Agilent1260高效液相色谱仪确认方案

南京健友生化制药股份有限公司NanjingKing-friendBiochemicalPharmaceuticalCo.Ltd安捷伦1260高效液相色谱仪确认方案VerificationProtocolfortheAgilent1260HPLC人员姓名部门签名/日期起草人审核人审核人审核人批准人南京健友生化制药股份有限公司NanjingKing-friendBiochemicalPharmaceuticalCo.Ltd目录1.目的.......................................................................................................................32.确认范围................................................................................................................33.背景.......................................................................................................................34.职责.......................................................................................................................35.预确认....................................................................................................................36.运行确认................................................................................................................47.性能确认................................................................................................................48.偏差与变更...........................................................................................................109.再确认周期...........................................................................................................1010.参考文献..............................................................................................................1011.历史.....................................................................................................................1012.附录.....................................................................................................................10南京健友生化制药股份有限公司NanjingKing-friendBiochemicalPharmaceuticalCo.Ltd1.目的通过建立Agilent1260HPLC的确认方案，以运行确认主要检查Agilent1260HPLC各单元的性能及整机运行是否达到供货单位设计要求；性能确认主要检查Agilent1260HPLC四元泵、进样器、柱温箱、检测器的性能符合设计要求，保证仪器在后续运行检测的准确性。2.确认范围本方案适用于位于制剂厂区质量管理部三楼仪器室固定资产编号为F02-QC00014的Agilent1260型高效液相液谱仪的确认。3.背景可变波长检测器（VWD）联用，主要用于实验室日常检测。与示差折光检测器(RID)联用，主要用于依诺肝素钠原料药及注射液等分子量及分子量分布的检测。4.职责确认程序人员责任准备/执行设备确认小组人员起草确认方案、确认报告，完成设备的确认。审核QC审核确认方案、确认报告。工程部审核确认方案、确认报告。QA审核确认方案、确认报告。批准质量负责人批准确认方案和报告。5.预确认5.1.参与测试人员培训确认根据确认方案内容涉及的文件、仪器、人员的情况，以检查参与确认方案的人员是否都参加过相关文件、仪器及本方案的培训，记录培训号和相关的培训内容于附录1“测试人员培训记录”中。接受标准：参与仪器确认的人员均应参加过方案涉及的文件、仪器、方案的培训。5.2.测试用试剂、试液确认检查确认中使用到的标准品、试剂、计量容器信息，可用于仪器确认。检查内容包括如下：南京健友生化制药股份有限公司NanjingKing-friendBiochemicalPharmaceuticalCo.Ltd标准品：名称、规格、批号、含量、来源等信息。（自制标准品还应包括复标日期。）试剂：名称、规格、批号、有效期、生产厂家等信息。以上确认信息应详细记录于附录2“测试用试剂液确认”。接受标准：所有使用的物料应在有效期内或可用状态。