鸡病化验与分析

鸡病化验与分析主要内容•1鸡病化验室化验内容•2诊断或化验结果的分析与应用•3关于提高动保中心的功能1．鸡病化验室化验内容•1.1病理解剖及组织切片•1.2病原学检查•1.3血清学检查•1.4药敏与药效试验•1.5免疫试验或治疗性试验•1.6复制病例•1.7消毒剂消毒效果试验或含量检测•1.8如何确定检查内容•1.9检验方法的选择鸡病化验室病理学流行病学、临床表现病原学检查血清学检查相关试验或检验诊断结果控制措施•1.1病理解剖及组织切片病理学检查是鸡病诊断过程中最为重要的内容。–大体解剖–采集病料做相关检验•血样•病原检测用样品•病理组织切片用样品–病理组织切片•肿瘤病•一些产生包函体的病毒病（IBH、ILT、FP）•其他，如曲霉菌病•1.2病原学检查–1.2.1显微镜直接检查病原•涂片或触片（球虫卵囊、梭菌、巴氏杆菌等）•压片（霉菌）•病理组织切片（组织滴虫，其他寄生虫）•1.2病原学检查–1.2.2病原分离鉴定•细菌分离培养与鉴定–培养基营养琼脂，选择性培养基–鉴定菌落特征，染色特性，生化特性，血清学反应，复制病例。•病毒分离与鉴定（一般化验室不允许）–培养基鸡胚(SPF)，组织细胞，动物体–鉴定血清学反应，形态特征，特征性的病理变化，分子生物学•1.2病原学检查–1.2.3试剂盒快速检测病原•胶体金（20-30分钟出结果，敏感性为10-100万EID50）–新城疫（ND）–禽流感（AI），含A型（H1-H15）、H5亚型和H9亚型。•PCR•ELISA–霉形体（MG、MS）–白血病（ALV）胶体金•1.3血清学检查–定性检查•常用方法：–琼脂扩散试验（AGP）–快速平板凝集试验（SPA）–酶联免疫吸附试验（ELISA）•应用：–免疫抗体监测IBD-AGP、MG-AGP或ELISA等–了解病原感染情况或疾病诊断P/T-SPA、CAV-ELISA、IBH-AGP、REV-ELISA、MG-SPA或ELISA等•注意检验结果中有假阳性或假阴性。–定量检查•常用方法：–红细胞凝集抑制试验（HI）–酶联免疫吸附试验（ELISA）•应用：免疫抗体监测；疾病诊断•1.4药敏与药效试验–1.4.1药敏试验由死、淘鸡分离到细菌后，常通过纸片法选择敏感药物。–1.4.2药效试验通常通过测定最小抑菌浓度（MIC）的方法来比较选择药物及检验药品的品质。•1.5免疫试验或治疗性试验–选择疫苗–营养性疾病–细菌性疾病•1.6复制病例–初步确定疾病是否是具有传染性；–确认某些疾病•中毒•营养性疾病•某些传染病•1.7消毒剂消毒效果检测或含量检测–消毒剂MIC测定–模拟现场消毒试验–含量测定火碱，福尔马林，氯制剂等。•1.8如何确定检查内容–根据发病日龄、发病时间，临床表现，流行病学、大体病理变化初步诊断结果，采集合适的病料，选择检查内容。例如：•ND、AI育雏期发病或发病初期检测病原，育成、产蛋期或发病后1-2周采血检测抗体•球虫直接镜检（直接涂片或虫卵计数）•细菌感染直接做细菌培养•肿瘤病病理组织切片接合ELISA检测抗体或病原–尽可能采用最快速、经济、简便易行的方法进行检验。最常见的错误做法是发病初期采血化验。•1.9检验方法的选择–优先选择国际或国家标准方法；•水样检验，按饮用水国标方法•ND-HI、AI-HI，OIE或国标方法•饲料（沙门氏菌、霉菌）国标方法–检测试剂（盒）有规定方法的，按规定方法检验；–其他情况，参考有关标准制定检验规程•病、死鸡的各种细菌分离•药敏试验或药效检验2诊断或化验结果的分析与应用•2.1环境监测•2.2病料细菌检测•2.3药敏试验结果•2.4药效试验结果•2.5病毒检测结果•2.6血清或卵黄抗体检测结果•2.1环境检测根据下面的标准判定是否合格。