KJ 201904 水发产品中甲醛的快速检测

—1——附件4水发产品中甲醛的快速检测（KJ201904）1范围本方法规定了水发产品及其浸泡液中甲醛的快速检测方法。本方法适用于银鱼、鱿鱼、牛肚、竹笋等水发产品及其浸泡液中甲醛的快速测定。AHMT法（比色卡法）2原理试样中的甲醛经提取后，在碱性条件下与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂（AHMT）发生缩合，再被高碘酸钾氧化成6-巯基-S-三氮杂茂[4，3-b]-S-四氮杂苯的紫红色络合物，其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成正相关，通过色阶卡进行目视比色，对试样中甲醛进行定性判定。3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1氢氧化钾（KOH）。3.1.2盐酸（HCl）。3.1.3亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6·3H2O）。3.1.4乙酸锌（C4H6O4Zn·2H2O）。3.1.5冰乙酸（C2H4O2）。3.1.6乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O）。3.1.7高碘酸钾（KIO4）。3.1.84-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂（C2H6N6S，AHMT）。3.1.9氢氧化钾溶液（5mol/L）：称取280.5g氢氧化钾（3.1.1），用水溶解并定容至1000mL，混匀。3.1.10氢氧化钾溶液（0.2mol/L）：称取11.22g氢氧化钾（3.1.1），用水溶解并定容至1000mL，混匀。3.1.11盐酸溶液（0.5mol/L）：量取41mL盐酸（3.1.2），用水稀释并定容至1000mL，混匀。——2—3.1.12亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾（3.1.3），用水溶解并定容至100mL，混匀。3.1.13乙酸锌溶液（220g/L）：称取22g乙酸锌（3.1.4），加入3mL冰乙酸（3.1.5）溶解，用水稀释并定容至100mL，混匀。3.1.14乙二胺四乙酸二钠溶液（100g/L）：称取10g乙二胺四乙酸二钠（3.1.6），用5mol/L氢氧化钾溶液（3.1.9）溶解，并定容至100mL，混匀。3.1.15AHMT溶液（5g/L）：称取0.5g4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂（3.1.8），用0.5mol/L盐酸溶液（3.1.11）溶解，并定容至100mL，混匀后置于棕色瓶中，有效期6个月。3.1.16高碘酸钾溶液（15g/L）：称取1.5g高碘酸钾（3.1.7），用0.2mol/L氢氧化钾溶液（3.1.10）溶解，并定容至100mL，混匀。3.2参考物质甲醛参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1。表1甲醛参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量甲醛Formaldehyde50-00-0HCHO30.033.3标准溶液的配制3.3.1甲醛标准储备液（100µg/mL）：安瓿瓶封装，冷藏、避光、干燥条件下保存。使用前恢复至室温，摇匀备用。安瓿瓶打开后应一次性使用完毕。3.3.2甲醛标准工作液（10µg/mL）：吸取甲醛标准储备液（100µg/mL）（3.3.1）1.0mL，置于10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，临用前配制。3.4材料3.4.1甲醛快速检测试剂盒（AHMT法-比色卡法）：适用基质为水发产品及其浸泡液，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。3.4.2滤纸：中速定性滤纸。4仪器和设备4.1移液器：200µL，1mL，5mL。4.2涡旋混合器。4.3电子天平或手持式天平：感量为0.01g。4.4离心机：转速≥4000r/min。4.5环境条件：温度15℃~35℃，湿度≤80%。5分析步骤5.1试样制备—3——取适量有代表性试样的可食部分或浸泡液，固体试样剪碎混匀，液体试样需充分混匀。5.2试样的提取准确称取试样1g（精确至0.01g）或吸取试样1.0mL，置于15mL离心管中，加水定容至10mL，涡旋提取1min，静置5min，取上清液作为提取液（如上清液浑浊，加入1mL亚铁氰化钾溶液（3.1.12）和1mL乙酸锌溶液（3.1.13），涡旋混匀，4000r/min离心5min或滤纸过滤，取上清液或滤液作为提取液）。5.3测定步骤准确移取提取液2mL于5mL离心管中，加入0.4mL乙二胺四乙酸二钠溶液（3.1.14）和0.4mLAHMT溶液（3.1.15），涡旋混匀后静置10min，再加入0.1mL高碘酸钾溶液（3.1.16），涡旋混匀后静置5min，立即与标准色阶卡目视比色，10min内判读结果。进行平行试验，两次测定结果应一致，即显色结果无肉眼可辨识差异。5.4质控试验每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控制。5.4.1空白试验称取空白试样1g（精确至0.01g）或吸取空白试样1.0mL，按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。5.4.2加标质控试验准确称取空白试样1g（精确至0.01g）或吸取空白试样1.0mL，置于15mL离心管中，加入0.5mL甲醛标准工作液（10µg/mL）（3.3.2），使试样中甲醛含量为5mg/kg，按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。6结果判定要求观察检测管中样液颜色，与标准色阶卡比较判读试样中甲醛的含量。颜色浅于检出限（5mg/kg）则为阴性试样；颜色接近或深于5mg/kg则为阳性试样。色阶卡见图1。图1甲醛标准色阶卡甲醛标准比色卡（mg/kg或mg/L）05102050100200——4—质控试验要求：空白试验测定结果应为阴性，质控试验测定结果应与比色卡第二点（5mg/kg或mg/L）颜色一致。7结论由于色阶卡目视判读存在一定误差，为尽量避免出现假阴性结果，读数时遵循就高不就低的原则。当测定结果为阳性时，应对结果进行确证。8性能指标8.1检测限5mg/kg或mg/L。8.2灵敏度灵敏度应≥95%。8.3特异性特异性应≥85%。8.4假阴性率假阴性率应≤5%。