基因工程

基因工程一、名词解释：1．蛋白质工程2．基因组文库3．多克隆位点4．Southern杂交5．基因治疗6．转基因动物7．显微注射技术8．Klenow片段9．荧光定量PCR10．基因芯片11．cDNA文库12．基因枪13．融合蛋白14．表达载体15．限制性核酸内切酶16．Northern杂交17．逆转录PCR18．转基因植物19．体细胞核移植20．DNA改组21．多克隆位点22．穿梭载体23．DNA连接酶24．核酸分子杂交25．融合蛋白26．基因敲除27．反义核酸技术28．遗传工程29．生物技术30．基因工程31．细胞工程32．黏粒载体Cosmidvecto：33．分子克隆34．载体35．转化和转染36．基因文库37．RACE38．探针Probe39．逆转录PCR(RT-PCR)40．插入失活Insertinactivation41．S-D序列42．穿梭质粒载体Shuttleplasmidvector43．MCS44．同裂酶（同切点酶）45．同尾酶46．测序酶47．限制性核酸内切酶48．限制性片段长度多态性（RFLP）49．星号活性50．克隆载体：51．YAC（酵母人工染色体）：52．BAC（细菌人工染色体）53．表达载体54．病毒表达载体：55．T-载体：56．Ti质粒（tumorinducingplasmid）：57．粘粒载体58．一元载体：59．双元载体：60．卸甲载体：61．质粒的相容性：62．质粒的不相容性：63．转移性：64．T-DNA65．T-DNA区：66．α-互补：67．cos序列（cohesiveendsite）：68．COS位点：69．端粒重复序列（telomericrepeat，TEL）：70．自主复制序列：71．多克隆位点72．分子杂交：73．菌落原位杂交：74．真核细胞原位杂交：75．荧光原位杂交（fluorescenceinsituhybridization，FISH）76．凝胶阻滞试验：（gelretardationassay）77．盒式诱变78．定点诱变（寡核苷酸介导；重叠延伸PCR、大引物PCR）79．体外随机诱变80．重叠基因81．DNaseI足迹试验82．衔接物83．DNA接头（人工接头）84．接头分子连接法（DNA接头连接法）85．ScFv86．基因置换87．转化子（transformant）：88、感受态（competence）：89．“选择（selection）”90．“筛选（screening）”91．目的基因：92．融合基因：93．报告基因：94．代表性差异分析：95．2цm质粒：96．mRNA差异技术：97．动物生物反应器：98．反向PCR：99．平台效应：100．RAPD技术：101．AFLP：102．松弛型质粒：103．亚克隆：104．核酸疫苗：105．基因工程疫苗：106．RDA和SSH：107．转座子标签技术/T-DNA标签技术：108．随机引物(Randomprimer)：109．引物步移(Primerwalking)：答案：1．蛋白质工程基于对蛋白质结构和功能的认识，进行分子设计，通过基因工程途径定向地改造蛋白质或创造合乎人类需要的新的突变蛋白质的理论或实践活动。2．基因组文库把某种生物的基因组DNA切成适当大小，分别与载体结合，导入宿主细胞，形成克隆。汇集这些克隆，应包含基因组中的各种DNA顺序，每种顺序至少有一份代表。这样的克隆片段的总汇，叫基因组文库。3．多克隆位点一段短的DNA序列，含有多种限制性核酸内切酶的酶切位点，是外源基因插入的位点。4．Southern杂交利用硝酸纤维素膜或经特殊处理的滤纸或尼龙膜具有吸附DNA的功能，先作DNA片段的凝胶电泳，并将凝胶电泳中的DNA区带吸附到膜上，然后直接在膜上进行同位素标记核酸探针与被测样品之间的杂交，再通过放射自显影对杂交结果进行检测。5．基因治疗就是指向有功能缺陷的细胞补充相应功能基因，以纠正或补偿其基因缺陷，从而达到治疗的目的。6．转基因动物借助基因工程技术把外源目的基因导入动物的生殖细胞、胚胎干细胞或早期胚胎，并在受体染色体上稳定整合，使之经过各种发育途径得到能把外源目的基因传给子代的个体，叫转基因动物。7．显微注射技术将在体外构建的外源目的基因，在显微操作仪下用极细的微吸管注射到处于原核时期的受精卵原核中，外源基因在受精卵繁殖过程中通过DNA的复制而整合到动物基因组中，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体的子宫内继续发育，进而得到转基因动物。8．Klenow片段DNA聚合酶的大亚基，具有5－3聚合酶和5－3核酸外切酶的作用。9．荧光定量PCR通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析。以实时检测外源基因的表达情况。10．基因芯片将基因文库的克隆以矩阵的方式排列在芯片上，利用不同荧光标记不同组织的RNA或cDNA或基因群，与芯片进行杂交，从而确定不同组织的差异表达基因或特定基因群的方法。11、cDNA文库将某一个组织中的全部mRNA都反转录成cDNA，分别与载体连接形成的克隆的集合体。12、基因枪基因枪法，也称微粒轰击法，是将DNA包被到金粒或钨粒中，然后把这些粒子加速推进靶细胞。13．融合蛋白融合表达一般是将克隆化的基因引入某表达载体编码的高表达蛋白一起融合表达。14．表达载体含有基因表达调控序列能将目的基因在人工控制下置于生物宿主中大量生产的载体。15．限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异性核苷酸序列并由此特异切割DNA双链结构的水解酶。16．Northern杂交又称为RNA印迹法，是将RNA样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移到硝酸纤维素滤膜上，用同位素或生物素标记的DNA或RNA特异探针针对固定于膜上的mRNA进行杂交，洗脱除去非特异性杂交信号，对杂交信号进行分析，以确定目的基因的表达组织。17．逆转录PCR以mRNA为模板用逆转录酶进行的PCR反应。18．转基因植物含有外源目的基因并能稳定遗传的植物体。19．