饱和硝酸钠漂浮法测土壤中蛔虫卵

饱和硝酸钠漂浮法测土壤中蛔虫卵一、原理先用碱性溶液与土壤样品充分混合以分离蛔虫卵和土壤颗粒，再加入比重较大的溶液使得比重较轻的蛔虫卵飘浮在液体表面，收集后镜检计数。二、方法1.土壤样品处理：剔除菜叶、树皮等大杂物，压碎土壤中的大颗粒；然后用孔径3mm的铜筛过筛，收集过筛后的土壤。2.分离虫卵：取50mL大离心管，放入过筛后的土壤10g，加5%氢氧化钠溶液至40或45mＬ刻度线。用橡皮塞塞紧管口，在振荡器上振荡15分钟，可反复3~4次，待充分混合后，以2000rpm离心4min。3.漂浮：弃去上部的氢氧化钠，加入饱和硝酸钠溶液充分搅拌，2000rpm离心4min，再加饱和硝酸钠溶液满至管口，覆上18mm×18mm盖玻片。4.计数：静置15min后，将盖玻片迅速翻转取下，置于载玻片上镜检，同时再覆上第二块盖玻片，如此反复，共计数3~4张盖玻片。三、注意事项1.漂浮液的比重：漂浮液的比重是影响蛔虫卵检出率的重要因素，用比重大的溶液做为漂浮液效果较为理想，与饱和硫酸锌、硫酸镁、氯化钠等盐溶液相比，饱和硝酸钠的比重最高，用作漂浮液，蛔虫卵的检出率最高。2.土壤性质：土壤性质决定了蛔虫卵和土壤颗粒的粘合程度，蛔虫卵检出率沙土最高，壤土次之，粘土最低。3.离心的时间与次数：延长离心时间、提高离心速度或增加离心次数均可以提高蛔虫卵与土壤颗粒的分离效果从而提高检出率。美蓝、伊红、硼砂染色法一、原理美蓝、伊红、硼砂（简称Ｍ.Ｅ.Ｂ）溶于水呈碱性。活虫卵可以还原碱性染料，降低着色力，不易被染色。死虫卵不能还原碱性染料，容易着色。蛔虫卵外层膜蛋白容易被染色，染色前需脱去膜蛋白。二、配制将0.2g美蓝加入100mL蒸馏水中煮沸10min，加入硼砂0.5g，再煮沸10min，冷却后加入伊红0.1g，待完全溶解后过滤备用，ＰＨ值为10~11，在室温中可放置1.5年。三、步骤1.脱膜蛋白：将收集的蛔虫卵加入30%次氯酸钠，作用数分钟，并经常振荡，再用蒸馏水洗2次，即可脱掉蛋白膜。2.染色镜检：吸取虫卵沉淀物一滴置于载玻片上，加Ｍ.Ｅ.Ｂ染色液一滴，上覆盖玻片，静置3~5min后镜检。或者，吸取虫卵沉淀物一滴放入小试管内，加入染色液染30min再用蒸馏水洗2~3次，吸取沉淀物镜检。3.注意：Ｍ.Ｅ.Ｂ的ＰＨ值应在10左右，不宜太高：脱蛋白膜后，应洗净次氯酸钠，否则影响碱性染料的着色效果。4.鉴别死活：活卵内含物不着色，死虫卵内含物染成蓝色。培养法在直径10~12cm的玻璃平皿底部平铺一层厚约0.5cm的脱脂棉；脱脂棉上铺一张与平皿等大的普通滤纸；在滤纸上，再放一张直径2cm的小滤纸，将虫卵滴在小滤纸上。加入２%福尔马林，以湿透滤纸和脱脂棉。放入28~30℃温箱中培养一个月观察虫卵死活，培养一个月后自皿中取出小滤纸片，将虫卵置于载玻片上，滴加50%甘油溶液，使其透明后，根据其形态，鉴定卵的死活。凡含有幼虫的，都认为是活卵；其它阶段的或单细胞的，都判为是死卵