样品名称检验项目标准样品名称检验项目标准水样细菌总数100个/ml空气样品细菌总数=30个/平皿总大肠菌群MPN2霉菌=2个/平皿PH值6.5-8.5大肠杆菌金黄色葡萄球菌不得检出饲料/原料沙门氏菌不得检出表面试子细菌总数=30个/平方厘米霉菌饲料,45000个/g霉菌=2个/平方厘米细菌总数鱼粉,2×106个/g大肠杆菌金黄色葡萄球菌不得检出新垫料霉菌45000个/g旧垫料沙门氏菌不得检出大肠杆菌不得检出出现细菌超标时，要查找原因并采取纠正措施。•2.2毛蛋、弱雏，病料细菌检测样品名称检验项目结果分析毛蛋、弱雏大肠杆菌沙门氏菌金葡球菌绿脓杆菌变形杆菌等1）“毛蛋”检出细菌多与种蛋污染有关；2）弱雏的细菌感染多与出雏器内存在污染蛋（臭蛋）有关；3）沙门氏菌种类繁多，如有检出，多与种禽有关，需要进一步鉴定，必要时做致病性试验。鸡场7d内死、淘雏可疑细菌1）如细菌分离率超过50%，说明细菌感染是引起淘汰的主要原因；2）如雏鸡死淘高而细菌分离率低或未分离到细菌，说明鸡群存在其他更为严重的问题，如中毒、温度过高或过低、运输不当等。病死鸡可疑细菌7d以上的病、死鸡由肝、脾、脑等器官检出细菌，要根据细菌的种类进行分析，如大肠杆菌多由呼吸道疾病继发感染引起；葡萄球菌多由脚垫或其他外伤引起；巴氏杆菌主要考虑环境污染；梭菌与肠道菌群失调有关。•2.3药敏试验结果无抑菌圈，不敏7-9mm，低敏10-14mm，中敏15-20mm，高敏20mm，极敏！注意：监床口服给药，除了考虑细菌对药品的敏感性，还须考虑药物是否经肠道吸收及药品吸收后的分布、代谢情况。•2.4药效试验结果–抗菌药物，MIC值越小，药效越好；–中药，除少数药品外（如杨树花），应无抑菌活性或只有较低的体外抑菌活性（如黄芩苷）；–同一药品，如不同批次的药品MIC有明显差异，说明其配方有改变。–现场应使用MIC100微克/毫升的抗菌药物。–因国产抗菌药物成份复杂，不宜按有效含量计算MIC值。药效结果MIC（微克/毫升）序号大肠杆菌菌株来源JN1JN3PS2PS7131125631252216673332138311631463250311255831051676632503163716848810001000161000•2.5病毒检测结果–2.5.1NDV检测方法检测结果结果分析鸡胚分离分离到弱毒（MDT60h）如弱毒苗免疫后两周内分离到弱毒，常为疫苗毒；ND弱毒不是引起发病的主因。分离到强毒（MDT60h提示鸡群有ND强毒感染，是否引起发病要考虑鸡群的ND免疫水平及临床表现：1）育雏期死亡增加或产蛋期产蛋下降但死淘正常，可能主要由ND引起。2）免疫良好的育成期鸡群即使感染ND强毒也不会引起严重的疾病。未分离到病毒抗体水平较高的育成鸡或产蛋鸡群，感染ND强毒后，排毒量少，排毒时间短，不易分离到病毒，需要后续的血清抗体检测做进一步判定。PCR方法阳性或阴性有典型临床表现时的阳性结果有一定诊断意义。胶体金方法阳性或阴性雏鸡急性发病时检测结果阳性可诊断为ND。•2.5病毒检测结果–2.5.2H9亚型AIV检测方法检测结果结果分析鸡胚分离阳性提示鸡群有H9亚型AIV感染，是否引起发病要考虑鸡群的H9亚型AI免疫水平及临床表现：1）育雏期死亡增加，同时有典型的H9亚型AI病变（气管出血，支气管栓塞，肺瘀血），主要由该病原引起。2）无H9亚型AI抗体的产蛋鸡群产蛋严重下降，可主要由该病原引起（须排除ND）。阴性抗体水平较高的鸡群，感染病毒后，排毒量少，排毒时间短，不易分离到病毒，需要后续的血清抗体检测做进一步判定。PCR方法阳性或阴性有典型临床表现时的阳性结果有一定诊断意义。胶体金方法阳性或阴性雏鸡急性发病时检测结果阳性可诊断为AIH9，同时ND和AIH5结果阴性时可诊断为AIH9。•2.5病毒检测结果–2.5.3H5亚型AIV检测方法检测结果结果分析鸡胚分离阳性不同毒株病毒的毒力和抗原性差异很大，但任何有临床发病的鸡群，病毒分离阳性都应首先考虑该病。阴性抗体水平较高的鸡群，感染病毒后，排毒量少，排毒时间短，不易分离到病毒，需要后续的血清抗体检测做进一步判定。PCR方法阳性或阴性可疑病例阳性具有诊断意义。胶体金方法阳性或阴性可疑病例阳性具有诊断意义。