实验室常用药品试剂的配置与使用

1/8实验室常用药品试剂的制备与使用(一)认识药品规格纯度规格简写标签颜色级别特点实验纯L.R黄色四主成分含量高，纯度较差，杂质含量不做选择化学纯C.P蓝色三主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质分析纯A.R红色二主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低优级纯G.R绿色一主成分含量很高、纯度很高，有的可作为基准物质(二)染色试剂的配制1.甲基绿（DNA—绿色）和吡罗红（RNA—红色）染色剂配制：a)A液：取甲基绿2g溶于98mL蒸馏水中，取吡罗红G5g溶于95mL蒸馏水中。取6mL甲基绿溶液和2mL吡罗红溶液加入到16mL蒸馏水中，置于棕色瓶中备用。b)B液：是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4g，用蒸馏水溶解至1000mL备用；再取乙酸12mL，用蒸馏水稀释至1000mL备用。取配好的乙酸钠溶液30mL和稀释的乙酸20mL，加蒸馏水50mL，配成pH为4.8的B液（缓冲液）。c)取A液20mL和B液80mL混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。2.I2-KI溶液（淀粉—蓝紫色，蛋白质—黄色）配制：将碘化钾3g溶于蒸馏水中，待全部溶解后加入碘1g，振荡使其溶解，将此液保存在棕色玻璃瓶内。2/83.苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ（木栓化、角质化细胞壁—红色，脂肪、挥发油、树脂等—红色或淡红色）配制：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ干粉0.1g与95%乙醇10mL混合，过滤后再加入10mL甘油。4.1%醋酸洋红染料（染色体—紫红色）配制：将洋红1g与45%醋酸100mL煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量。冷却后过滤，加入4%铁明矾溶液1~2滴，放入棕色瓶中备用。5.龙胆紫酸性染料（染色质—紫色）配制：取龙胆紫1g，溶于少量2%醋酸溶液中，滴加2%醋酸溶液，直至溶液不呈深紫色为止。6.卡宝染色剂（染色体—红色，着色深，保存性好）又名苯酚-品红染色剂配制：a)原液A：将3g碱性品红溶于100mL70%的乙醇中。b)原液B：取原液A10mL加入到90mL5%苯酸水溶液中。（两周内有效）c)原液C：取原液B55mL，加入6mL福尔马林和6mL冰醋酸。d)染色剂：取原液C10~20mL，加45%冰醋酸80~90mL，加山梨醇1.8g，将其配制成10%~20%的苯酚-品红溶液，放置两周后，效果显著。7.本尼迪克溶液（醛糖或醛—黄红色沉淀）又称班氏试剂配制：a)硫酸铜溶液：在50mL加热的蒸馏水中溶解8.5g硫酸铜；b)柠檬酸钠-碳酸钠溶液：在400mL蒸馏水中溶解85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠；3/8c)将硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌并过滤沉淀物。8.斐林试剂（醛糖—砖红色沉淀）配制：a)甲液（0.1g/mLNaOH）：将125g氢氧化钾（钠）和173g酒石酸钾钠溶解在500mL蒸馏水中。b)乙液（0.05g/mLCuSO4）：将34.5g硫酸铜溶于500mL蒸馏水中。c)上述两种溶液应分别保存。在检测葡萄糖时，使他们等量混合，加入待测物的试管内，加热到沸腾。如果有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。