第三章食品卫生检测技术-食品安全与卫生检测

周次第四周时间2007年9月18日第3-4节章节名称第三章食品卫生检测技术第一节有毒有害物质检测授课方式理论课（1）、实践课（）、实习（）教学时数1教学目的了解黄曲霉毒素B1与测定有关的性质，掌握薄层层析法。教学方法课堂讲授结合演示实验。教学要求重点掌握黄曲霉毒素B1测定方法。教学内容一、食品中黄曲霉毒素B1的检测（一）发现经过（一）毒性（二）与测定有关的性质1、溶解性2、稳定性3、荧光反应（三）薄层层析法1、原理样品中黄曲霉毒素B1经有机溶剂提取，浓缩、净化以及薄层分离前处理后，在波长365nm紫外光下产生兰紫色荧光，根据其在薄层板上显示荧光的最低检出量来测定含量。2、主要试剂AFTB1标准溶液的制备：用百万分之一的微量分析天平精密称取1～1.2mgAFTB1标准品，先加入2ml乙腈溶解后，再用苯稀释至100ml。然后避光置于4℃冰箱中保存。最后进行AFTB1标准溶液浓度的测定。（此标准溶液浓度为10μg/ml）。AFTB1标准使用液Ⅰ：精密吸取1ml10μg/ml标准溶液于10ml容量瓶中，加苯－乙腈混合液至刻度，混匀。此溶液浓度为1μg/ml。AFTB1标准使用液Ⅱ：精密吸取1.0ml1μg/mlAFTB1标准使用液Ⅰ于5ml容量瓶中，加苯－乙腈混合液稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为0.2μg/ml。AFTB1标准使用液Ⅲ：精密吸取1.0mlAFTB1标准使用液Ⅱ于5ml容量瓶中，加苯－乙腈混合液稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为0.04μg/ml。3、操作要点（1）样品的提取、净化玉米、大米、麦类、面粉、薯干、豆类、花生、花生酱等。采用正已烷甲醇水溶液提取法。（2）样品的测定（单向展开法）薄层板的制备↓点样第一点：10μl、0.04μg/mlAFTB1标准使用液。第二点：20μl样品溶液。第三点：20μl样液＋10μl0.04μg/mlAFTB1标准使用液。第四点：20μl样液＋10μl0.2μg/mlAFTB1标准使用液。↓展开与观察↓确证试验↓稀释定量↓结果计算X=0.0004×mVDV21式中：X——样品中AFTB1的含量，μg/kg；V1——稀释前样液的体积，ml；V2——出现同样最低荧光强度时滴加样液的点样量，μl；D——样液的总稀释倍数；m——稀释前相当样品的质量，g；0.0004——AFTB1的最低检出量，μg。（3）说明本法的灵敏度较高，容易产生误差。如薄层板制作不平整、不均匀，点样的间距太小等都会产生误差。AFTB1标准储备液应密封于具塞试管中，在4oc冰箱中避光保存。如果在保存期间体积明显减少，应及时补充溶剂。使用前，应对其测定标准液的浓度。AFT是一种剧毒和强致癌性物质，因此，在使用时特别注意其安全保护。如实验时应佩戴口罩，配标液时应戴乳胶手套。如被标液污染时应及时用50g/L次氯酸钠溶液浸泡消毒。实验结束后应做好清洗消毒工作，对于剩余的AFT标液以及呈阳性样液，应先用50g/L次氯酸钠处理后方可倒在指定的地方。实验所用玻璃器皿消毒后再进行清洗（用50g/L次氯酸那浸泡5min）。教学重点难点重点：薄层层析操作技术。难点：点样技术。讨论练习作业1、薄层层析操作技术需经哪几步完成？2、简述正已烷甲醇水溶液提取法的机理。参考资料《食品分析》主编张水华中国轻工出版社。《食品分析》无锡轻工与天津轻工合编。教研室主任审批意见教学后记练习题：今有一花生样品，疑有黄曲霉毒素B1污染，请选择适当的方法进行定性试验。周次第四周时间2007年9月20日第5-6节章节名称第三章食品卫生检测技术二、食品中有机磷农药残留量的检测（气相色谱法）授课方式理论课（1）、实践课（）、实习（）教学时数1教学目的了解有机磷农药的特性及种类，掌握有机磷农药的测定方法。教学方法课堂讲授结合演示实验。教学要求掌握有机农药残留量的测定方法。教学内容一、食品中有机磷农药残留量的检测（气相色谱法）（一）有机磷农药的特性及种类（二）有机磷农药的检测1、原理食品中残留的有机磷农药经有机溶剂提取并经净化、浓缩后，注入气相色谱仪，气化后在载气携带下于色谱柱中分离，并由火焰光度检测器检测。