[课件]血脂四项测定

血脂四项测定2019/10/82血浆中所含脂类统称为血脂，血脂含量可以反映体内脂类代谢的情况。检测血脂时，常在饭后12-14小时采血。我国血脂异常防治建议和美国国家胆固醇教育计划成人治疗计划Ⅲ（NCEP-ATPⅢ）都要求临床常规血脂测定中应至少测定TC、TG、HDL-C及LDL-C这四项。有条件的实验室可测定apoAI、apoB及Lp(a)。2019/10/83【目的要求】掌握：TC、HDL-C、LDL-C、TG测定的基本原理。熟悉：TC、HDL-C、LDL-C、TG测定的操作过程。了解：TC、HDL-C、LDL-C、TG测定对动脉粥样硬化、原发性高脂血症等疾病诊断的临床意义。2019/10/84实验原理---总胆固醇测定（胆固醇氧化酶-过氧化物酶法）胆固醇酯+H2O胆固醇+脂肪酸胆固醇+1/202+H2O△4-胆甾烯-3-酮+H2022H202+4-氨基安替比林+酚醌亚胺+4H2O胆固醇酯酶胆固醇氧化酶过氧化物酶样品中游离及脂化的胆固醇，经过上述反应产生醌亚胺，在505nm波长处测定其吸光度值，计算其含量。2019/10/85实验原理---HDL-C测定加入低密度脂蛋白胆固醇的抑制剂，将低密度和极低密度部分隐蔽起来，直接测定高密度部分的胆固醇含量，显色反应原理同总胆固醇，在510nm波长处测定吸光度值，计算其含量。LDL-C能与磷钨酸-镁和聚乙二醇复合剂作用产生沉淀，用分散剂可使沉淀颗粒细小均一，在630nm处测定其吸光度值，计算其含量。实验原理---LDL-C测定2019/10/86实验原理---TG测定（甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶法）2H202+EHSPT+4-AAP脂蛋白脂酶甘油激酶过氧化物酶甘油三酯+H2O甘油+脂肪酸甘油+ATP3-磷酸甘油+ADP3-磷酸甘油+O23-磷酸甘油氧化酶磷酸二羟丙酮+H202醌亚胺+4H2O2019/10/87主要试剂总胆固醇测定试剂试剂1：Na2HPO4﹒12H2O、KH2PO4、苯酚、胆酸钠，NaN3；试剂2：MOPSO、NaOH、NaN3、MgCL2﹒6H2O、4-氨基安替比林、EDTA-Na2、BSA、CE、CO、POD、液体活性剂Ⅰ。TG测定试剂试剂1：PIPES、CAPOS、BSA、MgCl2、甘油激酶、3-磷酸甘油氧化酶、过氧化物酶、显色剂Ⅰ、显色剂Ⅱ、NaN3；试剂2：PIPES、CAPOS、BSA、GYK、4-APP、显色剂Ⅱ、NaN3。2019/10/88主要试剂、器材HDL-C测定试剂试剂1：磷酸盐缓冲剂、LDL-C抑制剂、DHBS；试剂2：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-APP。LDL-C测定试剂试剂：磷钨酸、氢氧化钠。器材：分光光度计、半自动生化分析仪、恒温水浴箱、微量进样器、移液管等。待测标本：血清2019/10/891、将试剂1与试剂2按1:1比例混匀为工作液。2、按表格加样。加入物（ml）空白管(B)标准管(S)测定管(U)血清--0.02标准液-0.02-蒸馏水0.02--工作液2.02.02.03、比色：混匀各管，置37℃水浴10min，用分光光度计比色，波长505nm，光径1.0cm，以空白管调零，记录各管的吸光度值。总胆固醇测定步骤2019/10/8101、将试剂1与试剂2按10:1比例混匀为工作液。2、按表格加样。加入物（ml）空白管(B)标准管(S)测定管(U)血清--0.02标准液-0.02-蒸馏水0.02--工作液2.02.02.03、比色：混匀各管，置37℃水浴10min，用分光光度计比色，波长510nm，光径1.0cm，以空白管调零，记录各管的吸光度值。HDL-C测定步骤2019/10/8111、按表格加样。加入物空白管(B)标准管(S)测定管(U)血清（ul）--50标准液（ul）-50-蒸馏水（ul）50--工作液（ml）3.03.03.02、比色：混匀各管，室温放置3min，用分光光度计比色，波长630nm，光径1.0cm，以空白管调零，记录各管的吸光度值。LDL-C测定步骤12TG测定步骤2019/10/8加入物（ml）空白管(B)标准管(S)测定管(U)试剂R10.80.80.8血清--0.01标准液-0.01-蒸馏水0.01--充分混匀，37℃水浴5min试剂R20.20.20.2充分混匀，37℃水浴5min1、按表格加样。2、上机，仪器设置：37℃，波长546nm，以空白管调零，记录各管的吸光度值。2019/10/813计算：按下列公式计算A测A标×C标C测=指标标准品浓度参考范围线性范围TC4.20mmol/L＜5.17mmol/L0-20.69mmol/LHDL-C2.60mmol/L0.7-2.00mmol/L0.65-2.6mmol/LLDL-C2.60mmol/L2.0-3.5mmol/L1.3-5.2mmol/LTG1.23mmol/L0.7-1.7mmol/L0-11.4mmol/L2019/10/814注意事项1、每组4位同学，分别做TC、HDL-C、LDL-C、TG的操作。2、加样前先认准工作液、血清标本（记清标本号）、标准品。3、比色杯一定要冲洗干净，测定时比色杯一定要放正，对准光源，拉杆时动作要轻，不能太用力。