9.米伦试剂（含有Tyr的蛋白质—红色沉淀）配制：在60mL浓硝酸（比重1.42)中溶解40g汞（水浴加温可助溶），溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释，静置澄清后，取其上层的清液备用。10.中性红溶液（活细胞—红色）配制：将0.1g中性红溶于100mL蒸馏水。使用时，再稀释10倍左右。11.曙红Y乙醇（细胞质—浅红色）配制：将0.25g曙红溶于100mL95%乙醇。12.钌红染色剂（胞间层—红色）配制：将5~10mg钌红与蒸馏水25~50mL混合。现配现用。13.苯胺蓝溶液（纤维素细胞壁、鞭毛等—蓝色）配制：将苯胺蓝1g溶于0100mL35%或95%的乙醇中。14.间苯三酚溶液（木质素—红色）配制：将间苯三酚5g溶于100mL95%乙醇。溶液呈黄褐色即失效。4/815.番红染色剂（细胞壁、花粉外壁和染色质—红色）配制：a)番红水溶液：将1g番红溶解到100mL蒸馏水中。b)番红乙醇：将1g番红溶解到100mL50%或95%乙醇中。c)苯胺番红乙醇染色液：i.甲液：番红5g+95%乙醇50mLii.乙液：苯胺20mL+蒸馏水450mLiii.将甲、乙两种溶液混合后，充分摇均，再过滤。16.固绿溶液（细胞质、细胞壁—亮绿色）配制：a)固绿乙醇溶液：将1g固绿加入100mL95%的乙醇中。b)苯胺固绿乙醇溶液：将1g固绿加入40mL95%乙醇中，再加入10mL苯胺。充分摇匀后过滤。17.铁矾苏木精染液（细胞分裂时染色体—蓝黑色）又称海登汉氏苏木精染色液甲液（媒染剂）：硫酸铁铵（铁矾）2~4g+蒸馏水100mL（现配现用）乙液（染色剂）：苏木精0.5~1g+95%乙醇10mL+蒸馏水90mL乙液配制：（1）苏木精的成熟：将苏木精溶于乙醇中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。染色步骤：切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后稍经水洗再用另一瓶甲液分色至适度。（甲液与乙液在任何情况下决不能混合）18.美蓝染液（细菌、活体细胞—蓝色）又称亚甲基蓝染液配制：取0.5g美蓝，溶于30mL95%乙醇中，加100mL0.01%氢氧化钾溶液，5/8保存在棕色瓶内。19.伊红染液（细胞质、细胞间质—粉红色）配制：1)伊红水溶液：取1g伊红，溶于99mL蒸馏水中，即成1%伊红水溶液。2)伊红乙醇溶液：取1g伊红，溶于99mL70%乙醇中，即成1%伊红-乙醇溶液。20.革兰氏染液（革兰氏阳性菌—紫色，革兰氏阴性菌—红色）配制：1)甲液（结晶紫液）：a)结晶紫2g+20mL95%乙醇b)草酸铵0.8g+80mL蒸馏水c)将a)与b)混合，静置48小时后使用。2)乙液（碘液）：将2g碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入1g碘，待碘全部溶解后，加水稀释至300mL。3)丙液：95%乙醇溶液。4)丁液（番红花红液）：10mL2.5%番红花红乙醇溶液+100mL蒸馏水5)先用甲液染色，再加乙液固定，后用丙液处理，最后用丁液复染。21.硼砂洋红染液（细胞核、糊粉粒—红色）配制：取4g硼砂，溶于96mL蒸馏水中。再加入2g洋红，加热溶解后煮沸30min，静置3d，用100mL70%乙醇冲淡，放置24h后过滤。22.席夫试剂（醛类化合物—紫色）又称品红亚硫酸试剂配制：称取0.5g碱性品红，加到100mL煮沸的蒸馏水中，再微微加热5min，不断搅拌，使它溶解。溶液冷却到50℃时过滤，滤液中加入10mL1mol盐酸。再冷却到25℃时加入0.5g偏重亚硫酸钠（Na2S2O5）或无水亚硫酸氢钠（NaHSO3）。