流式多因子检测技术

流式高通量多因子检测技术及应用题纲II.AimPlex多因子检测技术的原理和特质III.需具备什么样的实验条件，才能开展AimPlex检测工作？VI.AimPlex产品应用I.多因子检测技术在生物医药研究中的应用流式多因子检测技术在生物医药研究中的应用细胞因子与疾病免疫调节作用：调节着每个细胞乃至组织活动；直接参与了细胞间相互作用以及细胞外微环境的变化参与疾病发生：类风湿性关节炎；强直性脊柱炎SLE；银屑病；细胞因子风暴以Th淋巴细胞为枢纽的细胞因子调节网细胞因子与疾病治疗多因子检测技术Luminex平台CBAFlowcytomix流式基础上AimPlex流式多重定量技术----检测细胞表面蛋白或胞内蛋白多因子检测与疾病研究肿瘤生物学免疫相关代谢心血管疾病干细胞研究神经生物学肿瘤移植细胞凋亡更少样本高通量更短时间多因子检测涵盖了很多研究领域多因子检测产品广泛应用于疾病的研究•肿瘤(如肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫颈癌等)•心血管疾病(如高血压、动脉粥样硬化)•糖尿病、肥胖症•自闭症、老年痴呆症•自身免疫性疾病(系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、哮喘、过敏反应等)•炎症感染(如结肠炎、克罗恩氏病、败血症等)•传染性疾病(如艾滋病、肝炎等)•其它(如多发性硬化症、营养不良、青光眼、阻塞性肺病、银屑病等)多因子检测应用领域开发研究大学政府专业管理机构医学中心药物研发生物技术企业药物公司临床研究医院医学中心早期诊断临床实验室大学检测测试中心实验室诊断医院专业检测机构所有流式细胞仪客户•基础医学、生物学研究•基础免疫学研究•细胞生物学如信号传导、凋亡•癌症研究、传染病等•药物开发和疗效研究什么是AimPlex多因子检测技术？AimPlex多因子检测技术：利用不同尺寸、不同荧光强度的多个微球群实现多因子的检测利用该技术，配合任何一台配备488nm激发光的流式细胞仪，即可实现24个指标的同步检测。AimPlex技术原理流式细胞仪检测荧光，从而实现对蛋白抗原的检测；结合抗原标准品的标准曲线，可实现对蛋白抗原的定量检测。BeadCytokineAntibody1Antibody2(Biotin+StreptavidinPE)一系列荧光强度不同的微球包被有特异性捕获抗体，与待测样本孵育后，加入检测抗体，形成“三明治”复合物45123不同大小，不同荧光强度的捕获微球，在FCMFL4检测不同的目标蛋白PE荧光强度即为靶蛋白量456123微球FL2(ReporterParameter)FL4(DifferentiatorParameter)不同大小种类微球分布AimPlex检测过程60分钟的抗原抗体孵育30分钟生物素化检测抗体孵育20分钟链霉素亲和素-PE孵育•具有488nm激发光源AimPlex结果的提取和分析流式细胞仪：几乎所有流式细胞仪都可以使用，只要•FCAPArray3.0软件可计算被测样本中待检物的浓度标准曲线分析FCAParray3.0Software曲线自动生成线性或对数形式显示回归曲线拟合110100100010000100000110100100010000MFIpg/mLStandardCurves-Human7-PlexIL-4IFNgIL-2TNFaIL-6IL-8HumanTh1/Th2Standard:Blank样本检测举例HumanTh1/Th2Standard:14pg/mlHumanTh1/Th2Standard:42pg/mlHumanTh1/Th2Standard:123pg/mlHumanTh1/Th2Standard:370pg/mlHumanTh1/Th2Standard:1,111pg/mlHumanTh1/Th2Standard:3,333pg/mlHumanTh1/Th2Standard:10,000pg/mlHumanTh1/Th2unknown1HumanTh1/Th2unknown2AimPlex优势高通量，多指标–同时检测一个标本多达24个指标需要标本量少–节省样品（25µL）、试剂、实验空间、仪器设备选择灵活–研究人员可以根据实验需要，自由组合检测指标耗时短–整个过程只需3个多小时要求低-适用于所有含488激发光的流式细胞仪宽范围，高灵敏-更宽检测范围，高灵敏度，高特异性，高重复性更宽的检测范围1.0010.00100.001000.0010000.001.0010.00100.001000.0010000.00100000.00MFIpg/mLFullRangeStdCurveLowerconcentrationrangestandardcurveforbettercalculationofsampleswithverylowAFPconcentration药明康德客户需求：检测小鼠肝癌模型的AFP浓度AimPlexandLuminex产品对比y=0.5948x+8.0123R²=0.97160200400600800050010001500AimPlex(pg/mL)Luminex(pg/mL)IFNγy=0.6238x-3.149R²=0.96990200400600800050010001500AimPlex(pg/mL)Luminex(pg/mL)IL-10y=0.9792x+113.69R²=0.9694020004000600080001000002000400060008000AimPlex(pg/mL)Luminex(pg/mL)IL-6y=1.0737x+10.264R²=0.9292010002000300040000100020003000AimPlex(pg/mL)Luminex(pg/mL)TNFαy=0.8712x+13.712R²=0.939101002003004000100200300400AimPlex(pg/mL)Luminex(pg/mL)IL-17Ay=0.653x-0.1998R²=0.98070.05.010.015.00102030AimPlex(pg/mL)Luminex(pg/mL)IL-4y=0.9414x-6.6486