沙眼衣原体

衣原体Chlamydia概述衣原体是一类严格细胞内寄生的原核细胞微生物,具有细胞壁，能通过细菌滤器，对许多抗生素敏感，专性活细胞内寄生，有独特的发育周期。分类沙眼生物变种衣原体目沙眼衣原体性病淋巴肉芽肿变种衣原体科（C.trachomatis)鼠生物变种衣原体属鹦鹉热衣原体(C.psittaci)肺炎衣原体(C.pneumoniae)生物学性状形态结构两种发育类型：原体（elementarybody,EB)：胞外存在形式，具感染性始体（initialbody)网状体（reticulatebody,RB):繁殖型，不能在胞外存活，无感染性生物学性状生活周期衣原体原体和始体的性状性状原体始体大小（直径um）0.2～0.40.8~1.0代谢活性-+胞外稳定性+-感染性+-繁殖能力-+RNA：DNA比值13~4ElectronmicrographofCtrachomatisinclusionbodyincytoplasm(C)ofinfectedcell生物学性状染色性沙眼衣原体具有特殊的染色性状，不同的发育阶段其染色有所不同。Giemsa染色：原体——紫色始体——蓝色革兰氏染色：一般反应为阴性，但变化不恒定沙眼包涵体：Giemsa染色——深紫色Lugol液染色——棕褐色斑块Chlamydiatrachomatis(Giemsastain)培养在McCoy细胞的沙眼衣原体吉姆萨染色的McCoy细胞，含大衣原体包涵体，使部分细胞核不清楚。（吉姆萨染色,放大1000倍）生物学性状培养特性分离培养：困难•专性活细胞内寄生•鸡胚卵黄囊:•组织细胞培养：如Hela,McCoy•动物接种生物学性状抗原性•衣原体LPS:属特异性抗原补体结合抗原•外膜蛋白：属特异性抗原主要外膜蛋白(MOMP)60KD外膜蛋白热休克蛋白种特异性抗原型特异性抗原血清型沙眼生物变种:A、B、Ba、C、D、Da、E-I、Ia、J、K性病淋巴肉芽肿变种：L1、L2、L2a、L3鹦鹉热衣原体：4个血清型肺炎衣原体：1个血清型生物学性状抵抗力沙眼衣原体:对冷及冷冻干燥有一定耐受性;不能用甘油保存，一般保存在pH7.6磷酸盐缓冲液中或7.5%葡萄糖脱脂乳溶液中;56℃5~6分钟灭活0.1%甲醛溶液或0.5%石炭酸溶液经24小时即杀死；用2%来苏儿仅需5分钟.鹦鹉热衣原体:抵抗力较强;3%来苏儿溶液则需24～36小时才可杀死；紫外线照射可迅速灭活。四环素、氯霉素和红霉素等抗生素有抑制衣原体繁殖作用。临床意义沙眼衣原体：•沙眼：衣原体沙眼生物变种A、B、Ba、C血清型引起•包涵体性结膜炎：沙眼生物变种D～K血清型引起•泌尿生殖道感染：沙眼生物变种D～K血清型引起•性病淋巴肉芽肿：沙眼衣原体LGV生物变种引起鹦鹉热衣原体：引起鸟类，家禽感染，可传染给人，可引起肺炎肺类衣原体：急性呼吸感染，肺炎，支气管炎、咽炎等，感染率高与冠心病、动脉粥样硬化有关微生物学检查标本:沙眼：眼穹窿眼结膜刮片；宫颈炎：宫颈移行部位刮取物尿道炎：尿道刮取物输卵管炎：输卵管抽取物性病淋巴肉芽肿：淋巴结脓汁肺炎衣原体肺炎：鼻咽拭子、气管内痰液、肺泡灌洗液鹦鹉热：血液、痰、咽喉含漱液微生物学检查方法:1、直接涂片镜检：Giemsa染色：原体：紫红色始体：蓝色包涵体：暗紫色卢戈碘染色：包涵体：褐色免疫荧光检查：荧光素标记的衣原体抗体Chlamydiadevelopsininclusionsinsidehostcells.EpithelialcellinfectedwithChlamydia.nucleuscytosol2、血清学试验：（AbAg)•补体结合试验(complementfixationtest,CF)：•微量-IF（micro-IF)：试剂：衣原体标准抗原片荧光素标记的抗人IgG、IgM(或IgA)标准：性病淋巴肉芽肿：IgG〉1：2000、IgM〉1：32肺炎衣原体：双份血清抗体效价升高4倍或以上IgM〉1：16IgG〉1：512•酶免疫技术3、分子技术：核酸探针：rDNA探针PCR:沙眼衣原体:MOMP基因，隐蔽质粒肺炎衣原体：16SrRNA特异片断鹦鹉热衣原体:16SrRNA4、分离培养•细胞培养分离：沙眼衣原体：McCoy细胞鹦鹉热衣原体：HeLa229肺炎衣原体：Hep-2、HL*衣原体缺乏主动侵入细胞的能力促进衣原体在细胞培养基中生长，可采用下法：•离心•细胞培养中加入DEAE葡聚糖•细胞培养中加入代谢抑制，如放线菌酮•培养方法：有盖片小瓶、微量滴定板•结果：检查有无衣原体和包涵体细胞病变继代接种•鸡胚培养：所有沙眼衣原体都能在鸡胚卵黄囊内生长繁殖，并致死鸡胚。鸡胚：6～8天胚龄标本接种卵黄囊收获卵黄囊膜制片染色镜检前3天死亡弃去接种鸡胚3~13天死亡收获卵黄囊涂片，染色镜检13天仍存活冷冻解剖阳性连续传代死亡，血清学（+）盲传3代阴性阴性•动物接种：小鼠（1）腹腔接种：鹦鹉热衣原体（2）颅内接种：鹦鹉热衣原体，性病淋巴肉芽肿（3）滴鼻接种：鹦鹉热衣原体5鉴定：Giemsa染色：卢戈碘染色：免疫荧光检查检验程序：标本血液等直接涂片分离培养血清学检查姬姆萨碘染荧光细胞鸡胚小鼠染色标记的抗体姬姆碘染荧光收集细胞组织衣原体包涵体镜检继代培养镜检鉴定依据：1直接涂片染色，观察包涵体的形态特点2分离培养检查包涵体3血清抗体检查结果完