农业农村部公告第289号 兽药中非法添加硝基咪唑类药物检查方法

附件3兽药中非法添加硝基咪唑类药物检查方法1适用范围1.1本方法适用于盐酸多西环素可溶性粉和硫酸新霉素可溶性粉中非法添加罗硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奥硝唑或异丙硝唑的检查。1.2用于其他兽药制剂中非法添加罗硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奥硝唑或异丙硝唑检查时，需进行空白试验和检测限测定。2检查方法照高效液相色谱法（《中国兽药典》一部附录0512）测定。色谱条件与系统适用性试验采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（AgilentEclipsePlusC184.6mm×250mm，5μm色谱柱或其他等效的色谱柱）；以甲醇为流动相A，以水为流动相B，流速为每分钟0.8ml，按下表进行线性梯度洗脱；柱温25℃；二极管阵列检测器检测，采集波长范围为200nm～400nm，分辨率为1.2nm，记录320nm波长处的色谱图。供试品溶液中罗硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奥硝唑和异丙硝唑色谱峰与相邻色谱峰分离度应符合要求。时间(min)A(%)B(%)020805208012406020406020.1100025100025.12080302080测定法取供试品1.0g，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，超声处理10分钟，冷却至室温，滤过；取续滤液5.0ml，置50ml量瓶中，用30%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。分别取罗硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奥硝唑和异丙硝唑对照品各约25mg置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度；取适量，用30%甲醇溶液定量稀释制成每1ml中各含约50μg的溶液，作为对照品溶液。取对照品溶液和供试品各20μl，分别注入液相色谱仪，同时记录色谱图和光谱图。必要时，可调整供试品溶液或对照品溶液的浓度，使两者峰面积接近。通过与对照品溶液色谱图保留时间、光谱图的对比，确定供试品中是否含有罗硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奥硝唑或异丙硝唑。3结果判定3.1供试品溶液色谱图中如出现与相应对照品溶液色谱图中保留时间一致的色谱峰（差异不大于±5%），且为单一物质峰；在规定的采集波长范围内，两者紫外光谱图匹配，且最大吸收波长一致（差异不大于±2nm），判定为检出罗硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奥硝唑或异丙硝唑。3.2供试品溶液色谱图中峰保留时间与相应对照品峰相同，但峰面积小于检测限峰面积，判定为未检出罗硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奥硝唑或异丙硝唑。4检测限本方法罗硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奥硝唑或异丙硝唑的检测限为1mg/g。附图图1对照品溶液色谱图1.罗硝唑2.甲硝唑3.替硝唑4.地美硝唑5.奥硝唑6.异丙硝唑图2罗硝唑光谱图图3甲硝唑光谱图图4替硝唑光谱图min1020mAU0100200300400DAD1A,Sig=320,4Ref=off(LXJ\硝基咪唑非法添加物检查\AFCDelay2020-03-0215-31-57\202003020000002.D)123456nm220240260280300320340360380mAU010203040*DAD1,5.458(39.9mAU,-)参考值=0.005&10.511为ONLINEEDITED--018.D308258nm220240260280300320340360380mAU010203040*DAD1,5.945(36.0mAU,-)参考值=0.005&10.511为ONLINEEDITED--018.D318264nm220240260280300320340360380mAU05101520253035*DAD1,6.565(31.5mAU,-)参考值=0.005&10.511为ONLINEEDITED--018.D316264图5地美硝唑光谱图图6奥硝唑光谱图图7异丙硝唑光谱图nm220240260280300320340360380mAU01020304050*DAD1,7.585(47.1mAU,-)参考值=0.005&10.511为ONLINEEDITED--018.D320264nm220240260280300320340360380mAU0510152025*DAD1,10.978(21.9mAU,-)参考值=10.511&11.445为ONLINEEDITED--018.D318262nm220240260280300320340360380mAU02468101214*DAD1,14.171(12.9mAU,-)参考值=13.771&14.731为ONLINEEDITED--018.D320266