细胞培养考试题

细胞培养试题1、体外培养包括几类？什么是组织培养技术？体外培养包括组织培养、细胞培养、器官培养三类；组织培养技术是指：从体内取出组织模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。2、进行细胞培养的基本条件包括哪些？（1）无污染的环境。无毒和无菌培养环境是保证培养细胞生存的首要条件。（2）适宜温度。人体细胞的适宜温度为36.5℃+0.5℃，偏离时，会影响细胞代谢，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力比对高温强。（3）气体和pH值。开放培养时（碟皿或培养瓶松盖培养），一般置于95%的空气加5%CO2混合气体环境中。O2参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种所需成分。多数细胞缺氧不能生存。CO2既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，作用是维持培养基的pH值，细胞要求7.2-7.4。（4）营养物质。包括糖，无机盐，氨基酸，维生素，促细胞生长因子等。牛血清是提供生长因子和细胞所需物质的来源。（5）渗透压。260-320mOsm/L培养基3、原代培养、传代培养、二倍体细胞、克隆细胞株的概念。原代细胞：直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。传代细胞：初代培养细胞从第一次传代培养后具有增殖能力的细胞群。二倍体细胞：细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同的细胞群。克隆细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单个细胞增殖形成的细胞群。4、制备单细胞悬液的方法主要有哪些？（1）悬浮细胞的分离方法是离心法，最简单方法是采用1000r/min的低速离心10min。（2）实体组织材料的分离方法有机械分离法和消化分离法，机械分离法包括切割分离法（组织培养法）和机械挤压分离法；消化分离法包括胰蛋白酶消化法、胶原酶消化法、胰蛋白酶和胶原酶协同用法、EDTA消化法。5、简述细胞冻存、复苏和运送的方法。（1）细胞冻存方法：预先配制冻存液（含20%血清培养基、10%DMSO）；取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入新鲜培养液，低速离心5分钟；弃上清液，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液，分装至冻存管中。密封后标记冻存细胞名称，日期，细胞状态也可标记，冻存者姓名。（细胞冻存是慢冻的过程：4℃1小时，-20℃1小时，-80℃过夜，液氮中保存）（2）细胞复苏方法（快融）：从液氮中取出冷冻管，迅速投入37～38℃水浴中，使其融化（1分钟左右）。5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上。低速离心10分钟。去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。（3）细胞运送方法：①冻存运送：液氮中；②充液法：细胞传代后贴壁，瓶内充满培养液，密闭封口，保温携带。6、细胞培养的基本方法有哪几种？（1）初代细胞培养：贴壁细胞初代培养、组织块培养法、悬浮细胞的初代培养；（2）传代细胞培养：悬浮生长细胞传代、半悬浮生长细胞传代、贴壁生长细胞传代；（3）球体细胞培养；（4）悬浮细胞培养：成批培养、连续培养、微载体细胞培养法7、干细胞有何特性，如何分类特性：①具有自我更新能力②有无限增殖潜能③可分化成特定组织细分类：按分化能力，分全能、多能、专能性干细胞。①全能性干细胞，又称胚胎干细胞，如受精卵。②多能性干细胞，又称为成体干细胞，如囊胚中的内囊细胞。③专能干细胞，如造血干细胞8、简述贴壁细胞传代培养法的过程。（1）弃去培养瓶中的培养液（2）加入1-2ml0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准）静置2-10min（显微镜下动态监测）。（3）吸去胰蛋白酶液，加入培养液。（4）用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液。（5）吸取1/3—1/4细胞悬液，接种于新的培养瓶内。（6）加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。（7）将后者放入培养箱中培养。9、简答基因转导的目的和用途，并列举细胞内基因转导的常用方法。将外源性基因(或基因组DNA)导入细胞的技术称为基因转导。目的：使外源基因能整合入受体细胞基因组中。用途：研究基因表达、结构和功能。培养细胞是最适宜的对象。基因转导，尤其对于检测癌基因，更为常用。常用方法：染色体转导、细胞融合技术、磷酸钙法、电击法、脂质体法、显微注入法、逆转录病毒介导法、转基因技术（生殖细胞）等（1）染色体转导①细胞融合技术②染色体转导（2）基因转导①基因转染：磷酸钙法、电击法、脂质体法、显微注入法、逆转录病毒介导法等②转基因技术（生殖细胞）10、常用培养细胞的生物学活性检测方法有哪些？（1）细胞计数（2）细胞活性的检查（3）细胞生长曲线（4）细胞克隆形成试验（5）软琼脂集落形成试验11、常用哪些方法检测培养细胞的核酸及蛋白质？（1）DNA检测方法：聚合酶链反应（PCR）、SouthernBlot、基因长度多态性（RFLP）检测；（2）RNA检测方法：RT-PCR、NorthernBlot；（3）蛋白质检测方法：细胞内蛋白质含量的测定、WesternBlot、ELISA、荧光抗体法、组化法12、简述MTT试验原理、试验步骤及应用。试验原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色甲攒颗粒（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值试验步骤：（1）单细胞悬液接种于96孔培养板；103-104细胞/孔，每孔培养基总量200微升（96孔培养板每孔容积370微升），37℃、5％CO2培养箱中培养一段时间（2）加入2毫克／毫升的MTT液（50微升／孔）；继续培养3小时。（3）吸出孔内培养液后，加入DMSO液（150微升／孔），将培养板置于微孔板振荡器上振荡10分钟，使结晶物溶解。（4）酶标仪检测各孔OD(570nm），记录结果。（5）绘制曲线：以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制生长曲线。应用：MTT法简单快速、准确，广泛应用于新药筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性实验等13、简述软琼脂法细胞克隆形成实验的步骤及应用。（1）用蒸馏水分别制备出1.2％和0.7％两个浓度的低溶点琼脂糖，高压灭菌后，维持在40℃中不会凝固。（2）取对数生长期细胞，0.25％胰酶消化并轻轻吹打，使之成为单细胞，作做细胞计数，用20％胎牛血清的DMEM培养液调整细胞密度至1×106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。（3）按1：1比例使1.2％的琼脂糖和2×DMEM培养基混合后，取3ml混合液注入直径6cm平皿中（10cm平皿中加7~10ml），冷却凝固，可作底层琼脂，置CO2温箱中备用。（4）按1：1比例让0.7％的琼脂糖和2×DMEM培养基在无菌试管中相混以后，再向管中加入0.2ml的细胞悬液，充分混匀，注入铺有1.2％的琼脂糖底层平皿中，逐渐形成双琼脂层。待上层琼脂凝固后，置入37℃、5％CO2温箱中培养10~14天。（5）把平皿放置在倒置显微镜下，观察细胞克隆数。计算形成率。应用：常用于检测肿瘤细胞和转化细胞系