实验二细胞化学—多糖(PAS反应)

实验二细胞化学染色-PAS法对细胞内多聚糖的鉴定(必做，综合性实验，4学时）细胞化学染色（cytochemicalstaining）是利用染色剂可同细胞的某种成分发生反应而着色的原理，对某种成分进行定性或定位研究的技术。利用这种方法对细胞的各种成分几乎都能显示，包括有无机物、醛、蛋白质、糖类、脂类、核酸、酶等。前言常用显色反应金属沉淀法：利用金属化合物在反应过程中生成有色沉淀，借以辨认所检查的物质或酶活性。如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反应产物最终生成CoS或PbS有色沉淀，而显示出酶活性。偶氮偶联法：酚类化合物与偶氮染料结合后可以形成耐晒染料。Schiff反应：细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色品红变为红色。通常用于显示糖和脱氧核糖核酸（Feulgen反应）。联苯胺反应：过氧化物酶分解H202。产生新生氧,后者再将无色的联苯胺氧化成联苯胺蓝，进而变成棕色化合物。普鲁士蓝反应：三价铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成普鲁士蓝。Formazane反应：显示脱氢酶。“Nadi”反应：显示细胞色素氧化酶。脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。茚三酮反应：显示蛋白质。通过PAS(periodicacidschiff’sreaction)反应,掌握多糖显色的基本原理和实验方法实验内容和目的PAS法对细胞内多聚糖的鉴定多聚糖(polysaccharide)简称多糖,由10个以上单糖基通过糖苷键连接而成.一般含有成百上千个单糖基.多糖在生物体内的功能有两类:一是动植物的支持组织;另外是为动植物提供能量.植物多糖包括:淀粉(starch)、纤维素(cellulose)和树胶(gum)等;动物多糖有糖元(glycogen)、甲壳素(chitin)和肝素(heparin)等.很多的多糖都有着很好的药用价值.概述PAS法对细胞内多糖的鉴定过碘酸能够使1，2-乙二醇基[-CHOH-CHOH-]氧化为二醛[-CHOCHO-],这种新生成的醛基和Schiff试剂反应形成紫红色化合物.但是过碘酸对1，2-乙二醇基已被取代的化合物（如核酸所含的乙二醇基被磷酸所取代）则无氧化作用。多糖，粘多糖都含有1，2-乙二醇基，均呈PAS阳性反应。在其校勘法中，经过淀粉酶或唾液处理，其中淀粉等贮存多糖被分解，呈PAS阴性反应。实验原理实验材料及试剂材料：洋葱或大蒜试剂：高碘酸溶液；Schiff试剂；5%亚硫酸氢钠；0.1%淀粉酶;蒸馏水实验用品实验流程大蒜粘液涂片(风干)→0.1%淀粉酶1-3滴30min↓↓3滴0.5%HIO4溶液5-10min←风干←倾去酶液↓蒸馏水轻轻冲洗两次↓3滴Schiff试剂（避光）10min以上↓5%NaHSO3↓蒸馏水冲洗1-2次↓擦干载玻片背面镜检大蒜黏液涂片方法实验结果多糖，粘多糖在PAS法中均呈阳性反应，实验结果可显示紫红色。在校勘法中，可被淀粉酶水解的物质此时呈阴性反应。实验结果实验报告要求摘要及关键词前言材料和方法结果与分析参考文献