GelRed说明书中文版

GelRed（10,000×水溶液）说明GelRed核酸染料特点●无毒性：GelRed独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验结果也表明，该染料的诱变性远远小于EB。●灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBRGreenI。●稳定性高：适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定，耐光性强。●信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。●操作简单：与EB一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。●适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于dsDNA、ssDNA或RNA染色。●与EB有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置：标准的EB滤光片或SYBR滤光片都适用，使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可，在300nm紫外光附近可得到最佳激发。但是GelRed不能被488nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发，因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。GelRed使用方法1．胶染法（用法同EB）（1）制胶时加入GelRed核酸染料（例如：每50mL琼脂糖溶液中加入5μLGelRed10,000×储液，以此比例类推）。（2）按照常规方法进行电泳。注意事项：此方法染色染料用量相对较少。500μL染料大约可以做100块50mL的胶。由于GelRed具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将GelRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。GelRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备，并长期保存直到使用。此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。2．泡染法（1）按照常规方法进行电泳。（2）用H2O将GelRed10,000×储液稀释约3,300倍到0.1MNaCl中，制成3×染色液。（例如将15μLGelRed10,000×储液和5mL1MNaCl加到45mLH2O中）。（3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。注意事项：用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。3×GelRed染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度；选用更长的凝胶；延长凝胶时间以保证边缘清晰；改进上样技巧或选择泡染法染色。几种核酸染料比较名称灵敏度稳定性适用性安全性价格GelRed高高通用大小片段电泳染色美国安全认定无毒中GelGreen高高通用大小片段电泳染色美国安全认定无毒中SYBRGreenI极高差100bp以上片段电泳染色花菁染料，低毒高SYBRGreenII极高差单链核酸分子电泳染色花菁染料，低毒高GoldViewI低高500bp以上片段电泳染色高毒性，强致癌低EB低高100bp以上片段电泳染色强致癌，强诱变低特别提醒：如果您使用的是紫外成像仪，请选择GelRed；如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测，请选择GelGreen在极少数情况下，质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低，此时建议同时尝试两种染色方法以决定哪种方法更加合适。