8.5假阳性率假阳性率应≤15%。注：性能指标计算方法见附录A。AHMT法（分光光度法）9原理试样中的甲醛经提取后，在碱性条件下与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂（AHMT）发生缩合，再被高碘酸钾氧化成6-巯基-S-三氮杂茂[4，3-b]-S-四氮杂苯的紫红色络合物，其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成正相关，用分光光度计在550nm处测定吸光度值，与标准系列比较定量，得到试样中甲醛的含量。10试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。10.1试剂同3.1。10.2参考物质—5——同3.2。10.3标准溶液的配制同3.3。10.4材料10.4.1甲醛快速检测试剂盒（AHMT法-分光光度法）：适用基质为水发产品及其浸泡液，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。10.4.2滤纸：中速定性滤纸。11仪器和设备11.1移液器：200µL，1mL，5mL。11.2涡旋混合器。11.3电子天平或手持式天平：感量为0.01g。11.4离心机：转速≥4000r/min。11.5分光光度计或相应商品化测定仪。11.6环境条件：温度15℃~35℃，湿度≤80%。12分析步骤12.1试样制备同5.1。12.2试样的提取同5.2。12.3测定步骤准确移取提取液（12.2）2mL置于5mL离心管中，另准确吸取10µg/mL的甲醛标准工作液（3.3.2）0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL（相当于0µg、1µg、2µg、4µg、6µg、8µg、10µg甲醛）分别置于5mL带刻度的具塞刻度试管中，加水定容至2mL，涡旋混匀。于标准管和试样管中分别加入0.4mL乙二胺四乙酸二钠溶液（3.1.14）和0.4mLAHMT溶液（3.1.15），涡旋混匀静置10min，再加入0.1mL高碘酸钾溶液（3.1.16），静置5min后用1cm比色杯，以零管调节零点，于波长550nm处测定吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。12.4质控试验每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。12.4.1空白试验——6—称取空白试样1g（精确至0.01g）或吸取空白试样1.0mL，按照12.2和12.3步骤与试样同法操作。12.4.2加标质控试验准确称取空白试样1g（精确至0.01g）或吸取空白试样1.0mL，置于15mL离心管中，加入0.5mL甲醛标准工作液（10µg/mL）（3.3.2），使试样中甲醛含量为5mg/kg，按照12.2和12.3步骤与试样同法操作。13分析结果的表述13.1结果计算试样中甲醛的含量按式（1）计算：………………………………（1）式中：X——试样中甲醛的含量，单位为毫克每千克或毫克每升（mg/kg或mg/L）；ρ——由标准曲线得到的试样提取液中甲醛的含量，单位为微克（µg）；ρ0——由标准曲线得到的空白提取液中甲醛的含量，单位为微克（µg）；V——试样定容体积，单位为毫升（mL）；V1——测定用试样体积，单位为毫升（mL）；m——试样的取样量，单位为克或毫升（g或mL）；1000——单位换算系数。计算结果保留两位有效数字。13.2结果判定当测定结果≥5mg/kg或mg/L时，判定为阳性，阳性结果的试样需要重复检验2次以上。13.3质量控制要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果回收率应≥60%。14结论当测定结果为阳性时，应对结果进行确证。15性能指标15.1检测限5mg/kg或mg/L。15.2灵敏度灵敏度应≥95%。1000m1000）-（10VVX—7——15.3特异性特异性应≥85%。15.4假阴性率假阴性率应≤5%。15.5假阳性率假阳性率应≤15%。注：性能指标计算方法见附录A。乙酰丙酮法（分光光度法）16原理试样中的甲醛经提取后，在沸水浴条件下与乙酰丙酮发生反应，生成黄色物质，其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成正相关，用分光光度计在413nm处测定吸光度值，与标准系列比较定量，得到试样中甲醛的含量。17试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。17.1试剂17.1.1无水乙酸钠（CH3COONa）。17.1.2乙酰丙酮（C5H8O2）。17.1.3乙酰丙酮溶液：称取25.0g无水乙酸钠（17.1.1）溶于适量水中，移入100mL容量瓶中，加0.40mL乙酰丙酮（17.1.2）和3.0mL冰乙酸（3.1.5），加水定容至刻度，混匀，移至棕色试剂瓶中，2℃～8℃保存，有效期1个月。17.2参考物质同3.2。17.3标准溶液配制同3.3。17.4材料17.4.1甲醛快速检测试剂盒（乙酰丙酮法-分光光度法）：适用基质为水发产品及其浸泡液，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。17.4.2滤纸：中速定性滤纸。——8—18仪器和设备18.1移液器：200µL，1mL，5mL。18.2涡旋混合器。18.3电子天平或手持式天平：感量为0.01g。18.4离心机：转速≥4000r/min。18.5水浴锅。18.6分光光度计或相应商品化测定仪。18.7环境条件：温度15℃~35℃，湿度≤80%。19分析步骤19.1试样制备同5.1。19.2试样的提取同5.2。19.3测定步骤准确移取提取液（19.2）2mL置于5mL离心管中，另准确吸取10µg/mL的甲醛标准工作液（3.3.2）0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL（相当于0µg、1µg、2µg、4µg、6µg、8µg、10µg甲醛）分别置于5mL带刻度的具塞刻度试管中，加水定容至2mL，涡旋混匀。于标准管和试样管中分别加入0.2mL乙酰丙酮溶液（17.1.3）涡旋混匀后沸水浴5min，取出冷却至室温后用1cm比色杯，以零管调节零点，于波长413nm处测定吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。19.4质控试验每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。19.4.1空白试验称取空白试样1g（精确至0.01g）或吸