JJF 2089-2023 全自动酶联免疫分析仪校准规范

中华人民共和国国家计量技术规范JJF2089—2023全自动酶联免疫分析仪校准规范CalibrationSpecificationforFullyAutomatedELISAAnalyzers2023-10-12发布2024-04-12实施国家市场监督管理总局发布全自动酶联免疫分析仪校准规范CalibrationSpecificationforFullyAutomatedELISAAnalyzers􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀧣􀧣􀧣􀧣JJF2089—2023归口单位:全国生物计量技术委员会主要起草单位:中国计量科学研究院参加起草单位:中检(河南)计量检测有限公司河南省计量科学研究院黑龙江省计量检定测试研究院本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释JJF2089—2023本规范主要起草人:盛灵慧(中国计量科学研究院)武利庆(中国计量科学研究院)参加起草人:丁峰元[中检(河南)计量检测有限公司]赵迎晨[中检(河南)计量检测有限公司]贾会(河南省计量科学研究院)丁海铭(黑龙江省计量检定测试研究院)周彤(黑龙江省计量检定测试研究院)JJF2089—2023目录引言(Ⅱ)………………………………………………………………………………………1范围(1)……………………………………………………………………………………2引用文件(1)………………………………………………………………………………3术语和计量单位(1)………………………………………………………………………4概述(1)……………………………………………………………………………………5计量特性(2)………………………………………………………………………………6校准条件(2)………………………………………………………………………………6.1环境条件(2)……………………………………………………………………………6.2测量标准及其他设备(2)………………………………………………………………7校准项目和校准方法(2)…………………………………………………………………7.1加液体积示值误差和加液重复性(3)…………………………………………………7.2孵育温度示值误差(3)…………………………………………………………………7.3洗涤残留(4)……………………………………………………………………………7.4吸光度示值稳定性(4)………………………………………………………………7.5吸光度示值误差(4)……………………………………………………………………7.6吸光度重复性(5)……………………………………………………………………7.7吸光度通道差异(5)…………………………………………………………………7.8吸光度线性(5)………………………………………………………………………8校准结果表达(6)…………………………………………………………………………8.1校准结果处理(6)………………………………………………………………………8.2校准结果的测量不确定度(6)…………………………………………………………9复校时间间隔(6)…………………………………………………………………………附录A1990年国际温标纯水密度表(7)…………………………………………………附录B校准原始记录格式(8)……………………………………………………………附录C校准证书内页格式(12)……………………………………………………………附录D吸光度示值误差测量结果的不确定度评定示例(13)……………………………ⅠJJF2089—2023引言JJF1071《国家计量校准规范编写规则》、JJF1001《通用计量术语及定义》和JJF1059.1《测量不确定度评定与表示》共同构成支撑本规范制定工作的基础性系列规范。本规范中全自动酶联免疫分析仪检测器部分的计量特性和校准方法主要参考了JJG861—2007《酶标分析仪》。本规范为首次发布。ⅡJJF2089—2023全自动酶联免疫分析仪校准规范1范围本规范适用于吸光度测定原理的全自动酶联免疫分析仪的校准。2引用文件本规范引用了下列文件:JJG861—2007酶标分析仪JJF1059.1—2012测量不确定度评定与表示JJF1071—2010国家计量校准规范编写规则YY/T1529—2017酶联免疫分析仪凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本规范。3术语和计量单位JJG861—2007、YY/T1529—2017中界定的及以下术语和定义适用于本规范。3.1酶联免疫分析enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,通过酶标记抗原或抗体与固相载体表面的抗体或抗原进行免疫反应,实现对目标物进行定性或定量检测的方法。注:酶联免疫分析通常将抗原或抗体吸附在固相载体上(包被),受检样本(含待测抗原或抗体)和酶标记抗体或抗原,按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原和抗体的复合物,固相载体上被结合的酶标记物的量与样本中待测物的量成一定比例。加入酶反应底物后,底物被酶催化生成有色产物,通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应。颜色反应的深浅与样本中相应抗体或抗原的量成比例。3.2全自动酶联免疫分析仪fullyautomatedELISAanalyzer采用酶联免疫分析原理对样本进行定性和定量分析的仪器,其所有分析过程包括样品和试剂的加注、孵育洗板、数据测量、结果计算和输出等都实现了自动化。4概述全自动酶联免疫分析仪(以下简称“分析仪”)通常由液体分配单元、孵育单元、洗板单元、检测单元及计算机系统等核心模块组成。