荧光光谱检测方法。本标准适用于鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡可食用下水、猪肉、猪肝、猪肾、猪可食用下水中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量的检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB / T 6682分析实验室用水规格和试验方法第一法 液相色谱-电感耦合等离子体 / 质谱法3 方法提要试样中残留的阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷用甲醇+水（1∶1，体积比）提取，离心后定容，过0.45µm滤膜，供高效液相色谱-电感耦合等离子体 / 质谱（HPLC-ICP / MS）测定，外标法定量。4 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB / T 6682规定的一级水。4.1 甲醇：色谱纯。4.2 三氟乙酸：优级纯。4.3 0.1%三氟乙酸：准确移取1 mL三氟乙酸至1000 mL容量瓶中，定容。4.4 滤膜：0.45 µm，直径47 mm。4.5 甲醇溶液：甲醇+水（1∶1，体积比）。4.6 阿散酸（CAS号：2045-00-3，C6H8AsNO3）标准物质：纯度大于等于99％。4.7 硝苯砷酸（CAS号：98-72-6，C6H6AsNO5）标准物质：纯度大于等于95%。4.8 洛克沙砷（CAS号：121-19-7，C6H6AsNO6）标准物质：纯度大于等于97.5%。4.9 阿散酸标准储备溶液：准确称取适量的阿散酸标准物质，用去离子水配成浓度为500 µg / mL的标准储备液。根据需要用去离子水稀释成适当浓度的标准工作液。4.10 硝苯砷酸标准储备溶液：准确称取适量的硝苯砷酸标准物质，用去离子水配成浓度为500 µg / mL的标准储备液。根据需要用去离子水稀释成适当浓度的标准工作液。4.11 洛克沙砷标准储备溶液：准确称取适量的洛克沙砷标准物质，用去离子水配成浓度为500 µg / mL的标准储备液。根据需要用去离子水稀释成适当浓度的标准工作液。2SN / T2316 —2019标准储备液在0℃～4℃冰箱中保存，有效期为12个月，标准工作液在0℃～4℃冰箱中保存。有效期为6个月。5 仪器和设备5.1 高效液相色谱-电感耦合等离子体 / 质谱仪。5.2 高速均质器：15000 r / min。5.3 离心机：3 000 r / min。5.4 涡旋混合器。5.5 超纯水仪。5.6 天平：感量为0.1 mg和1 mg。6 试样制备与保存6.1 试样制备将鸡肉、鸡肝、鸡可食用下水、猪肉、猪肝、猪肾、猪可食用下水等有代表性样品约500 g、鸡肾样品100g 用绞肉机绞碎，混匀，均分成2份试样，分装入洁净的盛样袋内, 密闭并标明标记。6.2 试样保存动物源性食品等试样于-18℃以下冷冻保存。7 测定步骤7.1 提取称取试样1 g（精确至0.001 g）置于微波辅助萃取内罐中，准确加入10 mL甲醇溶液（4.5），按照微波辅助萃取仪的标准操作步骤进行提取（参见附录A中表A.1）。提取完毕，取出冷却至室温，10 000 r / min离心10 min。取4 mL上清液，氮气吹扫，用甲醇溶液（4.5）定容至2 mL，经0.45 µm有机微孔滤膜过滤后进行测定。按同一操作方法作空白试验。7.2 测定7.2.1 液相色谱条件7.2.1.1 色谱柱：C18柱，粒径5 µm，250mm×4.60 mm或性能相当者。7.2.1.2 流动相：甲醇-0.1%三氟乙酸水溶液（10∶90，体积比）。7.2.1.3 流速：1.0 mL / min。7.2.1.4 进样量：20 µL。7.2.2 电感耦合等离子体-质谱工作条件和测量参数电感耦合等离子体-质谱工作条件和测量参数见附录B。7.2.3 高效液相色谱-电感耦合等离子体-质谱测定分别配制阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷标准使用液0.0 ug / L，0.4 ug / L，2.0 ug / L，10.0 ug / L，25.0 ug / L，50.0 ug / L，100.0 ug / L，测得其峰面积并求出峰面积与浓度关系的一元线性回归方程。阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷标准溶液（25 ug / L）的高效液相色谱-电感耦合等离子体、质谱图参见3SN / T2316 —2019附录C。7.2.4 空白试验除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。7.2.5 结果计算和表述按式（1）计算试样中阿散酸（或硝苯砷酸或洛克沙砷）残留量，计算结果应将空白值扣除。  Xi = （c1－c0）×Vm×1 000× V2V1 ……………………………（1）式中：Xi——试样中被测物的残留量，单位为毫克每千克（mg / kg）；c1——样液中被测物的浓度，单位为微克每升（µg / L）；c0——空白液中被测物的浓度，单位为微克每升（µg / L）；V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；V1——吸取上清液体积，单位为毫升（mL）；V2——最终定容体积，单位为毫升（mL）；m——最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。