实验二-食品中沙门氏菌的检验

实验二：食品中沙门氏菌的检测沙门氏菌属简介沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关的革兰氏阴性、需氧或兼性厌氧、无芽孢、绝大部分具有周生鞭毛的杆菌。本菌属种类繁多，抗原结构复杂，现已发现的血清型多达2400种以上。沙门氏菌可通过人类、畜、禽的粪便或带菌者直接或间接污染食品、生产环境及生产的各个环节，特别是以动物及其脏器为原料的食品污染几率比较高。受到污染的食品、不仅直接影响到食用者的安全，也造成沙门氏菌的传播和流行。故对某些食品必须对沙门氏菌进行检测。病原学特点致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌，鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌。最适生长温度为37℃，在普通水中不易繁殖。相对而言，沙门氏菌属不耐热，55℃、1h或60℃、15~30Min即可被杀死。污染来源广泛分布于各种牲畜以及鸟类和鼠类的肠腔中，并在动物中广泛传播和感染人群。食物的污染源可能来自被传染的啮齿类动物和昆虫。另一个将沙门氏菌带入食物链的重要来源是动物性食品。中毒表现恶心、头痛、呕吐、寒战及腹泻等症状，引起的疾病主要有肠热症、慢性肠炎和败血症等。预防措施不食用病死牲畜肉，对食品进行低温冷藏和高温杀菌，根据食品种类和大小控制好温度。1猪霍乱沙门氏菌(Salmonellacholerae)11鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)21肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis)3实验内容实验目的实验原理实验材料和器皿实验方法和步骤思考题一.实验目的学习食品中沙门氏菌的基本检测方法二.实验原理沙门氏菌在各种选择性培养基上的菌落形态不同，这可以作为辨别沙门氏菌的一个简单的方法。由于沙门氏菌耐热性不强，食品中污染的沙门氏菌常在生产过程中受到损伤而处于濒死状态，因而直接在选择性培养基上培养将无法生长，导致漏故检验时须在无选择性的增菌液中进行培养，使其复苏，然后再进行选择性增菌。三.实验设备和材料实验器材：恒温培养箱、移液管、锥形瓶、培养皿、酒精灯、接种针、试管架、灭菌锅实验材料：德尔卑沙门氏菌株(S.derby)等四、培养基和试剂缓冲蛋白胨水（BPW）、四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂五、操作步骤1、前增菌——使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。2、选择性增菌——在含选择性抑制剂的促生长培养基中，样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。3、选择性平板分离——这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。4、生理生化筛选——排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。5、血清学技术——提供了培养物菌种的鉴定。检样25g(mL)样品+225mLBPW1ml+TTB10mL1ml+SC10mL36℃±1℃，8h-18hBSXLD(或HE、显色培养基)观察菌落状态，挑取可疑菌落进行生理生化和血清型的鉴定42℃±1℃，18h~24h36℃±1℃，18h~24h36℃±1℃，40h~48h36℃±1℃，18h~24h沙门氏菌检验程序沙门氏菌的分离分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板、一个XLD琼脂平板和一个HE琼脂平板。于36℃±1℃分别培养18h～24h或40h～48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌BS琼脂（36℃±1℃40h～48h）菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。HE琼脂（36℃±1℃18h～24h）蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。XLD琼脂（36℃±1℃18h～24h）菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。亚硫酸铋琼脂（BS）含有煌绿、亚硫酸铋能抑制大肠杆菌、变形杆菌和革兰氏阳性菌的生长，但对伤寒、副伤寒等沙门菌的生长无影响。伤寒杆菌及其他沙门菌能利用葡萄糖将亚硫酸铋还原成硫酸铋，形成黑色菌落周围绕有黑色和棕色的环，对光观察可见有金属光泽。选择性琼脂平板HE琼脂在保证细菌所需营养的基础上，加入了一些抑制剂，如：胆盐、柠檬酸盐、去氧胆酸钠等，可抑制某些肠道致病菌和革兰氏阳性菌的生长，但对革兰氏阴性的肠道致病菌则无抑制作用。菌落为蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。选择性琼脂平板XLD琼脂培养基中含有去氧胆酸钠作指示剂，在该浓度下的去氧胆酸钠也同时作为大肠埃希氏菌的抑制剂，而不影响沙门菌属和志贺菌属的生长。选择性琼脂平板六.实验报告1.记录你说观察到的沙门氏菌菌落特征。2.为什么进行前增菌？3.增菌过程中为什么用了增菌液后还要再选择性增菌？