DB11T 1431-2017 桃树根癌病综合防治技术规程

ICS65.020B16备案号：56065-2017DB11北京市地方标准DB11/T1431—2017桃树根癌病综合防治技术规程Technicalregulationsforcontrolofpeachcrowngall(Agrobacteriumtumefaciens)2017-06-29发布2017-10-01实施北京市质量技术监督局发布DB11/T1431—2017I目次前言.................................................................................II1范围................................................................................12规范性引用文件......................................................................13术语和定义..........................................................................14病情分级............................................................................15防治措施............................................................................25.1育苗期预防措施..................................................................25.2苗木选择与定植..................................................................25.3田间管理........................................................................25.4药剂防治........................................................................26育苗期预防效果调查..................................................................2附录A（资料性附录）症状特征.....................................................3附录B（资料性附录）发病规律.....................................................4附录C（资料性附录）检测方法.....................................................5参考文献..............................................................................7II前言本标准按照GB/T1.1—2009相关规则起草。本标准由北京市园林绿化局提出并归口。本标准由北京市园林绿化局组织实施。本标准起草单位：北京市林业保护站、中国农业大学。本标准参与起草单位：北京流村王园果园。本标准主要起草人：王合、米莹、郭岩彬、王建辉、周在豹、杜金萍、龚硕、张崇岭、卢绪利、吴有刚、王永明、王睿琦、赵连祥。DB11/T1431—20171桃树根癌病综合防治技术规程1范围本标准规定了桃树根癌病病情分级、防治措施和育苗期防治效果调查。本标准适用于北京地区桃树根癌病的防治，樱桃、樱花等植物根癌病的防治可参照执行。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8321.9农药合理使用准则（九）NY/T2725氯化苦土壤消毒技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1桃树根癌病peachcrowngall又称桃树冠瘿病、桃树根瘤病，是一种细菌性病害，在根颈和根部产生肿瘤，导致树势衰弱，甚至死亡。3.2桃树根癌病病原菌pathogenicbacteriumofpeachcrowngall引起桃树根癌病的病原菌，为根癌土壤杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）。3.3抗根癌菌剂rootcarcinomabacteriaresistanceagent对根癌病菌具有良好拮抗作用的微生物制剂。4病情分级按肿瘤发生部位将病情分为5级，分级标准如下：0级：植株无肿瘤；1级：肿瘤发生在须根上；2级：肿瘤发生在侧根上；3级：肿瘤发生在侧根与主根的连接处；4级：肿瘤发生在主根、根颈或枝干上。DB11/T1431—20172桃树根癌病症状特征参见附录A，发病规律参见附录B，检测方法参见附录C。5防治措施5.1育苗期预防措施5.1.1苗圃地选择选择非发病地块作为育苗地，避免在前茬为豆类、蔬菜以及林地、林业苗圃等地块育苗；必要时可对育苗地进行土壤熏蒸处理,按GB/T8321.9和NY/T2725相关规定执行。5.1.2砧木种子处理选择抗病的适宜砧木种子，播种前，用抗根癌菌剂拌种处理。5.1.3苗木嫁接采用高位芽接法嫁接，避免接口与土壤接触；嫁接前，使用75%酒精对嫁接工具进行消毒处理。5.1.4苗木出圃对病情为1级、2级的苗木剪除肿瘤，剪除的肿瘤及时销毁；对病情为3级、4级的苗木及时销毁。5.2苗木选择与定植5.2.1对无症状苗木及剪除肿瘤的1级、2级苗木进行蘸根处理并及时定植。