HEK-293T细胞转染操作步骤

使用X-tremeGENEHPDNATransfectionReagent转染HEK-293T细胞系慢病毒生产的优化实验步骤在转染实验前18~24小时，将HEK-293T细胞按照5.0×105细胞/孔的密度接种到6孔板中，每孔中含有2ml完全生长培养基（60~80%的细胞汇集度）。细胞培养过夜。将X-tremeGENEHPDNATransfectionReagent，DNA和稀释培养基（如Opti-MEM®IReducedSerumMedium或无血清培养基）孵育到室温（+15至+25℃）。使用前将转染试剂轻柔混匀。经优化的转染结果。转染质粒：pGIPZ-eGFP在无菌管中加入180μl稀释培养基。加入2μg质粒DNA（按摩尔化学计量混合1:2:2比例的表达载体，包装质粒和包膜质粒，体积共计20μl)，轻柔混匀。在上述DNA稀释液中加入6μlX-tremeGENEHPDNATransfectionReagent（转染试剂：DNA=3：1），轻柔混匀。+15至+25℃下孵育15~30min，形成转染复合物。在细胞培养板中以逐滴加入的方式，在每孔中加入200μl转染复合物。轻柔晃动6孔板，将转染复合物和细胞培养物混匀。细胞继续培养24-72h后，进行病毒滴度检测。