生产葡萄糖胺之最佳化研究生产葡萄糖胺之最佳化研究生...

13thBiochemicalEngineeringConferenceYuanZeUniversityPI-1以以以以Aspergillussp.生產葡萄糖胺之最佳化研究生產葡萄糖胺之最佳化研究生產葡萄糖胺之最佳化研究生產葡萄糖胺之最佳化研究(OptimumProductionofGlucosamineusingAspergillussp.)Yu-FenChang(張玉芬)1、Ho-ShingWu1*(吳和生)1.BiocatalysisLaboratory,DepartmentofChemicalEngineeringandMaterialsScience,YuanZeUniversity,Chung-Li32003,Taiwan*E-mail:[e-mail]:([phone],Tel:[phone]國科會計畫：NSC96-2221-E-155-043摘要摘要摘要摘要葡萄糖胺(glucosamine)為單胺醣類物質，可治療退化性關節炎。本研究主要利用黃麴菌株Aspergillussp.BCRC31742醱酵生產葡萄糖胺，並分離純化葡萄糖胺鹽酸鹽。實驗分為三部份討論：(1)搖瓶培養主要討論最佳化培養探討條件，培養基條件以精製細砂為碳源和複合培養基蛋白質為氮源，可得葡萄糖胺濃度為3.77g/L、生物量為13.5g/L、含量為0.28g/gbiomass、產率為0.15g/gcarbonsource、生產力為22.4mg/L‧h；(3)以2L發酵槽進行量產最佳化條件培養，迄今可獲得葡萄糖胺濃度為3.51g/L、生物量為15.2g/L、含量為0.30g/gbiomass、產率為0.14g/gcarbonsource、生產力為20.9mg/L‧h；(4)分離純化方法，以醱酵所得溼菌塊經12NHCl於100℃下反應4小時，以NaOH中和至pH7由減壓濃縮機濃縮成葡萄糖胺濃縮液，經烘箱烘乾以乙醇純化得其純度為12.6%。關鍵詞：葡萄糖胺、黃麴菌屬、鹽酸化、最佳化、分離與純化13thBiochemicalEngineeringConferenceYuanZeUniversityPI-2以紅麴菌生產葡萄糖胺之培養基組成最佳化研究以紅麴菌生產葡萄糖胺之培養基組成最佳化研究以紅麴菌生產葡萄糖胺之培養基組成最佳化研究以紅麴菌生產葡萄糖胺之培養基組成最佳化研究(OptimumMediumofProducingGlucosamineusingMonascuspilosus.)Yu-ChiaoChang(魏玉嬌)1、Ho-ShingWu1*(吳和生)1.BiocatalysisLaboratory,DepartmentofChemicalEngineeringandMaterialsScience,YuanZeUniversity,Chung-Li32003,Taiwan*E-mail:[e-mail]:([phone],Tel:[phone]國科會計畫：NSC96-2221-E-155-043摘要摘要摘要摘要葡萄糖胺(glucosamine)為人類關節間潤滑結締組織之主要成分，可治療退化性關節炎。本研究以MonascuspilosusCCRC-31527為生產紅麴菌株；探討不同碳源、氮源、無機鹽類、酸鹼質及溫度等對菌株生產葡萄糖胺(glucosamine)之影響，得到紅麴菌生產葡萄糖胺(glucosamine)之最佳培養條件，首先進行米糠碳源濃度之探討，尋求米糠複合培養基中三種組成分(米糠25g/L；蔗糖20g/L；氯化胺15g/L)等最佳化濃度探討，以期得到最高產量的葡萄糖胺(glucosamine)。米糠碳源濃度探討之實驗結果顯示，在培養溫度為30℃，轉速200轉，米糠複合培養基之起始酸鹼值為pH5.0，培養體積為100mL等培養條件下，葡萄糖胺的產量可達到937.5mg/L。另外，探討醣類為碳源台糖二號砂白糖(B-GradewhiteCrystalsugar)於最適培養條件，250mL三角瓶中裝100mL培養液，培養基為米糠25g/L；B-GradewhiteCrystalsugar25g/L；氯化胺15g/L，培養基之起始pH5.0，在30℃，200rpm振盪培養第七天，可得最佳紅葡萄糖胺(glucosamine)為2023.6mg/L，亦進一步探討小型發酵槽之最佳化培養條件。關鍵詞：紅麴、葡萄糖胺、二級代謝物、碳/氮源、最佳化13thBiochemicalEngineeringConferenceYuanZeUniversityPI-3OptimizationstudyofoleaginousRhodococcusforlipidaccumulationinaselectedcultureMichelleHwai-LiWang(王懷俐)1*,Chin-ChingChien(簡志青)2,JohnChi-WeiLan(藍祺偉)11Biorefinery&BioprocessEngineeringLaboratory,DepartmentofChemicalEngineeringandMaterialsScience,YuanZeUniversity,Chung-Li32003,Taiwan2GraduateSchoolofBiotechnologyandBioengineeringYuanZeUniversity,Chung-Li32003,Taiwan*Fax:[phone]E-mail:[e-mail]hodococcusopacusTCNS94wasfoundtobecapableforPHA(polyhydroxyalkanoates)productionandmayalsobeapotentialmicrobeappliedasanewfeedstockforbiofuelproductioninpreviousstudy(Gauravetal,2007).Inthepresentstudy,theinvestigationwasfirstlycarriedoutonacomparisonofcelldensityderivedfromtheflaskcomplexandselectedculturebyusingglucoseasthecarbonsupply.Avarietyofconcentrationofdifferentcarbonandnitrogensourceisalsoemployedtoidentifythenutrientseffectsuponbiosynthesisoflipidofcell.Inaddition,thetemperatureimpactonneutrallipidaccumulationisundertakenat25and30℃.Thecellswereextractedbyusingacompoundsolventofchloroform/methanolaccordingtoWaltermannetal.(2000)andsubsequentlytoanalyzelipidprofilebyusingthin-layerandgaschromatography.TheresultsindicatelipidgeneratedfromRhodococcusopacusTCNS94couldbeapromisingsupplyforbiofuelindustry,however,thefurtherstudyonlarge-scalefermentationisnecessary.Keywords:oleaginousRhodococcus、lipidaccumulation、thin-layerchromatography13thBiochemicalEngineeringConferenceYuanZeUniversityPI-4以以以以SAM修飾之金奈米粒子應用於修飾之金奈米粒子應用於修飾之金奈米粒子應用於修飾之金奈米粒子應用於免疫分析之研究免疫分析之研究免疫分析之研究免疫分析之研究ApplicationofSAMmodifiedgoldnanoparticlesfortheenhancementofimmunoassayefficiency黃俊彥1、侯劭毅1,2*1.國立台北科技大學生物科技所2.國立台北科技大學化學工程與生物科技系摘要摘要摘要摘要SAM是自我集結單分子層，可以自發性的在不同的金屬基材上形成，其分子藉由化學吸附於基材上，而分子之間靠著凡得瓦爾力集結排列成高度次序、取向性、緊密的單分子層，靠著分子末端官能基可以表現出所修飾的表面性質。近年來，金奈米粒子的應用成為熱門的研究，免疫層析試紙已是成熟的技術，用於免疫分析的開發也漸增中，然而金奈米粒子結合抗體一般認為是物理吸附性的，我們認為有不穩定的問題存在，所以本研究以SAM修飾後與未修飾的金奈米粒子結合抗體用於免疫分析上做比較，分別實驗於dot-blot、durability以及免疫層析試紙，發現以SAM修飾過的金奈米粒子不但較穩定，而且所使用抗體的量也較少，大大減少了分析的成本。關鍵字：SAM、金奈米粒子、抗體13thBiochemicalEngineeringConferenceYuanZeUniversityPI-5StenotrophmonasStenotrophmonasStenotrophmonasStenotrophmonassp.CD02sp.CD02sp.CD02sp.CD02抗抗抗抗重重重重金屬鎘相關基因之選殖與探討金屬鎘相關基因之選殖與探討金屬鎘相關基因之選殖與探討金屬鎘相關基因之選殖與探討林怡薇，簡志青元智大學，生物科技與工程研究所國科會計畫：NSC96-2221-E-155-023摘要摘要摘要摘要本實驗室從重金屬鎘污染的土壤環境中分離出來一株Stenotrophomonassp.(strainCD02)，可以在含高濃度（4mM）重金屬鎘的培養基中生長。此菌株亦能在含高濃度之其他重金屬如鉻、鉛、鎳、銅跟鋅的環境中生長。實驗證實當strainCD02生長到穩定期時，可以從培養基中移除重金屬鎘。Stenotrophomonassp.亦利用effluxpump機制而具有多重抗藥性之特性。本實驗藉由建構Stenotrophomonassp.CD02的基因體DNAfosmid基因庫，探討其與抗重金屬有關的基因與機制。利用體外(invitro)轉位子插入突變法，得到與抗重金屬鎘的表現有關之轉殖菌株。經定序及BLAST同源性比對以及分析其相關基因，得到與Enterobactersp.heavymetaltranslocatingP-typeATPase有很高的同源性之基因。同時也利用PCR技術將Stenotrophomonassp.CD02的heavymetaltranslocatingP-typeATPase基因分離出來，與表現載體（over-expressionvector）接合之後送入經體外轉位子插入突變之後的轉殖菌株F35，以檢視此基因與抗重金屬鎘及抗藥性之可能關聯。關鍵字：重金屬、鎘、環境微生物。13thBiochemicalEngineeringConferenceYuanZeUniversityPI-6Cupriavidustaiwanensis184合成聚合成聚合成聚合成聚羥基丁酸羥基丁酸羥基丁酸羥基丁酸(PHB)基因之選殖基因之選殖基因之選殖基因之選殖鍾婷，蘇伯琦，魏毓宏，簡志青元智大學生物科技與工程研究所國科會計畫：NSC95-2221-E-155-021摘要摘要摘要摘要聚羥基丁酸(polyhydroxbutyrate，PHB)是一種生物性聚酯，具