国自然标书

专硕3班-石群锋-2018ZD026国家自然科学基金申请书（2018版）资助类别：面上项目亚类说明：附注说明：项目名称：补阳还五汤对百草枯诱导肺纤维化中转化生长因子β1/Smad3通路的调控机制研究申请人：石群锋电话：[phone]依托单位：成都中医药大学通讯地址：成都市十二桥路37号邮政编码：610075单位电话：61800000电子邮箱：[e-mail]申报日期：2019年03月01日国家自然科学基金委员会专硕3班-石群锋-2018ZD026基本信息申请人信息姓名石群锋性别男出生年月19780902民族汉学位硕士职称教授每年工作时间（月）8电话[phone]电子邮箱[e-mail]传真123-3124234国别或地区中国个人通讯地址成都市十二桥路37号工作单位成都中医药大学主要研究领域中医药防治呼吸与老年病的研究依托单位信息名称成都中医药大学联系人XXXX电子邮箱XXXXXXXX电话XXXXXX网站地址通路的调控机制研究英文名称资助类别面上项目亚类说明附注说明申请代码H0110：肺间质性疾病H0111：急性肺损伤基地类别研究期限2019年01月–2021年12月研究方向：应用基础研究申请经费40.0000万元中文关键词百草枯，肺纤维化，转化生长因子β1/Smad3通路英文关键词Paraquat,pulmonaryfibrosis,transforminggrowthfactorbeta1/Smad3pathway专硕3班-石群锋-2018ZD026中文摘要百草枯（Paraquat，PQ）化学名为1，1'-二甲基4，4'-二联吡啶，分子式：CH3（C5H4N）2CH3Cl2，分子量：257.2，自1962年开始作为除草剂被广泛使用。PQ对人畜的急性毒性作用很强，且无有效解毒剂，中毒事件经常发生，病死率居高不下。PQ中毒后肺纤维化过程中，TGF-β1/Smad3的表达水平和功能状态会发生改变，亦存在明显的EndoMT现象，但这些细胞和转导因子与EndoMT的相关性及它们在PQ导致肺纤维化过程中的具体生物学机制均尚未明了。PQ致肺纤维化是基于直接毒性作用还是由免疫炎症反应诱导所形成[1]。祝春青的研究表明已有成熟的注射PQ肺纤维化模型方案，一次性腹腔注射百草枯可制备小鼠肺纤维化模型,40和50mg/kg为较合适的造模剂量[2]。补阳换物汤作为活血化瘀的代表方剂，多项研究表明可延缓肺纤维化的进程，并改善肺功能[3]。本研究拟采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TGF-β1mＲNA，Smad3mＲNA的表达。同时采用病理切片行HE染色和Masson染色，光镜下观察病理组织学变化并摄片，参照Szapiel［4］等方法评价各组大鼠肺组织肺泡炎程度及肺纤维化程度。并设想在以下几方面深入研究：1、扩大样本量，确证其抗炎作用；2、延长观察时间，重点观察后期的抗纤维化作用；3、观察其对成纤维细胞的作用及其机制。国内外目前未见同类报道。参考文献:[1]陆远强,姜久昆.转化生长因子β1/Smad3通路和百草枯中毒所致上皮-间充质转变[J].中华危重症医学杂志(电子版),2017,10(3):145-148.[2]祝春青,陈冬波,王喆,等.腹腔注射百草枯构建小鼠肺纤维化模型[J].生物技术通讯,2012,23(4):563-566.[3]杨晗,王飞,王全林,等.补阳还五汤对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1/Smad3表达的影响[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(24):240-244.[4]SzapielSV，ElsonNa，FulmerJD，etal．Bleomycininducedinterstitialpulmonarydiseaseinthenude，athymicmouse［J］．AmRevRespirDis，1979，120:893.Paraquat(PQ)ischemicallyknownas1,1'-dimethyl4,4'-bipyridine,themolecularformula:CH3(C5H4N)2CH3Cl2,molecularweight:257.2,since1962asaherbicidehasbeenwidelyused.TheacutetoxicityofPQtohumanandanimalisverystrong,andthereisnoeffectiveantidote,poisoningeventsoftenoccur,themortalityrateishigh.IntheprocessofpulmonaryfibrosisafterPQintoxication,theexpressionlevelandfunctionalstatusofTGF-beta1/Smad3willchange,andthereisalsoobviousEndoMTphenomenon.However,thecorrelationbetweenthesecellsandtransductionfactorsandEndoMT,andtheir专硕3班-石群锋-2018ZD026specificbiologicalmechanismintheprocessofpulmonaryfibrosisinducedbyPQarestillunclear.PQinducedpulmonaryfibrosisisbasedondirecttoxicityor[1]inducedbyimmuneinflammatoryresponse.ZhuChunqing