650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒技术

北京天和瑞生物科技有限公司1650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒技术——适应于BHK21的Flury或ERA毒株一、技术背景BHK21细胞是繁殖狂犬病毒的适合宿主。我国公布的《狂犬病活疫苗（Flury株）制造及检验试行规程》，以及法国维克公司在我国注册的犬/猫用狂犬病灭活疫苗都是采用BHK21细胞。目前，国内BHK21生产兽用狂犬疫苗生产工艺是用传统的转瓶培养BHK21细胞工艺，即将狂犬病毒株（Flury株等）接种单层生长的BHK21细胞，维持培养4～5日，一次性收获、冻融，制备成苗。因每个转瓶均是独立的细胞培养单元，每瓶的细胞质量、病毒产量和滴度都不同，导致国产狂犬疫苗批间差大，隐性污染引起高内毒素等缺点。反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒工艺，不仅能提高BHK21细胞密度，自动监控细胞生长或病毒繁殖时的最适生化条件，提高病毒滴度，而且工艺规模放大相对容易，疫苗质量稳定、批间小。该工艺将改变目前国产兽用狂犬疫苗价廉质低的形象。北京天和瑞生物科技有限公司携手北京清大天一生物技术有限公司，已成功开发了BHK21反应器悬浮培养基、120L-650L-1200L反应器悬浮BHK21细胞技术、650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒工艺等关键技术，为反应器生产兽用狂犬病毒疫苗的产业化奠定了扎实的技术基础。二、工艺技术650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒工艺：利用BHK21悬浮培养基从液氮中复苏已适应悬浮培养的BHK21细胞株，种子细胞经摇瓶、5L反应器和120L反应器等逐级放大培养，最后在650L反应器中悬浮培养BHK21细胞至合适密度，接种狂犬病毒种毒，维持一定的溶氧、pH值、温度等工艺参数，适时收获狂犬病毒上清,制备成疫苗。反应器收获的狂犬病毒滴度高于转瓶培养病毒的滴度。图1表示了反应器悬浮培养BHK21细胞的照片，细胞密度可以达到3×北京天和瑞生物科技有限公司2106cells/ml左右以上。图1反应器中悬浮培养的BHK21细胞，200X三、工艺流程复苏悬浮BHK细胞株摇瓶培养BHK细胞5L反应器培养BHK细胞120L反应器培养BHK细胞650L反应器培养BHK细胞650L反应器生产狂犬病毒经BHK细胞繁殖的种子毒收获狂犬病毒上清配苗狂犬病毒种毒库北京天和瑞生物科技有限公司3四、项目技术资料1.650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒总结报告2.650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒工艺规程3.5L反应器悬浮培养BHK21细胞操作规程4.120L反应器悬浮培养BHK21细胞操作规程5.650L反应器悬浮培养BHK21细胞操作规程6.650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒操作规程7.650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒技术要点8.各级反应器细胞培养记录9.650L反应器病毒培养记录