测定时仪器首先通过液体分配单元将受检标本和酶标抗原或抗体按不同的步骤加到包被有抗体或抗原的固相载体(如96孔酶标板)的表面;接着将固相载体转移到孵育单元恒温孵育一定时间;孵育结束后将固相载体转移至洗板单元进行洗涤,将未结合的抗原或抗体洗去;然后加入显色底物并孵育显色,最后采用检测单元测定特定波长下反应液的吸光度,根据吸光度与标本中受检物质的量成一定的比例的原理进行定性或定量分析。1JJF2089—20235计量特性分析仪各项计量特性指标见表1。表1分析仪的主要计量特性指标序号计量特性计量特性指标1加液体积示值误差20μL:不超过±4%200μL:不超过±1.5%2加液体积重复性20μL:不超过2%200μL:不超过1%3孵育温度示值误差不超过±1.5℃4洗涤残留不超过5μL5吸光度示值稳定性不超过±0.0056吸光度示值误差不超过±0.037吸光度重复性不超过1.0%8吸光度通道差异不超过0.039吸光度线性r≥0.996校准条件6.1环境条件6.1.1环境温度:(15~30)℃;6.1.2相对湿度:≤85%。注:上述条件与制造商的产品规定不一致时,以产品规定为准。6.2测量标准及其他设备6.2.1电子天平:分度值为0.01mg和0.1mg,级;6.2.2温度计及温度测量仪:最大允许误差不超过±0.1℃。6.2.3计量标准器或标准物质:应使用计量标准器或经国家计量行政部门批准颁布的光谱中性滤光片标准物质,吸光度标称值分别为0.2、0.5、1.0、1.5、2.0。标准物质或经计量校准后的光谱中中性滤光片吸光度U≤0.01(k=2)。6.2.4纯水:电阻率达到18.2MΩ·cm。7校准项目和校准方法分析仪在正常工作条件下先进行仪器自检和清洗,校准前分析仪应提前开机预热30min以上。纯水在使用前平衡至室温并超声脱气处理,用温度计测量纯水温度并从附录A中查找到对应的密度。2JJF2089—20237.1加液体积示值误差和加液重复性将可密封容器(如500μL带盖离心管)在分度值为0.01mg的电子天平上称量质量,去盖后放到分析仪板架的合适位置,控制样品针往该容器中加入20μL平衡至室温的脱气纯水,立即盖上容器在电子天平上称量质量。根据公式(1)计算加液体积,重复测量6次,根据公式(2)计算加液体积重复性。取后3次测量结果根据公式(3)计算20μL校准点的加液体积示值误差。重复上述过程,加液体积改为200μL,计算200μL校准点的加液体积示值误差。每一根加液针都按上述方法进行校准,并分别报告结果。V=m-m0ρ(1)式中:V———加液体积,μL;m———容器和纯水的总质量,mg;m0———容器质量,mg;ρ———室温下水的密度,g/mL。RV=∑ni=1(Vi-V)2(n-1)×1V×100%(2)式中:RV———加液体积重复性,%;Vi———第i次加液体积测量结果,μL;V———6次加液体积测量结果平均值,μL;n———测量次数,n=6。EV=V0-13∑3i=1ViV0×100%(3)式中:V0———体积设定值,μL;Vi———后3次加液体积测量值,μL;EV———加液体积示值误差,%。7.2孵育温度示值误差将分析仪孵育温度设置为37.0℃,把温度测量仪的传感器放置在酶标板架上并关闭酶标仪仓门,平衡30min待读数稳定后,读取酶标板上有代表性的至少6孔(如B4、B8、B12、G4、G8、G12)的实际温度,每孔重复测量3次,根据公式(4)分别计算并报告上述代表性孔位的孵育温度示值误差。ET,j=T0-13∑3i=1Ti,j(4)式中:3JJF2089—2023j———酶标板上有代表性的至少6孔;T0———孵育温度设定值,℃;Ti,j———j孔第i次温度测量值,℃;ET,j———j孔孵育温度示值误差,℃。7.3洗涤残留取一块96孔酶标板,在分度值为0.1mg的电子天平上称量其质量。设定洗涤程序为全板洗涤,用平衡至室温的脱气纯水逐行或逐列清洗,每孔清洗用量300μL,无浸泡时间,重复清洗5次。清洗完成后,在分度值为0.1mg的电子天平上再次称量96孔酶标板的质量,根据公式(5)计算洗涤残留:w=196m1-m0ρ(5)式中:w———洗涤残留,μL;m1———洗涤后酶标板质量,mg;m0———洗涤前酶标板质量,mg;ρ———纯水密度,g/mL。7.4吸光度示值稳定性选用492nm波长或仪器特有的专一波长,将吸光度标称值为1.0的光谱中性滤光片平放在96孔酶标板的空板架上,以空气为参比,测量并记录仪器的初始吸光度示值,5min后记录吸收度示值一次,记录初始值10min后再次记录仪器示值。取后两次吸光度示值与初始值之差绝对值较大者按照公式(6)计算吸光度示值稳定性r:r=A-A0(6)式中:r———吸光度示值稳定性,无量纲;A0———初始时的吸光度,无量纲;A———5min和10min两次吸光度示值与初始值之差绝对值较大者,无量纲。7.5吸光度示值误差依次选用405nm、450nm、492nm、620nm波长或仪器特有的专一波长,将吸光度标称值分别为0.2,0.5,1.0,1.5,2.0的5块光谱中性滤光片同时平放在96孔酶标板的空板架上,以空气为参比,连续测量3次,依次记录仪器吸光度示值,并计算平均值。吸光度示值误差ΔA按公式(7)计算:ΔA=13∑3i=1Ai-As=A-As(7)式中:ΔA———吸光度示值误差,无量纲;Ai———第i次测量的吸光度值,无量纲;A———3次吸光度测量结果的平均值,无量纲;As———吸光度标准值,无量纲。4JJF2089—2023逐一报告405nm、450nm、492nm、620nm或仪器特有专一波长下,不同吸光度水平的吸光度示值误差。7.6吸光度重复性选用450nm波长或仪器特有的专一波长,将吸光度标称值为0.5或1.0的光谱中性滤光片平放在96孔酶标板的空板架上,以空气为参比,于固定的某一孔位重复测量6次,记录仪器吸光度示值,并计算平均值,按公式(8)计算RA表征吸光度重复性。RA=∑ni=1(Ai-A)2(n-1)×1A×100%(8)式中:RA———相对标准偏差,%;Ai———第i次吸光度