电喷雾质谱

电喷雾质谱ESI-MS姚鋆2019年10月6日[e-mail]标准蛋白质组学流程•电喷雾是一种离子化方法，可以用作质谱仪的离子源•质谱仪擅长测定生物大分子–分子量–多肽序列–翻译后修饰历史•1914年第一次详细地描述–Zeleny•1964-1969年深入地研究–Taylor–Dole•1989年用于生物大分子–2002年诺贝尔化学奖（1/4）Fenn•1996年纳升级电喷雾（nanoESI）–Mann喷雾•参数：电压、溶液组成、相对位置谱图•Myoglobin–多电荷使得样品谱图复杂质荷比mass-to-chargeratio原理•电喷雾的原理有两种主流解释–库仑爆炸–离子蒸发•核心是去溶剂nanoESI•流速–小于500nl/min•使用拉尖的石英或不锈钢毛细管–末端小于30mm•电压–小于2500V•没有辅助气或者极低的辅助气•常与nanoHPLC或者毛细管电泳（CE）联用nanoHPLC•电喷雾产生的质谱信号强度与被测物质的浓度相关（nano）HPLC与质谱仪联用使用电喷雾的ORBITRAP质谱仪•ORBITRAP质谱仪能精确地测定质荷比•CID、PQD、ETD、HCD都能够将多肽碎裂成碎片离子•速度与精度的平衡CID,PQD&ETDLTQdetectorORBITRAPdetectorHCDORBITRAP检测器•精确测定质荷比–ppm级LTQ检测器•较精确地测定质荷比•擅长多肽的碎裂（nano）HPLC联用质谱仪测定多肽•HPLC用反相模式–C8、C12、C18（ODS）–0.1%TFA、0.1%FA、0.5%Hac•蛋白质组学大量使用胰酶trypsin–N-term、K、R–分子量400-6000串级质谱•时间串联–离子阱•空间串联–三重四极杆ORBITRAP•从本质上来说是时间串联–将生成第一张谱图的任务交给ORBITRAP检测器多肽的碎裂•a/x、b/y、c/z某四肽的碎裂多肽碎裂的谱图•这是一张用LTQ检测器采集的CID碎裂谱图谱图的解析•结合第一张谱图，主要信号峰都得到归属翻译后修饰•第一张谱图–DMass•第二张谱图42424242424242424242Moretogo，butnottoday•质谱仪可以定量地测定蛋白质•质谱仪的硬件构成•质谱仪的软件操作、方法的建立•（nano）UHPLC、CE联用质谱仪•谱图解析、蛋白质定量自动化软件