细胞工程期末复习资料

11.生物工程：指人们运用现代生物科学、工程学和其他基础学科的知识，按照预先的设计对生物进行控制和改造或模拟生物及功能，用来发展商业性加工，产品生产和社会服务的技术领域。2..细胞工程：指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术3.原代培养(primaryculture)：以直接取自生物体细胞、组织、或器官的培养。4.4.传代培养（passageculture）：将原代培养的细胞继续转接培养的过程。细胞的体外大量增殖是通过传代培养实现的。5.5.细胞系(cellline)：由原代培养经传代培养纯化，获得的以一种细胞为主，能在体外生存的不均一细胞群体,。第一次传代培养后的细胞即为细胞系。6.6.细胞株(cellstrain)：从一个经过生物学鉴定的细胞系由单细胞分离培养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群叫细胞株。7.7.接触抑制：动物细胞体外培养的方式之一，指由于细胞相互接触而抑制细胞运动性现象。由于这个特性，正常细胞并不会相互重叠，而是呈单层细胞生长。8.8.无血清培养基：无血清培养基是不加动物血清，由基础培养基和添加组分组成。试图全部替代血清成分。9.9.微载体：是直径60-250微米的微珠。由天然葡聚糖或各种合成聚合物组成。10.10.干细胞（stemcell）：是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体，即这些细胞可通过分裂维持自身细胞的特性和大小，又可进一步分化为各种组织细胞，从而在组织修复等方面发挥积极作用。11.胚胎干细胞(EmbryoStem)：ES细胞，是一种全能干细胞，它是从着床前胚胎内细胞团经体外分化抑制培养分离的一种全能细胞系，可以分化成任何一种组织类型的细胞。12.12.成体干细胞（adultstemcell)：成体组织内具有自我更新及分化产生1种或1种以上子代组织细胞的未成熟细胞。13.成体干细胞的可塑性：指一种组织的成体干细胞生成另外一种组织的特化细胞类型的能力。14.14.诱导多功能干细胞（iPS）：利用病毒载体将四个转录因子基因（Oct4,Sox2,Klf4和c-Myc）的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到的类似胚胎干细胞的一种细胞类型。是由体细胞诱导而成的干细胞，具有和胚胎干细胞类似的发育多潜能性。15.15.类胚体：由胚胎干细胞在缺乏分化抑制剂（如LIF，即白血病抑制因子）悬浮的情况下形成的球状细胞团并相互融合。16.16.组织工程:是利用生命科学、医学、工程学原理与技术，单独或组合地利用细胞、生物材料、细胞因子实现组织修复或再生的一门技术。17.细胞融合：细胞融合指在离体条件用人工方法把两个或两个以上细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。18.单克隆抗体：由一个只识别一种抗原决定簇的B细胞克隆产生的同源抗体称为单克隆抗体。19.多克隆抗体：一种抗原通常具有多个不同的抗原决定族，因此能刺激多2个B淋巴细胞产生相应的单克隆抗体，因此血清中的抗体是针对不同抗原决定族的单克隆抗体混合物，称为多克隆抗体。20.嵌合抗体：用人源性抗体的稳定区代替鼠源性抗体的一部分，使之保留对抗原的的特性,人源性抗体的稳定区可以激活人机体免疫反应，减少异源性蛋白的抗原性。这样抗体为人-鼠嵌合抗体。21.改型抗体：指利用基因工程技术，将人抗体可变区（V）中互补决定簇（CDR）序列改换成鼠源单抗CDR序列。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。因其主要涉及CDR的“移植”，又可称为“CDR移植抗体22.生物导弹：是免疫导向药物的形象称呼，它由单克隆抗体与药物、酶或放射性同位素配合而成，因带有单克隆抗体而能自动导向，在生物体内与特定目标细胞或组织结合，并由其携带的药物产生治疗作用。23.胚胎工程：是指所有对胚胎进行人为的干预，使其环境因素、发育模式或局部控制发生量和质的变化的综合技术。24.体外受精（IVF）：是指哺乳动物的精子与卵细胞在体外人工控制的环境中完成受精过程.25.