HPLC-DAD-ELSD法同时测定黄芪16种成分的含量

186HPLC-DAD-ELSD法同时测定黄芪16种成分的含量刘小花，封士兰＊（兰州大学药学院甘肃兰州730000邮箱：[e-mail]）摘要目的：建立HPLC-DAD-ELSD法同时测定黄芪药材中黄酮类和皂苷类成分的方法，比较10批不同产地的黄芪药材中各有效成分的含量。方法：采用HPLC-DAD-ELSD联用法，乙腈和水不同比例梯度洗脱，流速1mL·min-1，检测波长254nm；蒸发光散射检测器（ELSD）漂移管温度112.8℃，载气流速3.2L·min-1，同时测定黄芪药材中12种黄酮和4种皂苷的含量。结果：通过一次进样，同时测定了12种黄酮类成分和4种皂苷类成分的含量，且线性关系良好（r0.999）。平均回收率为：95.13%～104.94%。结论：该方法简便，准确，可靠，重复性好，可用于黄芪药材中黄酮类和皂苷类成分的同时测定，也可用于黄芪药材的质量控制。关键词：黄芪；HPLC-DAD-ELSD；黄酮；皂苷；含量测定黄芪(RadixAstragali)为豆科植物蒙古黄芪(Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge．var．mongholicus(Bge.)Hsiao)或膜荚黄芪(Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.)的干燥根，始载于《神农本草经》，列为上品。《中国药典》2010版将黄芪甲苷和毛蕊异黄酮作为指标性成分控制黄芪药材及制剂的质量[1]，但它是分别测定二者的含量，样品处理复杂且测定繁琐。作者曾[2]用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）法研究黄酮类成分的含量测定；赵强强[3-5]等用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）研究皂苷类成分的含量测定。总之，目前的文献报道仅仅集中在对黄芪中黄酮类成分和皂苷类成分的分别测定。本文采集6个省份10批黄芪药材，使用HPLC-DAD-ELSD联用法同时测定其中16种的含量，样品处理过程简单，结果可靠。1仪器与试药美国Waters2695高效液相色谱仪，2996二极管阵列检测器，Millennium32色谱管理站，717自动进样器，蒸发光散射检测器(AlltechELSD2000)；KQ3200DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；B2490型低压旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）；BS224S型电子分析天平（十万分之一，德国Sartorius赛多利斯）。黄芪药材采自甘肃、陕西、山西、内蒙古、安徽和黑龙江，共10批。经兰州大学药学院生药学研究所马志刚教授鉴定为蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge．var．mongholicus(Bge.)Hsiao。对照品毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ，均购于中国生物制品检定所。乙腈（德国默克）为色谱纯；甲醇（山东禹王）为色谱纯；水为超纯水。其余试剂均为分析纯。2色谱条件色谱柱：SpursilTMC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈和水，梯度洗脱（见表1）；进样量：20μL；柱温为30℃；检测波长为254nm；蒸发光散射检测器：温度112.8℃，载气流速3.2L·min-1，增益值：8。表1梯度洗脱条件T/minflow/mL·min-1A/乙腈B/水03065751.01.01.01.05406060956040403实验方法与结果样品测定取10批黄芪药材，按3.1项下规定制备样品溶液，20μL进入高效液相色谱仪进行分析，见图1。187图1测定结果见表2。4讨论黄酮和皂苷是黄芪的主要成分，因为皂苷类化合物没有紫外吸收或只在200nm处有微弱的吸收，且黄芪皂苷种类较多，单用二极管阵列检测器（DAD）无法同时测定出黄芪中这两类不同性质的化合物。蒸发光散射检测器（ELSD）是一种通用型检测器，特别适用于没有紫外吸收的皂苷类化合物的测定，所以本文将这两种检测器结合起来，首次建立了HPLC-DAD-ELSD法同时测定黄芪药材中16种成分含量的方法，为多指标控制黄芪药材的质量提供了实验基础。表210批黄芪药材中5种成分的含量参考文献[1]国家药典委员会.中国药典2010年版[S].一部.北京:中国医药科技出版社，2010，283-285.[2]胡芳弟,封士兰,赵健雄,等.黄芪的高效液相色谱指纹图谱及主成分含量测定[J].中药材,2004,27(11):831-834.[3]赵强强,韩丽,欧水平.HPLC-ELSD法测定黄芪提取物中黄芪皂苷Ⅰ,Ⅱ及乙酰黄芪皂苷[J]..中国实验方剂学杂志,2011,17(11):56-58.[4]汪红,王强.HPLC-ELSD法测定黄芪及其注射液中黄芪皂苷Ⅳ,Ⅲ,Ⅰ的含量[J].中国药学杂志,2002,37(4):298-300.[5]王举涛,徐文方，刘金旗.HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量[J].安徽医药,2009,10(1):28-30.Quality(ug.g-1)CommonpeaksRetentionTime(min)No.1No.2No.3No.4No.5No.6No.7No.8No.9No.10F17.0461.3424.1029.7930.14-0.163.907.206.66115.6418.25F29.5628.5621.799.0411.869.904.8230.5022.9818.4625.57F314.7517.7110.018.3213.106.783.2029.2812.859.4721.68F417.76453.33448.51154.03477.61262.94225.33654.09490.01459.53469.77F521.4729.8428.2511.1616.4120.9912.1656.8442.2634.3741.28F623.4133.9922.8712.3012.1519.6913.1460.0937.1034.3135.11F724.05138.19169.5743.32306.61108.0269.30213.12158.65160.61234.89F825.49166.314.501.4616.727.354.4017.4812.6212.7812.29F926.61482.3912.544.0221.346.962.9519.3212.6235.6311.32F1027.82142.10217.97454.8023.8916.05102.8835.86103.97340.6342.00F1135.7035.5025.0520.9221.6022.2821.8423.6529.7023.8521.95F1238.5119.347.933.723.040.373.749.2915.446.683.46S431.1028.9063.9428.6026.2337.5225.9423.5860.8639.0655.68S331.7026.2914.4220.6019.6023.0412.1714.1242.6433.9935.17S233.80104.0391.8194.1076.23150.6073.85101.90160.3687.96147.37S140.2477.6231.4246.6549.28141.5948.2467.09133.881.82109.39R-1.060.033.483.410.874.910.131.261.851