8 测定低限和回收率8.1 测定低限阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷的测定低限均为0.01 mg / kg。8.2 回收率样品添加回收率见表D.1。第二法 液相色谱-原子荧光光谱法9 方法提要试样中残留的阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷经甲醇+水（1∶1，体积比）提取后，以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物在酸性环境下与硼氢化钾反应，生成气态砷化合物，用原子荧光光谱仪进行测定。按保留时间定性，外标法定量。10 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB / T 6682规定的一级水。10.1 试剂10.1.1 甲醇：色谱纯。10.1.2 盐酸。10.1.3 硼氢化钾。4SN / T2316 —201910.1.4 氢氧化钠。10.1.5 磷酸二氢钾。10.1.6 三氟乙酸。10.1.7 过硫酸钾。10.1.8 微孔滤膜：0.45 µm，有机系。 10.2 试剂配制10.2.1 甲醇溶液：甲醇（10.1.1）+水（1∶1，体积比）。10.2.2 盐酸溶液（5%，体积分数）：量取50 mL盐酸（10.1.2），溶于水并定容至1000 mL。10.2.3 硼氢化钾溶液（20 g / L）：称取5 g氢氧化钠溶（10.1.4）于水，待氢氧化钠（10.1.4）充分溶解后，称取20 g硼氢化钾（10.1.3）于氢氧化钠（10.1.4）溶液中，溶于水并定容至1000 mL。10.2.4 三氟乙酸（0.1%）-磷酸二氢钾溶液（50 mmol / L）：称取3.402 g磷酸二氢钾（10.1.5）溶于水，待固体完全溶解后，添加0.5 mL三氟乙酸（10.1.6），溶于水并定容至500 mL。经0.45 µm有机滤膜（10.1.8）过滤后，于超声水浴中超声脱气15 min，备用。10.2.5 过硫酸钾溶液（3%，体积分数）：称取0.5 g氢氧化钠（10.1.4）溶于水，待氢氧化钠（10.1.4）充分溶解后，称取3 g过硫酸钾（10.1.7）于氢氧化钠溶液中，溶于水并定容至100 mL。10.3 标物质10.3.1 阿散酸（CAS号：2045-00-3，C6H8AsNO3）标准物质：纯度大于等于99％。10.3.2 洛克沙砷（CAS号：121-19-7，C6H6AsNO6）标准物质：纯度大于等于97.5%。10.3.3 硝苯砷酸（CAS号：98-72-6，C6H6AsNO5）标准物质：纯度大于等于95%。10.4 标准溶液配制见4.9 ~  4.11。标准储备液在0℃～4℃冰箱中保存，有效期为6个月。11 仪器和设备所有玻璃器皿均应以硝酸溶液（1∶4，体积比）浸泡24 h，用水反复冲洗，最后用去离子水冲洗干净。11.1 液相色谱-原子荧光光谱仪（LC-AFS）：由液相色谱仪（包括液相色谱泵和进样装置）与原子荧光光谱仪组成。11.2 组织匀浆机。11.3 高速粉碎机。11.4 天平：感量为0.1 mg和1 mg。11.5 真空抽滤装置。11.6 超声波水浴器。11.7 超纯水仪。11.8 微波辅助萃取仪。11.9 冷冻离心机：转速≥10 000 r / min。12 样品制备与保存见第6章。5SN / T2316 —201913 分析步骤13.1 提取称取试样1 g（精确至0.001 g）置于微波辅助萃取内罐中，准确加入10 mL甲醇溶液（10.2.1），按照微波辅助萃取仪的标准操作步骤进行提取（参见表A.1）。提取完毕，取出冷却至室温，10 000 r / min离心10 min。取4 mL上清液，氮气吹扫，用甲醇溶液（10.2.1）定容至2 mL，经0.45 µm有机滤膜过滤后进行测定。按同一操作方法作空白试验。13.2 测定13.2.1 液相色谱参考条件13.2.1.1 色谱柱：C18柱（粒径5µm，250mm×4.60 mm），或性能相当者。13.2.1.2 流动相：甲醇-三氟乙酸（0.1%）-磷酸二氢钾溶液（10.2.4）（5∶95，体积比）。13.2.1.3 流速：1.2 mL / min。13.2.1.4 进样体积：100 µL。13.2.2 原子荧光检测参考条件13.2.2.1 负高压：330V。13.2.2.2 灯电流：100 mA。13.2.2.3 载气流量：400 mL / min。13.2.2.4 屏蔽气流量：900 mL / min。13.2.2.5 盐酸溶液流速：120 r / min。13.2.2.6 硼氢化钾流速：120 r / min。13.2.2.7 过硫酸钾溶液流速：110 r / min。13.2.2.8 读数模式：峰面积。13.2.3 标准曲线制作分别准确吸取1.00 mg / L硝苯砷酸标准工作液和1.00 mg / L洛克沙砷标准工作液0.00 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL和1.20 mL，及1.00 mg / L阿散酸标准工作液0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL和1.00 mL于6个10 mL容量瓶，用水稀释至刻度，此混合标准系列溶液的阿散酸浓度为0.0 µg / L，20.0 µg / L，40.0 µg / L，60.0