R²=0.995502000400060000.002000.004000.006000.00AimPlex(pg/mL)Luminex(pg/mL)IL-2人外周血不同处理后分别用AimplexTh1/Th2/Th17(7个指标）检测和Luminex试剂盒检测结果对比AimPlexELISAAimPlexELISA样本量15uL350-700ul所需检测板1块7块操作时间4h47h检测范围2-5000pg/mL2-1500pg/ml反应体系同一不同价格10800元18000元例子：40个样本7个指标：IFN-gamma,IL-10,IL-17A,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha可供测试的样品来源高度多样化•血清•血浆•脑脊液•条件培养基•各种细胞裂解液•各种组织裂解液-肺、支气管、子宫内膜组织、肝、脾、脑、宫颈等组织。•泪液•前列腺液•初乳、羊水•各种脓肿液•腹水、肝囊肿液•支气管肺泡灌洗液•骨裂解液、滑液等•龈沟液、唾液、痰液•血凝块普通常见样品非常规样品几乎所有液质(fluids)的生物样本！小鼠血凝块样本检测Serumandbloodclotlysatesamplesofmicetreatedwithorwithout(Con)LPSweretestedusingAimPlexmousecytokineassays.Thisexperimentindicatesthatbesidesserum,bloodclot(afterlysedwithAimPlexlysisbuffer)canbeusedformeasurementsofmanycytokinesinbloodandpreciousserumsamplescanbesavedforotherassays.Page35AimPlex产品形式预混多因子单因子抗原标准品种属：人、小鼠、大鼠、灵长类，狗低价定制Th1/Th2/Th177-plexkit•T辅助细胞对免疫系统的建立和功能健全起重要作用。AimPlex人和鼠及NHPTh17多重检测系列产品可同步定量检测由Th1，Th2，Th17和Treg细胞分泌的细胞因子，为Th细胞功能鉴定提供有效的检测工具。IFNgamma,IL-2,IL-4,IL-6,IL-10,IL-17AandTNFalpha需具备什么样的实验条件，才能开展多因子检测工作？AimPlex易于在普通实验室开展AimPlexFilterPlateWasherAimPlex不同应用领域试剂盒应用分组名称候选待检物呼吸道炎症组sCD30,sE-selectin,sICAM-1,IL-4,IL-5,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-13,IL-17A,,IFN-gamma,MCP-1,TNF-alpha,sVCAM-1,NGF特应性皮炎组sCD30,sICAM-1,IL-4,IL-5,IL-13,TNF-alpha扩充的心血管组Adiponectin,sCD40L,CRP,sE-selectin,sICAM-1,IL-1beta,IL-6,IL-8,,MCP-1,MPO,PAI-1,sP-selectin,TNF-alpha,t-PA,sVCAM-1糖尿病组Adiponectin,CRP,sICAM-1,IFN-alpha,IFN-gamma,Iso-Insulin,IL-1beta,IL-6,IL-8,IL-10,,Leptin,MCP-1,MIP-1alpha,MIP-1beta,NGF,PAI-1,Resistin,TNF-alpha,TNF-beta,t-PA生长和分化组G-CSF,IFN-alpha,IFN-gamma,IL-1beta,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-13,,IL-23,MCP-1,NGF,TNF-alpha免疫调控组sCD30,sCD40L,IL-4,IL-6,IL-10,IL-12p70,IL-13,IL-23,IFN-alpha,IFN-gamma,TNF-alpha炎症组sCD30,sCD40L,CRP,sE-selectin,G-CSF,sICAM-1,IFN-alpha,IFN-gamma,IL-1beta,IL-4,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-13,IL-17A,,IL-23,MCP-1,MIG,MIP-1alpha,MIP-1beta,sPECAM-1,sP-selectin,TNF-alpha,sTNF-R1,sVCAM-1多发性硬化症组sCD30,sICAM-1,IFN-gamma,IL-4,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-17A,,MCP-1,MIP-1beta,TNF-alpha,TNF-beta,sVCAM-1AimPlex不同应用领域试剂盒扩充的肥胖症组Adiponectin,sCD40L,CRP,sICAM-1,IL-6,,Leptin,MCP-1,MPO,NGF,OPG,PAI-1,Resistin,TNF-alpha,sTNF-R1疼痛组sICAM-1,IL-1beta,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IFN-gamma,MCP-1,MIP-1alpha,MIP-1beta,NGF,TNF-alpha,sVCAM-1先兆子痫组Adiponectin,IFN-gamma,IL-4,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,,TNF-alpha类风湿性关节炎组sCD30,sE-selectin,sICAM-1,sICAM-3,IFN-alpha,IL-1beta,IL-2,IL-4,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-13,IL-17A,,IL-23,MCP-1,M