5.3.测试用仪器、仪表确认检查确认中使用到的仪器信息，可用于仪器确认，记录仪器的名称、编号、有效期等信息于附录3“测试用仪器、仪表确认”。接受标准：所有使用到的仪器，如需校验或者计量的，均有在校验或者计量的有效期内。5.4.文件检查确认核查待确认的仪器具有相关的操作文件，IQ/OQ确认前应至少具备使用说明书，PQ确认前应至少具备SOP草案，并将其填写在附录4“待确认仪器相关文件检查”。6.运行确认模块接受标准脱气机连接正常，初始化自检通过四元泵连接正常，初始化自检通过，流动相可流动自动进样器连接正常，初始化自检通过柱温箱连接正常，初始化自检通过VWD检测器连接正常，初始化自检通过RID检测器连接正常，初始化自检通过以上确认信息应详细记录于附录5“Agilent1260HPLC运行确认”。7.性能确认此次性能确认包括如下确认模块：四元泵、自动进样器、柱温箱、VWD检测器、RID检测器；测试项目包括：流速准确度/精密度、梯度混合准确性和波动、进样精密度、进样残留、温度准确性、响应值线性（VWD）、波长准确度（VWD）、基线噪音（VWD）、基线漂移（VWD）、基线噪音（RID）、基线漂移（RID）。模块测试项目测试标准四元泵流速准确度/精密度准确度：±5%，RSD≤0.50%南京健友生化制药股份有限公司NanjingKing-friendBiochemicalPharmaceuticalCo.Ltd梯度混合准确性和波动准确度：±2%，混合波动≤0.2%自动进样器进样精密度RSD≤1.0%进样残留第1针空白中尼泊金丙酯峰面积与空白后进样的对照溶液b中尼泊金丙酯峰面积的10倍的比值不超过0.5%；对照溶液c中尼泊金丙酯峰面积与空白后进样的对照溶液b中尼泊金丙酯峰面积的比值在0.9~1.1%之间。柱温箱温度准确性±2℃VWD检测器响应值线性r2≥0.999波长准确度±2nm基线噪音≤5×10-4AU基线漂移≤5×10-3AU/30minRID检测器基线噪声≤±2.5×10-9RIU基线漂移＜200×10-9RIU/h7.1四元泵性能确认7.1.1流速准确度/精密度确认在仪器控制界面分别设定流速为1.00mL/min，0.5mL/min，以超纯水为流动相，不安装色谱柱。于废液出口用洁净的10ml容量瓶收集，用秒表开始计时，到容量瓶装满至刻度停止，记录所用的时间。重复测量5次，结果记录于附录6“Agilent1260HPLC性能确认-流速准确度/精密度”。由超纯水体积与时间的比值计算得测量流速，准确度计算公式为：准确度=|平均流速-设定流速|×100%设定流速接受标准：计算所得结果准确度应在±5%，RSD应≤0.50%。7.1.2梯度混合准确性和波动确认在仪器控制界面设定流速为1.00mL/min，以超纯水为流动相A，0.5%丙酮为流动相B，不安装色谱柱，检测波长为265nm。程序梯度设置如下表，分别对A-B，A-C，B-D通道进行梯度洗脱：时间(min)流动相A的比例（%）流动相B的比例（%）01000南京健友生化制药股份有限公司NanjingKing-friendBiochemicalPharmaceuticalCo.Ltd0.1901010901010.1505020505020.1109030109030.1010040010040.11000测试前，先用流动相A平衡系统至少10分钟，然后按上述方法和梯度设置运行，记录色谱图。以程序开始B比例为0%时的值为基线值，手动测量出B占整个混合梯度段的10%、50%、90%、100%时对应的高度h（各梯度开始时的高度），计算时以B占100%时的高度为H。结果记录于附录7“Agilent1260HPLC性能确认-梯度混合准确性和波动”。计算公式：式中N：B占50%时梯度时的噪音值，在梯度内选1min计算；h50：B占50%时的高度。接受标准：计算所得结果准确度应在±2%，混合波动应≤0.2%。7.2自动进样器性能确认7.2.1进样精密度和残留确认流动相配制：色谱级甲醇与超纯水按体积比6:4混匀，即得60%的甲醇水溶液。样品溶液配制过程：对照溶液a：称取15mg尼泊金丙酯溶于100.00mL流动相中；对照溶液b：吸取1.0mL对照溶液a于流动相中并定容至10.00mL；对照溶液c：吸取1.0mL对照溶液b于流动相中并定容至100.00mL。结果记录于附录8“Agilent1260HPLC性能确认-进样精密度和残留”。南京健友生化制药股份有限公司NanjingKing-friendBiochemicalPharmaceuticalCo.Ltd仪器设定条件及进样顺序见下表：条件流速1.00mL/min流动相甲醇：水=60：40色谱柱C-8波长254nm进样体积20μL进样顺序进样顺序进样次数对照溶液b6对照溶液a1空白（流动相）1对照溶液b1空白（流动相）1对照溶液c1接受标准：进样精密度：对照溶液b色谱图中所有峰的峰面积，RSD应≤1.0%。进样残留：第1针空白中尼泊金丙酯峰面积与空白后进样的对照溶液b中尼泊金丙酯峰面积的10倍的比值不超过0.5%；对照溶液c中尼泊金丙酯峰面积与空白后进样的对照溶液b中尼泊金丙酯峰面积的比值在0.9~1.1%之间。7.3柱温箱性能确认7.3.1柱温箱温度准确性确认设定柱温箱的温度分别为20℃、30℃、40℃、50℃。等待约30min平衡系统，将校正过的多点巡回检测仪（或者校正过的温度计）放入柱温箱，等待10min后，每隔一分钟记录一次柱温箱内左侧、右侧的温度，连续记录10次。实验结果记录于9“Agilent1260HPLC性能确认-柱温箱温度准确性”。接受标准：平均值与设定值之差应在±2℃。7.4VWD检测器性能确认7.4.1响应值线性确认（VWD）咖啡因标准溶液配制方法：标准溶液5（50.0µg/mL）：称取9.0mg至11.0mg咖啡因标准品，用色谱级甲醇稀释至200.0mL，混匀。南京健友生化制药股份有限公司NanjingKing-friendBiochem