当含有机磷样品于检测器中的富氢火焰上燃烧时，以HPO碎片的形式，放射出波长为526mn的特征光，这种光通过滤片选择后，由光电倍增管接收，转换成电信号，经微电流放大器放大后，由记录仪记录下色谱峰。通过比较样品的峰高和标准品的峰高，计算出样品中有机磷农药的残留量。2、适用范围本法采用火焰光度检测器，对含磷化合物具有高选择性和高灵敏性，并且对有机磷检出极限比碳氢化合物高10000倍，故排除了大量溶剂和其他碳氢化合物的干扰，有利于痕量有机磷农药的分析。本法适用于粮食、果蔬、食用植物油中常见有机磷农药残留量的测定。为国家标准方法，最低检出量为0.1～0.25ng。3、主要试剂有机磷农药标准贮备液：精密称取有机磷农药标准品敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷、稻瘟净、杀螟硫磷及虫螨磷各10.0mg，分别置于10ml容量瓶中，用苯（或氯仿）溶解并稀释至100mL。此溶液含农药1mg/ml，作为贮备液贮于冰箱中；有机磷农药标准混合溶液：临用时，用二氯甲烷将有机磷标准贮备液稀释成二组标准混合溶液，各有机磷农药浓度为：第一组每ml含敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷，甲拌磷各1μg，第二组每ml含稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷、虫螨磷各2μg；有机磷农药标准混合溶液：系列分别吸取2组有机磷标准混合溶液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml于2组6个10ml容量瓶中，用二氯甲烷分别稀释至刻度。此系列标准混合液中每一组含敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷等各种农药的系列浓度均依次为0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10μg/ml；第二组含稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷、虫螨磷等各种农药的系列浓度均依次为0.00、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20μg/ml。此系列标准混合溶液应根据GC仪的灵敏度于临用前配制。4、操作方法样品预处理（提取、净化和浓缩）↓色谱分析条件↓测定↓定性定量5、说明国际上多用乙腈作为有机磷农药的提取试剂及分配净化试剂，如AOAC，FDA等采取与有机氯农药提取净化大致相同的方法来提取，净化有机磷农药，即用乙腈或石油醚提取，用乙腈/水分配或乙腈/石油醚分配等方法净化。但乙腈毒性大，价格贵，且不易购买，故本法采用二氯甲烷提取，并在提取时根据样品性状加适量无水Na2SO4、中性氧化铝、活性炭以脱水、脱油、脱色，基本上一次完成提取、净化的目的。另有用各种吸附柱（如弗罗里矽土柱、活性炭等）或用扫集共蒸馏方法净化。分析测定有机磷农药时，由于农药的性质不同，故应注意担体与固定液的选择，一般原则是：被分离的农药是极性化合物，则选择极性固定液；若被分离的农药是非极性化合物，则选择非极性固定液，若选择前者，各农药的出峰顺序一般为极性小的农药先出峰，极性大的农药后出峰；若选择后者，则按沸点高低出峰，低沸点的化合物先出峰。有些热稳定性差的有机磷农药如敌敌畏在用气相色谱仪测定时比较困难，主要原因是易被担体所吸附，同时因对热不稳定而引起分解。故可采用缩短色谱柱到1－1.3m，或减小固定液涂渍的厚度和降低操作温度（如本法）等措施来克服上述困难教学重点难点重点：气相色谱操作技术。难点：方法的原理。讨论练习作业1、简述气相色谱法测定原理。2、造成农药污染的可能原因是什么？参考资料《食品分析》主编张水华中国轻工出版社。《食品分析》无锡轻工与天津轻工合编。教研室主任审批意见教学后记练习题：今有一水稻样品，疑为有机磷农药污染，请选用气相色谱法测出其含量。写出操作过程。周次第五周时间2007年9月25日第3-4节章节名称第三章食品卫生检测技术第二节、食品添加剂的测定一、亚硝酸盐的测定授课方式理论课（1）、实践课（）、实习（）教学时数1教学目的了解亚硝酸盐与测定有关的性质，掌握盐酸萘乙二胺法。