胚胎移植：是将一头良种雌性动物配种后形成的早期胚胎取出，移植到另一头（或几头）同种的、生理状态相同雌性动物的体内，使之继续发育成为新的个体，也有人通俗地称之“借腹怀胎”。26.试管婴儿：是指将卵子与精子取出在体外受精，培养发育成早期胚胎，再植回母体子体内发育出生的婴儿,也就是采用体外受精联合胚胎移植技术培育的婴儿。27.胚胎分割：是人工无性繁殖的一种方式。借助此项技术将一个胚胎分割成1/2或1/4胚，移植后获得同卵的双生或多生后代，它们的遗传背景是完全一致的。28.发育阻滞：体外受精的早期胚胎在体外发育中，往往会停止在某一阶段不再发育，这种现象称为发育阻滞(Developmentalblock)29.克隆动物：指不经过生殖细胞而直接采用体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中的方法，获得遗传性状与供核动物完全一致的后代，这种后代叫克隆动物。30.体细胞核移植：将动物体细胞经过抑制培养，使其处于休眠状态。利用细胞融合技术将体细胞与去核卵细胞融合重组成新胚胎。经移植至代孕母体，妊娠产子，克隆出成体动物。31、胚胎核移植：将动物早期的胚胎细胞核或卵裂球通过人工操作，移植到去核的受精卵或成熟卵细胞中，重组成新的胚胎并发育成与供体胚胎基因相同后代的过程。32、异种体细胞克隆：是将一种动物的体细胞核移植到另一种动物的去核（遗传物质）卵母细胞中。33.转基因动物：是指体内基因组中稳定地整合有外源基因的动物。即用实验法把外源基因导入动物体内，此外源基因整合到动物基因组后，随细胞分裂增殖，在体内得以表达并传给后代。33.基因剔除小鼠：是指运用DNA同源重组原理，迫使所导入的外源基因与小鼠基因组中特定的内源基因（目的基因或靶基因）发生同3源重组（这种重组现象又称为定点整合或基因打靶），而获得的内源目的基因缺失或功能丧失的转基因小鼠。34.乳腺生物反应器:将所需要的目的基因构建入载体，将外源基因置于乳腺特异性调节序列下，使之在乳腺中表达，然后通过回收乳汁获得重要价值的活性蛋白的转基因动物称为乳腺生物反应器。35.转基因生物反应器：将基因转入细胞或动植物,利用细胞增殖或动植物代谢制备外源基因的表达产物的技术叫转基因生物反应器技术.转入外源基因的细胞或动植物称为转基因生物反应器36植物细胞工程：以植物细胞为基本单位，在离体条件下进行培养、繁殖或人为的精细操作，使细胞的某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而改良品种或制造新物种；加速繁育植物个体或获得有用物质过程，叫植物细胞工程。37.愈伤组织：是外植体组织增生的细胞产生的一团不定型的疏散排列的薄壁细胞。38.植物细胞培养：是在离体条件下，将分离的植物细胞通过继代培养增殖获得大量细胞群体的一种技术。39.看护培养：指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。40.悬浮培养：将离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养41.次生代谢产物：是通过次级代谢合成的产物，大多是分子结构比较复杂的小分子化合物，例如抗生素、激素、生物碱、毒素等42.诱导子：调节代谢途径上基因活性以改变代谢强度的物质，包括植物激素、无机盐、NO、乙烯、真菌培养物等43前体：指某一代谢中间体的前一阶段的物质，一般在生物合成反应的中间过程中，某一阶段前的物质都可以说是该阶段物质的前体物质44.原生质体：指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露的细胞。45.亚原生质体：在原生质体分离过程中，有事会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体就叫做亚原生质体。他可以具有细胞核或没有细胞核。46.体细胞杂交（原生质体融合）：在外界条件下，令两个或两个以上植物细胞融合成多核细胞的过程叫做植物细胞融合或植物体细胞杂交。植物细胞融合前提条件是细胞去壁变成原生质体，所以也叫做原生质体融合。47同核体：基因型相同的细胞融合成的细胞。48.异核体：来自不同基因型的融合细胞，即来自不同种的双亲原生质体融合而得到的异核体。