'sresearchshowsthatthereisamaturemodelofpulmonaryfibrosisbyinjectionofPQ.Paraquatcanbeinjectedintraperitoneallyoncetoestablishpulmonaryfibrosismodelinmice.Asarepresentativeprescriptionofpromotingbloodcirculationandremovingbloodstasis,BuyangChangwuDecoctioncandelaytheprocessofpulmonaryfibrosisandimprovepulmonaryfunction.Inthisstudy,reversetranscription-polymerasechainreaction(RT-PCR)wasusedtodetecttheexpressionofTGF-beta1mRNAandSmad3mRNA.Atthesametime,HEstainingandMasonstainingwereusedforpathologicalsections,histopathologicalchangeswereobservedandphotographedunderlightmicroscope,andthedegreeofalveolitisandpulmonaryfibrosisinlungtissuesofratsineachgroupwereevaluatedbySzapiel[4].Andenvisagedinthefollowingareas:1,expandthesamplesizetoconfirmitsanti-inflammatoryeffect;2,prolongtheobservationtime,focusingonthelateanti-fibrosiseffect;3,observeitseffectonfibroblastsanditsmechanism.Nosimilarreportshavebeenreportedathomeandabroad.Reference:[1]LuYuanqiang,JiangJiukun.Transforminggrowthfactorbeta1/Smadspathwayandepithelial-mesenchymaltransitioninducedbyparaquatpoisoning[J].ChineseJournalofCriticalCareMedicine(electronicedition),2017,10(3):145-148.[2]ZhuChunqing,ChenDongbo,WangZhe,etal.Pulmonaryfibrosismodelofmicewasestablishedbyintraperitonealinjectionofparaquat[J].BiotechnologyCommunication,2012,23(4):563-566.[3]YangPi,WangFei,WangQuanlin,etal.EffectofBuyangHuanwuDecoctionontheexpressionofTGF-beta_1/Smad3inlungtissueofpulmonaryfibrosisrats[J].ChineseJournalofExperimentalPrescription,2013,19(24):240-244.[4]SzapielSV,ElsonNa,FulmerJD,etal.Bleomycininducedinterstitialpulmonarydiseaseinthenude,athymicmouse[J].AmRevRespirDis,1979,120:893.专硕3班-石群锋-2018ZD026项目组主要参与者（注:项目组主要参与者不包括项目申请人）编号姓名出生年月性别职称学位单位名称电话电子邮箱证件号码每年工作时间（月）1XX教授博士成都中医药大学[e-mail]52XX博士生硕士成都中医药大学[e-mail]63XX主治医师博士成都中医药大学[e-mail]54XX主治医师硕士成都中医药大学[e-mail]65XX硕士生学士成都中医药大学[e-mail]86XX硕士生学士成都中医药大学[e-mail]8总人数高级中级初级博士后博士生硕士生732313专硕3班-石群锋-2018ZD026国家自然科学基金项目资金预算表(单位：万元)序号科目名称金额备注1一、直接费用40.000021、设备费3(1)设备购置费4(2)设备试制费5(3)设备改造与租赁费62、材料费23.4000SD大鼠，转染，RT-PCR，病理，芯片等73、测试化验加工费2.100084、燃料动力费95、差旅/会议、国际合作与交流费5.7000学术会议，差旅费106、出版/文献/信息传播/知识产权事务费3.0000文献检索，论文发表，邮费，通讯费等117、劳务费3.8000128、专家咨询费139、其他支出2.000014二、自筹资金来源专硕3班-石群锋-2018ZD026预算说明书(定额补助)（请按《国家自然科学基金项目资金预算表编制说明》中的要求，对各项支出的主要用途和测算理由及合作研究外拨资金、单价≥10万元的设备费等内容进行详细说明，可根据需要另加附页。）申请经费预算：总共拟申请经费40万元人民币。支出预算具体说明如下：1、直接用于本项目研究的的费用共计25.4万元人民币，占总申请费用的68.3%，其中科研业务费12万元人民币，占总申请经费的33.3%。7万元用于病理标本检测、电镜观察、免疫组化、流式细胞仪等检测