体细胞核移植将外源目的基因导入能传代培养的动物体细胞（包括动物成体体细胞、胎体成纤维细胞等），以这些动物体细胞为核供体，通过显微操作或电融合方法使核供体与去核的原核胚细胞或去核的成熟卵母细胞核受体进行细胞重组融合，使其不经过有性繁殖过程。然后再对重组的胚胎进行胚胎移植，进而得到带有外源基因的转基因动物。20．DNA改组用DNAaseI先将一个DNA片段消化成许多小片段，然后不加引物进行PCR，使得消化后DNA小段之间重新按多种组合方式连接重组，然后利用原来整片段DNA两端的引物进行加引物的PCR扩增，以便得到一系列改组后的突变DNA序列。21、多克隆位点：一段短的DNA序列，含有多种限制性核酸内切酶的酶切位点，是外源基因插入的位点。22．穿梭载体：能够在两种以上的受体细胞中繁殖和扩增的载体。23．DNA连接酶：DNA连接酶负责双链DNA中相邻3`-OH与5`-磷酸基团之间的磷酸二酯键的形成。24．核酸分子杂交：主要是根据两条单链DNA（或DNA与RNA）中互补碱基序列能专一配对的原理进行的。在一定条件下，单链DNA或RNA能与另一条单链DNA上互补的碱基形成氢键，从而使两条单链杂交形成双链DNA分子。通常利用已标记的某一DNA或RNA片段或合成一段寡核苷酸作为探针，探测重组DNA分子中是否有DNA片段与探针发生同源性杂交，然后利用放射自显影方法进行检测。25．融合蛋白：融合表达一般是将克隆化的基因引入某表达载体编码的高表达蛋白一起融合表达。26．基因敲除：利用同源重组的原理，通过载体将外源的失活的基因替换掉内源的正常的基因，从而使基因沉默而不表现突变性状的方法。27．反义核酸技术：利用反义DNA或反义RNA能够与内源mRNA互补杂交，从而抑制内源基因表达的技术。28．遗传工程是遗传学和工程学相结合的一门技术科学。借用工程技术上的设计思想，在离体条件下，对生物细胞、细胞器、染色体或DNA分子进行按图施工的遗传操作，以求定向地改造生物的遗传性。遗传工程的概念有广义和狭义之分。29．生物技术又称生物工艺学，生物工程学。是根据生物学、化学和工程学的原理进行工业规模的经营和开发微生物、动植物细胞及其亚细胞组分，进而利用生物体所具有的功能元件(如基因、蛋白质)等来提供商品或社会服务的一门综合性科学技术。它包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程等。30．基因工程(geneengineering)又称基因操作(gereemanipulation)、重组DNA(recombinantDNA)。基因工程是以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因(DNA分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导人活细胞，以改变生物原有的遗传特性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的结构和功能。31．细胞工程(cellengineering)应用细胞生物学的原理和方法，结合工程学的技术手段，按照人们预先的设计，有计划地改变或创造细胞遗传性的技术，以及在体外大量培养和繁殖细胞，或获得细胞产品，或利用细胞体本身的技术领域。主要内容包括细胞融合、细胞拆合、染色体转移、基因转移、细胞或组织培养等。由于所用细胞的来源不同，细胞工程又分为微生物细胞工程、植物细胞工程、动物细胞工程等。32．黏粒载体（Cosmidvector）含有cos位点的质粒载体。33．克隆(clone)意为无性繁殖系。DNA克隆即将DNA的限制酶切片段插入克隆载体，导入宿主细胞，经无性繁殖，以获得相同的DNA扩增分子。故DNA克隆为分子克隆。34．载体将外源DNA带入宿主细胞并进行复制的运载工具，称为载体（vector）。克隆载体通常是由质粒、病毒或一段染色体DNA改造而成。35．转化和转染将外源DNA导入宿主细胞，从而改变细胞遗传性状，称为转化；将病毒DNA直接导入细跑，称为转染。36．基因文库基因文库是指整套基因组DNA片段分子克隆的总体。基因文库的构建包括基因组DNA的随机片段化、载体DNA的制备、重组体DNA的体外包装、重组噬菌体感染大肠杆菌、基因文库的鉴定和扩增等步骤。37．RACE是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3，或5，端之间未知序列的方法。38．Probe:指被标记物质标记了的核酸。39．逆转录PCR(RT-PCR)：先用逆转录酶作用于mRNA，以寡聚dT为引物合成cDNA第一链，然后用已知一对引物，扩增嵌合分子，这种方法称为逆转录PCR。40．插入失活:基因工程载体上的某些选择标记基因常常含某种或某几种限制性内切酶的单一酶切位点，在该位点用相应的限制性内切酶处理，并将外源DNA片段插入该位点，则插入的外源DNA片段将破坏原有基因的读码框，往往导致原有的选择标记基因无法翻译表达，或即使翻译表达，形成的也是丧失了原有生物活性的蛋白质，这一现象称为插入失活。。41．S-D序列：在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，含有一个转译起始密码子及同16S核糖体RNA3，末端碱基互补的序列，该序列最初由Shine、Dalgarno发现，故后来命名为Shine—Dalgarno序列，简称S-D序列。42．穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。43．MCS:指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。44．同裂酶（同切点酶）：有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶序列，这类酶称为同裂酶。45．同尾酶：与同裂酶对应的一类限制性内切酶,它们来源各异，识别的靶序列也各不相同,但切割后都能产生相同的黏性末端,特称为同尾酶。46．测序酶：是经修饰过的T7噬菌体DNA聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸，这样使得T7DNA聚合酶完全失去了3~-5~外切酶活性，只有5~-3~