1.简述动物细胞工程的发展历史，在细胞工程的建立和发展中哪些工作起到关键性作用？1.动物细胞培养技术2.细胞融合技术的建立和杂交瘤技术的诞生3.体外受精与胚胎移植4.动物克隆技术的建立2．体外细胞培养的生长类型、生长特点，各有什么区别？生长类型：按生长方式1）贴附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。42）悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型：1.上皮样细胞型：易相连成片相靠—紧密相成薄层—铺石状；生长时呈膜状移动；很少脱离细胞群而单个活动。2.成纤维细胞样细胞：排列成放射状，漩涡状并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开，而单独行动游离的成纤维样细胞常有几个伸长的细胞突起。3.游走细胞型：⑴细胞质常伸出伪足，呈变形运动。⑵贴服于支持物上散在、细胞形状不稳定在生长，不连成片。4.多形细胞形：生长时是多角形，伸出较长纤维。体外培养的神经元、神经胶质细胞呈现此形状。二．体外培养的细胞应满足哪些营养成分？1.氨基酸：12种氨基酸是必需的。2.维生素：维持细胞生长的生物活性物质，其中有些是必不可少的。如叶酸、维生素C及泛酸。3.碳水化合物：提供细胞的能源，主要是葡萄糖。4.无机离子：Na+、K+、Ca+、P、等组成必需及参与细胞代谢。三．培养液中为何要添加一定量的血清？血清使用时为何要进行灭菌？加入血清的原因：1.提供基本的营养物质。2.提供细胞生存、生长、增殖必需的生长因子、激素。提供载体蛋白、维生素、金属离子等。4.提供细胞贴附因子与伸展因子。5.提供良好的缓冲系统。6.提供蛋白酶抑制剂。四．无血清培养基在实验研究中有什么特殊意义？1.提高了细胞培养的可重复性，避免了由于血清批之间差异的影响。2.减少了由血清带来的病毒、真菌和支原体等微生物污染的危险。3.细胞产品易于纯化；避免了血清中某些因素对有些细胞的毒性；减少了血清中蛋白对某些生物测定的干扰，便于实验结果的分析。六．叙述微载体培养过程及特点。1.分离好细胞悬浮在1-1.2%的海藻酸钠液中，细胞最终浓度达到1•107细胞/ml。2.细胞悬浮液经微囊发生器制成微球颗粒，将此颗粒加入1.3%氯化钙溶液后形成凝胶球，取出上清收集胶球，并用生理盐水缓冲液清洗。3.加入0.05%的聚赖氨酸，微球胶体颗粒表面包裹一层膜形成微囊，用生理盐水缓冲液洗两次。4.将微囊悬于0.06%海藻酸钠溶液中反应五分钟，用盐水缓冲液冲洗两次。5.加入钙离子的螯合剂（1.5%的柠檬酸钠处理8-10分钟）液化凝胶球，海藻酸钠从微囊中流出，生理盐水缓冲液洗一次。6.形成内含活细胞的微囊，将含有细胞的微囊放入培养液培养。六．以组织块为例，叙述原代、传代过程。原代培养过程：组织块培养:是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶（或皿）中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。a取材：将从动物机体某部位取下的组织经无菌处理后先放入一个培养皿中Hank`s液洗3次。b剪碎：放入培养瓶中，用小剪刀剪成约1立方毫米的5组织块。c漂洗：加入少许培养液用吸管吹打洗涤，然后用弯滴管吸出组织块放在另一个小培养皿中准备放入培养瓶。d贴壁：待准备好培养瓶后，用吸管吸出组织块，一一放入培养瓶内，使其在瓶壁上摆均贴在瓶壁上。e加培养液：将贴有组织块的瓶壁朝上加入培养液，塞上瓶塞于37℃温箱2小时后，待组织块牢固贴于瓶壁后，再将培养瓶翻转，使组织块浸于培养液上生长。f待细胞长成单层后再做传代培养。传代培养过程：(1)吸光培养瓶中的培养液;(2)加入1-2ml0.25％的胰蛋白酶液静置2-10min（显微镜下动态监测）;(3)吸去胰蛋白酶液，加入培养液;(4)用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液;(5)计数或吸取1/10—1/40细胞悬液，接种于新的培养瓶内;(6)加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内;(7)将后者放入