蛋白标签应用性质

标签（亲和标签）亲和原理对融合蛋白影响酶切去除特点应用Poly-Arg碱性强氨基酸（强阳离子）阳离子交换柱可能影响蛋白三维结构羧肽酶B（得率低，专一性低）可以固定化功能蛋白质分析较少使用，可以标签联用Poly-His组氨酸的咪唑环作为电子供体与金属离子形成配位键对融合蛋白活性影响较小，但一般不排除影响的可能咪唑会影响NMR实验；咪唑使蛋白质聚集应用较多，带金属离子的蛋白质和厌氧条件不适用FLAGFLAG肽和抗体M1结合肠激酶非变性纯化；纯化基质比Ni2+-NTA不稳定Strep-tagIIStrep-Tactin(修饰的链球菌抗生物素蛋白)与strep-tagII结合可用于NMR和结晶实验研究：温和洗脱应用较多，用于带金属离子的蛋白质和厌氧条件蛋白纯化c-myc抗c-myc抗体9E10(特异性结合11个氨基酸的抗原表位)低ph洗脱可能降低蛋白活力广泛用于检测，少用于纯化SS-蛋白和S-tag的相互作用切掉标签获得有活性的目的蛋白洗脱条件苛刻，如PH2.0缓冲液；RNase酶A荧光底物的高灵敏度的检测（高通量筛选的检测）AviAvi能够在体内或者体外被生物素连接酶在赖氨酸链接生物素；Avi-生物素和抗生物素蛋白或者链霉亲和素结合纯化相比化学化学法标记生物素条件温和专一性强注意：生物素酶在低等生物有，哺乳动物必须体外催化或者改造细胞广泛用于蛋白固定；纯化；检测；细胞分选HAT(天然组氨酸亲和标签)原理通组氨酸标签温和洗脱，特异结合相比His3×FLAG改善了FLAG的检测钙调蛋白结合肽骨骼肌的肌浆球蛋白轻链激酶的C端26个残基和钙调蛋白结合耐受还原剂和0.1%去污剂，一般不用于真核表达纯化大肠杆菌的充足蛋白纤维素结合结构域（CBD）13种CBD和纤维素结合变性洗脱一些CBD的结合不可逆；I，II，III可逆结合；蛋白变性洗脱SBP抗生物素蛋白和SBP结合洗脱温和2mM生物素应用不多壳聚糖结合结构域壳聚糖和短肽的结合谷胱甘肽S-巯基转移酶(GST)亲水标签+亲和标签酶与底物结合凝血酶或Xa因子促进蛋白溶解和保护不被降解麦芽糖结合蛋白（MBP）亲水标签+亲和标签MBP和淀粉结合增加蛋白溶解性标签（亲水标签）亲和原理对融合蛋白影响酶切去除特点应用转录终止抗终止因子（NusA）要与亲和标签一起使用大肠杆菌硫氧还蛋白（TrxA）要与亲和标签一起使用蛋白质二硫键异构酶I（DsbA）要与亲和标签一起使用SUMO小分子泛素样修饰蛋白要与亲和标签一起使用检测标签流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇(HA)荧光蛋白标签特点增强型绿色荧光蛋白eGFP1.活细胞中发出绿色荧光2.自发荧光3.不会干扰标签蛋白检测4.低消耗、高灵敏度检测的特性5.增强型黄绿色荧光蛋白eCFP增强型黄色荧光蛋白eYFP单体红色荧光蛋白标签mCherry介导探针标记的修饰标签分类小类与原理发光物质发光原理（结合发光）应用荧光素酶萤火虫荧光素酶定量海肾荧光素酶Guassia荧光素酶（GLuc）自标记标签Tertracysteine-biarsenical半胱氨酸短肽-双砷染料（荧光双砷染料FLASH-EDT2；REASH-EDT2双砷染料的巯基被取代而发荧光素）Tetrasine-phobo丝氨酸短肽-双硼酸染料双硼酸染料线性多醇可以与双硼酸的羧基缩合形成酯键发生荧光自标记蛋白SNAP-tag（DNA修复核蛋白变体）FKBP-FRB雷帕霉素介导FKBP-A蛋白-SNAP(荧光)和FRB-B蛋白-SNAP（荧光）相互作用后荧光增强SNAP-BG衍生物（BG交联荧光素）SNAP是AGT（DNA修复核蛋白）的变体可以与BG（苯甲基鸟嘌呤）衍生物共价结合蛋白互做研究MaM2-P53MaM2-A蛋白-SNAP(荧光)和P53B蛋白-SNAP（荧光）相互作用后荧光增强CLIP-tag（DNA修复核蛋白变体）与SNAP-tag相同，可以与SNAP-tag联用SNAP-苄基胞嘧啶（交联荧光素）SNAP是AGT（DNA修复核蛋白）的变体可以与苄基胞嘧啶衍生物共价结合CLIP-tag可以与SNAP-tag联用进行蛋白双标记HALO-tag（细菌紫红球菌的烷剂卤脱卤酶）HALO-ASP106（天冬氨酸）ASP106（天冬氨酸）HALO是一种酶的突变体可以与底物ASP106（天冬氨酸）发生不可逆结合酶介导标签标记ACP-tagACPtag-辅酶A辅酶AcoA在ACP酶的作用下，ACP-tag与辅酶A结合发荧光可开关荧光探针光诱导开关荧光DCDHF(极强推挽偶极作用)DCDHF(去受体)DCDHF（荧光供体+荧光受体），光照能裂解荧光受体基团（叠氮）而发光偶联开启荧光配体与标签融合蛋白结合荧光受体裂解发光配体与标签融合蛋白结合荧光受体裂解发光传感开关分子各种小分子（Ca2+和过氧化氢）小分子离子能够使化合物荧光受体改变发光