把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中24h。在溶液颜色退6/8到淡黄色时，加入0.5g活性炭，用力荡1min，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光（瓶外用黑紙或暗盒遮光）。若溶液变成红色，即失效。23.詹纳斯绿乙醇饱和溶液（线粒体细胞色素C氧化酶—蓝绿色）又称健那绿乙醇饱和溶液配制：1)詹纳斯绿B乙醇饱和染液：取125mL詹纳斯绿B，加入到62.5mL无水乙醇中，搅拌。2)取詹纳斯绿B乙醇饱和染液，按1:30000比例加蒸水稀释，用来染原生动物线粒体3)取詹纳斯绿B乙醇饱和染液，按1:1000比例加蒸馏水稀释，用来染新鲜蛙血线粒体。24.黑色素液（荚膜—黑色）配制：10g水溶性黑素+100mL蒸馏水+0.5mL甲醛(福尔马林)25.1%瑞氏染色液（细胞核—紫红色，细胞质—蓝色）又称伊红美蓝染料配制：称取瑞氏染色粉6g，放研钵内磨细，不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用，保存时间愈久，则染色色泽愈佳。(三)脱水剂（各级乙醇）的配制所需配制乙醇含量（%）原有含量（%）蒸馏水量（mL）乙醇+蒸馏水量（mL）30956530+6550954550+4570952570+257/885951085+10(四)常用固定液的配制1.FAA固定液（适用于一般根、茎、叶、花药、子房组织切片，但对染色体的观察效果较差）配制：福尔马林（38%甲醛溶液）5mL+冰醋酸5mL+70%乙醇90mL幼嫩材料用50%乙醇代替70%乙醇，可防止材料收缩；还可加入5mL甘油（丙三醇）以防蒸发和材料变硬。2.FPA固定液（同FAA，但效果更好）配制：福尔马林（38%甲醛溶液）5mL+丙酸5mL+70%乙醇90mL3.卡诺氏固定液（适用于一般植物组织和细胞的固定，常用于根尖、花药压片及子房石蜡切片等）配制：无水乙醇：冰醋酸（V:V）=3:3有极快的渗透力，根尖材料固定15~20min即可，花药则需1h左右，此液固定最多不超过24h，固定后用95%乙醇冲洗至不含冰醋酸为止；如果材料不马上用，需转入70%乙醇中保存4.10%中性缓冲福尔马林配制：磷酸二氢钠4g+磷酸氢二钠6.5g+37%甲醛100mL+蒸馏水900mL，充分混合，标记pH和日期。5.Zenker液（核固定剂）配制：1)Zenker贮备液：氯化汞50g+重络酸钾25g+硫酸钠10g+蒸馏水1000mL，充分混合。稳定性2年。2)Zenker工作液：Zenker贮备液95mL+冰醋酸5mL。3)由于Zenker液中含氯化汞，固定后必须脱去汞色素。（鲁哥氏碘液5min，8/8水洗；5%硫代硫酸钠5min，水洗并按照染色步骤要求进行染色）4)组织必须用流水冲洗去除重铬酸钾。(五)常用透明剂使材料清净透明，增加组织折光。1.二甲苯（必须脱浄水分，以免发生乳状混浊）为了避免材料收缩，应逐步从无水乙醇过渡到二甲苯中：无水乙醇→无水乙醇+二甲苯（V:V=1:1)→二甲苯2.氯仿（会破坏染色）1/5氯仿（氯仿V1:无水乙醇V2=1:4）→2/5氯仿（V1:V2=2:3）→3/5氯仿（V1:V2=3:2）→4/5氯仿（V1:V2=4:1）→纯氯仿（两次）(六)解离液与离析液1.解离液：a)盐酸乙醇：（95%乙醇V1：浓盐V2=1:1），二者混合即成。b)盐酸溶液：i.1mol/L盐酸配方：浓盐酸（相对密度1.19）82.5mL，用蒸馏水定容1000mL。ii.0.2mol/L盐酸配方：浓盐酸（相对密度1.19）16.5mL，用蒸馏水定容1000mL。2.离析液：a)铬酸-硝酸离析液（适用于木质化组织，如导管管胞、纤维、石细胞等，亦可用于草质根、茎成熟组织的解离）：10%铬酸液V1:10%硝酸液V2=1:1b)硝酸-氯化钾离析液：硝酸5mL与1g氯化钾，加热5min。