基因工程(复习)

一、原核基因的结构二、真核基因的结构（二）基因操作的工具基因的剪刀—限制性内切酶基因的针线—DNA连接酶基因的运输工具—运载体限制性核酸内切酶1.特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，在特定的切点(磷酸二酯键)切割。2.分布：主要在微生物(细菌，酵母菌等）。3.结果：产生黏性末端或平末端4用途：用于提取目的基因和切割运载体被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。•要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端或平末端？要切两个切口，产生四个末端。•基因的针线——DNA连接酶（二）基因操作的工具连接的部位：磷酸二酯键，不是氢键。DNA连接酶的分类：AATTGCCTTAAGDNA连接酶与DNA聚合酶的异同点：相同点：形成磷酸二酯键但是：1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键2）DNA聚合酶需要以一条DNA链为模板；而DNA连接酶不需要模板。运载体1.作用：2.条件：3.种类：质粒（常用的）、噬菌体的衍生物和动植物病毒。将外源基因送入受体细胞。(1)能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。(2)具多个限制酶切点(3)具有某些标记基因，便于进行筛选。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。1.以下说法正确的是（）A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D、DNA连接酶使黏性末段的碱基之间形成氢键C练习2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制（）B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNAD练习3.(多选）有关基因工程的叙述中，错误的是（）A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传性状，培育生物新品种B、重组DNA的形成在细胞内完成C、目的基因须由运载体导入受体细胞D、质粒都可作为运载体BD练习5）基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）A、人工合成目的基因B、目的基因与载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达C巩固练习基因操作的基本步骤目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测和鉴定获取目的基因的方法：1从基因文库中获取（基因组文库或CDNA文库）2利用PCR技术扩增目的基因3人工化学方法合成基因组文库从基因文库中获取目的基因：基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(genelibrary)基因组文库:基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库.部分基因文库:基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库.1变性（90-95度）2退火（55-60度）3延伸（70-75度）2、利用PCR技术扩增目的基因①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术③条件：_______________________、_______________、___________、___________.②原理：__________④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）⑤结果：聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制已知基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对引物耐高温的DNA聚合酶指数2n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增⑥过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录标记基因：是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来1.将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法3、将目的基因导入微生物细胞用Ca2+处理细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子四环素抗性基因氨苄青霉素抗性基因(四)目的基因的检测与鉴定检测—鉴定——①检测转基因生物染色体上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法：方法：方法：DNA分子杂交DNA分子杂交抗原抗体杂交DNA分子杂交示意图将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。基因探针：用放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段如果有杂交带出现，说明被检测物含有与目的基因可以碱基配对的序列