石蜡切片中提取RNA

分析测试百科»经验共享»[急求]石蜡切片可以做RTPCR吗？2011-10-710:47阿敏[急求]石蜡切片可以做RTPCR吗？[size=4][color=Black][font=楷体_GB2312][b][急求]石蜡切片可以做RTPCR吗？小妹刚开始设计试验，很菜鸟，想请问各位大侠：我做子宫内膜癌的两个基因的rtpcr，石蜡标本可以做rtpcr吗，有什么特殊要求？如果要用冰冻的收集时该注意那些问题呢？[/b][/font][/color][/size]2011-10-710:48+田田+[size=4]当然可以，查询：石蜡包埋组织的DNA提取及其应用[/size]2011-10-710:49阿敏[size=4][color=Black][font=楷体_GB2312][b]谢谢主任，不过大概是我没有讲清楚，我要做的是提取mRNA,逆转录cDNA.听说用石蜡切片很难出结果。[/b][/font][/color][/size]2011-10-710:49阿敏[size=4][color=Black][font=楷体_GB2312][b]谢谢主任，不过大概是我没有讲清楚，我要做的是提取mRNA,逆转录cDNA.听说用石蜡切片很难出结果。[/b][/font][/color][/size]2011-10-710:49#甜#[size=4][color=Purple][font=仿宋_GB2312]RNA早降解了，还怎么作RT-PCR！即使是新鲜的标本如果没有及时放入液氮冻存都作不出来。别在这上面浪费时间了。[/font][/color][/size]2011-10-710:50131415[size=4]理论上是可以的，也有报道作出来的，但我周围没有，如果有时间和钱，可以一试，否则，就别浪费了[/size]2011-10-710:50韩梅梅[size=4]关键是从石蜡组织中提取RNA，我用如下方法：1.切片8μm×10张，置1.5mlEP管2.脱蜡：加二甲苯1200μl,震荡混匀，8600rpm,10min×33.无水乙醇1200μl,震荡混匀，8600rpm,5min×24.吸弃乙醇，37℃烤箱干燥30min5.加裂解液200μl，酶K（20mg/ml）5μl6.组织溶解后，95℃水浴10min,7.4℃冰箱冷却8.加1mlTrozol混匀，9.加氯仿200μl，充分混匀，置3min10.4℃,13000rpm15min.11.吸取水相，加入等体积的异丙醇，-20℃2h12.4℃,13000rpm15min.13.弃上清，加75%乙醇1200μl清洗，14.4℃,11000rpm10min.15.弃上清，室温干燥8min，加20μlDEPC水溶解RNA，55℃10min16.-70℃保存[/size]2011-10-710:51韩梅梅[size=4]我按上面的方法提取的石蜡组织里的mRNA,效果不错.操作要注意:1.注意DEPC消毒2.活检组织及早固定\包埋3.注意实验的第一步里,切片了马上开始提取4.提取MRNA时,最好有人在一旁指导.[/size]2011-10-710:52微笑的海豚[size=3][color=Navy][b]关于韩梅梅网友“石蜡组织中提取RNA”的几点商榷：1、石蜡包埋组织大多来自病理科，这种组织一般是从手术室几经周折到达病理科，其中间环节较多，很少有人会注意避免RNA的降解，因此这些组织中的RNA是很难逃脱降解的命运；2、即使有RNA保留也很难逃过上述脱蜡、烘烤等处理过程；3、“DEPC消毒”表达不妥，其作用是灭活RNA酶；4、石蜡包埋组织中DNA提取绝对没问题，提取RNA恐怕...............？[/b][/color][/size]2011-10-710:52冰激凌小姐[color=DarkOrchid][size=4][font=楷体_GB2312][b]我有个师姐曾经用石蜡切片做过原位杂交，可以得到阳性结果，但用的是新鲜制备的蜡块，作RT也应该没问题吧[/b][/font][/size][/color]2011-10-710:53饭团团[size=4]求救:请问各路高手,小妹要做的是从石蜡切片中提取DNA，从什么可以较上面的连接节省时间的方法阿？不胜感激！谢谢！急[/size]2011-10-710:53不懂[size=4][color=Sienna]理论上是可以做TR-PCR的，可是效果不是很好，尤其是在石蜡切片上，如果真的想做一下，我认为应该注意一下几点：1采取的组织应尽快的固定，并且采取时按照做RT-PCR的采样注意事项进行。2包埋的各步骤用的玻璃器皿应该用DEPC处理3在提取是也应防止RNA的降解，理论上是可以的。我近期也做RNA的原位杂交，是用石蜡切片[/color][/size]2011-10-710:53椰子叶子[size=4]用石蜡切片做RT实在是一个需要很大勇气的工作。我认为这一设想不可行，理由有以下几点：1.如果你用的是病理科保存的石蜡块，由于组织送的不及时，RNA无疑有降解，结果不可信。如果是你用新鲜组织做，直接提取就行，何必石蜡包埋。2.由于RNA的降解以及石蜡提取过程中的丢失，你所取得的RNA质量要打一个大大的问号。要出结果很难。付出于回报不成比例。3.建议可以用免疫组化来代替。[/size]2011-10-710:54阿敏用石蜡切片做RT实在是一个需要很大勇气的工作。我认为这一设想不可行，理由有以下几点：1.如果你用的是病理科保存的石蜡块，由于组织送的不及时，RNA无疑有降解，结果不可信。如果是你用新鲜组织做，直接提取就行，何必石蜡包埋。2.由于RNA的降解以及石蜡提取过程中的丢失，你所取得的RNA质量要打一个大大的问号。要出结果很难。付出于回报不成比例。3.建议可以用免疫组化来代替。===================================================================================================[size=4][color=Black][font=楷体_GB2312][b]我也觉得是这样，可是老师让做，也没办法，现在已经进行了初步的预试验，结果还可以，过两天要试试看看能不能引出b-actin.谢谢大家！[/b][/font][/color][/size]页:[1]查看完整版本:[急求]石蜡切片可以做RTPCR吗？PoweredbyDiscuz!Archiver5.5.0©2001-2006ComsenzInc.