教学方法课堂讲授结合演示实验。教学要求掌握盐酸萘乙二胺法。教学内容一．食品中亚硝酸盐的测定（盐酸萘乙二胺法）（一）概述1、亚硝酸盐在食品中的作用2、发色机理3、毒性4、限量标准（二）盐酸萘乙二胺法1、原理样品经沉淀蛋白质除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，生成重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色颜料，在538nm波长下测定其吸光度与标准比较定量。本法最低检出限为0.0001g/kg。其反应式如下：2、操作方法（1）样品处理水萃取，乙酸锌和亚铁氰化钾溶液沉淀蛋白质，静置，定容，过滤，中间滤液备用。（2）测定标准曲线的绘制。样液测定。结果计算。（3）说明显色时的PH值以1.9－3.0为宜，显色后稳定性与室温有关，一般认为显色温度为15－30℃，在20－30min内比色为好。当样品中亚硝酸盐含量高时，过量的亚硝酸盐可以将生成偶氮化合物氧化，使红色消失，对结果产生影响，可以采取先放入试剂，然后再滴加试液的方法，防止氧化。教学重点难点重点：分光光度法。难点：方法的原理。讨论练习作业1、怎样从样品中提取亚硝酸盐？2、怎样测样品中硝酸盐的含量？参考资料《食品分析》主编张水华中国轻工出版社。《食品分析》无锡轻工与天津轻工合编。教研室主任审批意见教学后记练习题：有一香肠样品，请你用盐酸萘乙二胺法测出亚硝酸盐的含量。写出详细过程。周次第五周时间2007年9月27日第5-6节章节名称第三章食品卫生检测技术第二节、食品添加剂的测定二、食品中苯甲酸（苯甲酸钠）测定授课方式理论课（1）、实践课（）、实习（）教学时数1教学目的了解苯甲酸与测定有关的性质，掌握酸碱测定法。教学方法课堂讲授结合演示实验。教学要求掌握酸碱滴定法。教学内容二、食品中苯甲酸（钠）测定（碱滴定法）（一）概述１、概念２、与测定有关的性质３、毒性４、限量标准（二）碱滴定法１、原理试样加入饱和氯化钠溶液后在碱性条件下萃取，然后用6mol/L盐酸溶液酸化，用乙醚提取样品中的苯甲酸，将乙醚蒸去，溶于中性醇醚混合溶液中，最后用标准碱液滴定，根据碱液用量来计算苯甲酸（钠）的含量。２、操作方法1．样品处理固体或半固体样品：称取切细粉碎的样品100g置于500ml容量瓶中，加入300ml水，再加入氯化钠至不溶解为止（饱和），然后用100g/L氢氧化钠溶液使其成碱性，摇匀后再加入饱和氯化钠溶液至刻度，静置2h后过滤，弃去初滤液10ml，收集滤液备用。含酒精的样品：吸取250ml样品，用100g/L氢氧化钠溶液使其成碱性，在水浴上蒸发至约100ml时，转入250ml容量瓶中，然后加入3g氯化钠，振摇溶解，再加入氯化钠饱和溶液至刻度，摇匀后静置2h（不断振摇），过滤，收集滤液备用。样品中含脂肪多时，在上述制备好的滤液中加入氢氧化钠溶液使成碱性，加入20－50ml乙醚提取，振摇3min后静止分层，溶液备用。2．提取：吸取滤液100ml置于250ml分液漏斗中，加入6mol/L盐酸溶液，用石蕊试纸试验使其呈酸性，再加3ml，分别用40、30、、30ml乙醚用旋转方法依次分三次提取，每次摇动不少于5min，合并三次提取液置于另一250ml分液漏斗中。用蒸馏水洗涤乙醚提取液至不呈酸性（用石蕊试纸试验），将提取液置于锥形瓶中，在45℃水浴上回收并挥干乙醚（或用索氏抽提法）。3．滴定加入30ml中性醇醚混合溶液，加入10ml水及2滴酚酞指示剂，以0.05mol/L氢氧化钠准溶液滴定至微红色为止，记录消耗碱量。４、结果计算５、说明1．本滴定法适用于样品中苯甲酸含量在0.1%以上的分析。2．提取剂可以用三氯甲烷代替。教学重点难点重点：碱滴定法原理。讨论练习作业试样中加入饱和食盐溶液的作用？参考资料《食品分析》主编张水华中国轻工出版社。《食品分析》无锡轻工与天津轻工合编。教研室主任审批意见教学后记练习题：今有一食品添加剂苯甲酸样品，请你用碱滴定法测出其纯度。周次第八周时间2007年10月23日第3-4节章节名称第三章食品卫生检测技术第三节食品中有害矿物元素测定一、铅的测定授课方式理论课（1）、实践课（）、实习（）教学时数1教学目的了解双硫腙的