5.2.2定植前，将抗根癌菌剂放入陶瓷、塑料等非金属容器中，加水，按1:1调匀成糊状，将剪根后的桃苗浸入菌液中，浸入深度超过根颈上部5cm，即可拿出栽植，随浸随栽。5.3田间管理5.3.1对于碱性土壤的果园，适当增施酸性肥料、有机肥和果树专用肥料。5.3.2减少果园土壤清耕等栽培管理措施以及蛴螬、蝼蛄等地下害虫对根系的伤害。5.3.3将大水漫灌、串灌改为一树一畦的单株灌溉或滴灌。5.4药剂防治对已发病株及时切下肿瘤，用抗根癌菌剂等药剂涂抹伤口，切下的病瘤随即销毁。6育苗期预防效果调查苗木出圃时，调查使用抗根癌菌剂和其它处理的苗木发病等级，计算防治效果。病情指数与防治效果分别按式（1）、（2）计算：病情指数=4×调查总株数]级数值相对×病株数各级[å×100……………………(1)防治效果=对照的病情指数的病情指数对照的病情指数－处理×100%……………………(2)DB11/T1431—20173附录A（资料性附录）症状特征A.1地下部分症状桃树根癌病主要发生在根颈部和根部，包括侧根和须根，树干上偶见。根部被害后通常形成球形、扁球形或不规则的肿瘤。初生瘤乳白色或略带红色，光滑，柔软，后逐渐变褐色乃至深褐色，木质化而坚硬，表面粗糙或凹凸不平，龟裂，表面细胞枯死，内部木质化，并在瘤的周围或表面产生一些细根。最后外皮脱落，露出许多突起状小木瘤，瘤的内部组织紊乱并混有薄壁组织及维管束，在较大的根瘤上还会出现许多小瘤。肿瘤的数目少的1～2个，多的达10余个，直径差异很大，小如豆粒，大如胡桃和拳头，甚至直径达数十厘米。A.2地上部分症状苗木和新植幼龄桃树受害后，发育受阻，生长缓慢，植株矮小，严重时叶片黄化，早衰。成年果树受害后，生长不良，果实小，甚至全株死亡。DB11/T1431—20174AA附录B（资料性附录）发病规律B.1病原菌的越冬病原菌在癌瘤组织的皮层内或在癌瘤破裂脱皮时进入土壤中越冬，细菌在土壤中能存活多年。B.2病原菌的侵入途径病菌通过嫁接、昆虫或人为因素造成的伤口侵入植株。B.3病原菌的传播雨水和灌溉水是自然传播的主要方式，苗木带菌是远距离传播的重要途径。B.4发病条件B.4.1温度湿度病菌侵染与发病需要一定的湿度和温度，太低太高均不利于病害发生。当旬气温达到20℃～23.5℃，地温18℃～20℃以及土壤和水质偏碱时，均有利于该病菌的侵染为害。B.4.2土壤理化性质碱性土壤有利于发病,土壤pH值在6.2～8时均能保持病菌的致病力。偏碱性的土壤和湿度大的沙壤土内发生重，酸性和粘重的土壤中很少发病。B.4.3嫁接方式嫁接口的部位、接口大小及愈合的快慢均能影响发病程度。在苗圃中，嫁接口与土壤接触时间长，染病机会多，发病率高。DB11/T1431—20175附录C（资料性附录）检测方法C.1致病性检测C.1.1致病菌分离取新鲜的冠瘿瘤，用2%的次氯酸钠表面消毒2min，再用70%乙醇表面消毒90s，无菌生理盐水清洗3～5遍，用无菌剪刀将冠瘿瘤剪切成0.5cm的小块，加入2～5倍体积的无菌生理盐水，匀浆后，取上清，涂板到土壤杆菌选择性培养基MW培养基上，28℃下培养48h～72h。MW培养基：每升培养基中含有甘露醇，10.0g；K2HPO4，0.3g；生物素，100μg；NaNO3，5.0g；NaCl，0.2g；MgSO4﹒7H2O，0.1g；0.1%结晶紫，2.0ml；0.1%Fe-EDTA，2.0ml；琼脂，15g～20g。pH，7.0～7.2；121℃高压灭菌30min。C.1.2致病性检测取分离的单菌落，接种到LB培养基上培养48h。将待测菌液配制成浓度为108CFU/ml的菌悬液(OD600为0.6)。用灭菌接种针在生长7d～10d的向日葵茎段上刺数下造成伤口，吸取5µl～10µl待测菌液滴到无菌棉球上后放置于伤口上，以封口膜包裹伤口，温室内培养15d后观察结瘤情况，形成肿瘤的为发病。C.2冠瘿碱的检测方法C.2.1检测用试剂电泳检测缓冲液：按照甲酸:乙酸:水为5:15:80的比例配比。荧光染液：为菲醌-乙醇溶液，由0.02%菲醌-无水乙醇和10%氢氧化钠/60%乙醇溶液按照1：1混合。检测用标准样品：胭脂碱、章鱼碱标准样品，精氨酸标准样品。C.2.2检测方法取植物肿瘤组织1g～2g放入离心管，用解剖针挤压出汁液，离心，用毛细管取上清，点到滤纸上，同时点胭脂碱、章鱼碱和精氨酸标准样品。在甲酸:乙酸:水=5:15:80溶液中电泳1.5h，电泳电压为400V，烘干滤纸，用菲醌-乙醇染液染色，在紫外灯下观测荧光斑点，与标准样品比较，含有胭脂碱或者章鱼碱的为发病。C.3核酸检测C.3.1选取待检测的病菌采用根癌土壤杆菌选择性培养基分离土壤细菌，选取单菌落利用PCR的方法快速检测致病性根癌土壤杆菌。C.3.2聚合酶链式反应（PCR）检测致病性特异性引物PCR的引物为iaaHF2（5’ACATGCATGAGTTATCGTTTGGAAT3’）/iaaHR1（5’GCATCAAGGTCATCGTAAAAGTAGGT3’）；iaaH-F10（5’GGAAACATGCATGAGTTATCGTT3’）/iaaH-R10（5’CCACATCAGCATCAAGGTCATC3’）。DB11/T1431—20176C.3.3聚合酶链式反应（PCR）检测致病性反应体系PCR的反应体系为:10×Buffer2.5mldNTP(10mM)1.0ml菌液(10ng/ml)1.0mliaaHF2(10mM)或iaaH-F100.25mliaaHR1(10mM)或iaaH-R100.25mlTaqDNA酶(5U/ml)0.2mlddH2O19.8mltotal25.0mlC.3.4聚合酶链式反应（PCR）检测致病性反应程序PCR反应程序如下：94℃5min94℃40s54℃40s72℃90s72℃10min4℃保存C.3.5核酸检测的结果配制1%浓度的琼脂糖凝胶，凝胶电泳检测，iaaHF2/iaaHR1引物能够扩增，电泳检测为420bp的DNA条带为致病性阳性；iaaH-F10/iaaH-R10引物能够扩增，电泳检测为424bp的DNA条带可以进一步确定致病性