•2.5病毒检测结果–2.5.4IBV传染性支气管炎（IB）的病毒分离鉴定工作较为复杂，通常需要做下面一系列工作：•鸡胚接种——出现典型的“侏儒胚”提示存在IBV•病例复制——能复制出病例证明分离物为主要病原•疫苗免疫攻毒——某毒株的疫苗能提供保护除了可证实分离物为IBV，同时为现场选择最有效的疫苗提供依据。•2.5病毒检测结果–2.5.4IBV•不同毒株疫苗的免疫保护试验将108只1日龄的蛋雏鸡分成5组，每组21-22只，除对照组外，其余4组3d时分别用H120+28/86、肾型IB2#（本室编号）、Ma5及IB4-91疫苗点眼免疫，免疫后5天（8d）用分离毒经滴鼻点眼攻毒，剂量约105EID50/只（感染尿囊液10倍稀释后，0.1ml/只），攻毒后每天观察并记录鸡只发病和死亡情况，共观察14天，死亡如下：组别鸡数攻毒死亡比例死亡率1(H120+28/862215/2268%2(肾型IB2#)2213/2259%3(Ma5)2116/2176%4(IB4-91)215./2124%对照(不免IB)2218/2282%•2.5病毒检测结果–2.5.5IBDV通过采集有病变的法氏囊，处理后与IBD标准阳性血清做琼指扩散试验，阳性说明法氏囊组织中含大量病毒，具有一定诊断意义。但需注意的是中等毒力或中等偏强毒力疫苗免疫后，此法也可检出阳性。–2.5.6MDV该病很少通过病毒分离鉴定方法进行诊断，但取毛囊浸出液与MD标准阳性血清做琼指扩散试验，阳性结果具有诊断意义。•2.6血清或卵黄抗体检测结果–2.6.1ND-HI抗体•ND母源抗体下降基本规律（如图所示）1)一周约下降2个滴度（蛋鸡4-5天下降1个滴度）2）下降速度与以下因素有关：--卵黄吸收情况--生长速度--免疫或自然感染024681d7d14d21d28d小雏大雏•2.6血清或卵黄抗体检测结果–2.6.1ND-HI抗体•雏鸡早期接种ND疫苗后的抗体变化情况--接种疫苗越早，母源抗体对免疫应答的影响越大；--用灭活苗+弱毒活苗于7d或7d后免疫，鸡群可获得较高的抗体水平。LaSota+NDK免疫有母抗雏鸡结果摘自《中国兽医杂志》2004（3）0123456716d20d24d28d33d37d3d,DN&IO;7d,DN&IO+NDK3d,DN&IO;9d,DN&IO+NDK3d,DN&IO;11d,DN&IO+NDK3d,DN&IO;13d,DN&IO+NDK3d,NDK;9d,DN&IO+NDK3d,NDK无•2.6血清或卵黄抗体检测结果–2.6.1ND-HI抗体•正常种鸡鸡群抗体变化情况8WNDK二免后，抗体水平上升至较高水平；具有较高抗体水平的鸡群，接种弱毒活苗对抗体水平影响不大，接种灭活苗后抗体可上升1-2个滴度；进入产蛋期后，鸡群抗体水平会下降3个滴度左右。•2.6血清或卵黄抗体检测结果–2.6.1ND-HI抗体•商品肉鸡抗体水平分析（1）舍号日龄样品数抗体分布GMT%CV0123456781#34d20110363.7026%2#34d20241224.6023%3#34d18145354.3929%4#34d202256414.5530%免疫情况：1dAvinew+H1208dlasota+H1209dND+H914dIBD19d新支妥分析：该鸡群总体抗体水平尚可，但部分样品抗体水平偏低，如感染野外强毒，可引起10%左右的死亡率。•2.6血清或卵黄抗体检测结果–2.6.1ND-HI抗体•商品肉鸡抗体水平分析（2）舍号日龄项目抗体水平分布数量01234567891011GMT1#29dND-HI19337245.052#29dND-HI2039623.353#29dND-HI19364423.794#29dND-HI1911265.165#29dND-HI20445616.256#29dND-HI2033612414.901#34dND-HI181464213.282#34dND-HI