鸡马立克氏病流行与防控.

中国农业科学院-哈尔滨兽医研究所深圳2014年4月29日鸡马立克氏病流行及防控刘长军鸡马立克氏病•1907发现--1961-病原-MDV、命名--中国-70年代•主要感染鸡和火鸡•淋巴细胞的溶细胞感染和T-细胞淋巴瘤•最早出现在3-4周，高峰在12-30周•年龄易感性--日龄越小易感性越高--1日龄雏鸡比10日龄以上雏鸡易感性高几百倍•水平传播--羽毛囊上皮细胞--复制病毒--长期排毒--通过空气传播•发病率--5%～30%MapoftheevolutionofMDincidence.ColorsrepresentthecurrentexistenceofMDoutbreaksasfollowed:red=currentMDoutbreaks;yellow=nocurrentMDoutbreaks;grey=datanotavailable.TheexistenceofMDoutbreaksduring1990sisindicatedbyverticalstripes秘鲁俄罗斯尼日利亚摩洛哥葡萄牙中国鸡马立克氏病导致脏器肿瘤及神经肿瘤马立克氏病引起免疫器官萎缩胸腺法氏囊对照vvvv+Introduction马立克氏病病原-----MDVMDV属于α疱疹病毒科、马立克氏病病毒属。MDV粒子由核芯、核衣壳、被膜和囊膜组成，在感染细胞内可见直径为85-160nm的六边形裸露颗粒即核衣壳。偶尔也能见到150-160nm的有囊膜的病毒粒子；基因组为双股线性DNA长度约为166-180Kb。病毒血清型致病性MDV1vv+（1990s）1vv（1980s）1v（1970s）1m（1970s）MDV2非致病性（1980）HVT3非致病性（1970）MDV分类IntroductionMDV的复制早期溶细胞感染潜伏感染第二次溶细胞感染肿瘤增生-产生成熟病毒粒子早期溶细胞感染MDV在羽毛囊上皮细胞中的复制溶细胞感染淋巴细胞增生0100时间感染新特点•宿主范围扩大—火鸡感染发病•混合感染—REV、ALV（鸡病毒重组-LTR的插入）；NDV；细菌；霉菌•毒力增强—突破不同MD疫苗的保护作用•急性发病症状—3-4周龄即开始出现肿瘤，8-9周龄时已很严重，并能在3周龄引起特别严重的短暂麻痹，从而导致很高的死亡率•不同日龄鸡感染性—Rosenberg等，注射和同居接触19、34和49日龄的SPF鸡，出现临床发病和肿瘤病变IntroductionMDV毒力进化MDV毒力越来越强：m—温和型、v—强毒力型、vv—超强毒力型、vv+—超超强毒力型临床症状由主要是慢性多发性神经炎转变为多发性神经炎和内脏淋巴瘤、内脏淋巴瘤、神经症状、严重的脑水肿和急性死亡国内MD发病情况--黑龙江病例（多发性肿瘤）图1，2，3分别为牡丹江地区病料（瘤化的卵巢、肠系膜和脾脏）。图4，5分别为大庆地区病料（瘤化的卵巢和肿大的肝脏）13245青脚黄鸡3/3MD+，1/3只AL+270日龄，900只海兰褐，病死近100只，吉林省病例（多发性肿瘤）图1为发病鸡，2和3为系膜瘤，4为肝脏瘤。1234长春，8/11MD+，5000只，至110日龄，死1000辽宁省病例（混感）图1为肌肉瘤，2为瘤化的腺胃，3为瘤化的肝脏。1234万套，海兰褐蛋种鸡，110日龄发病，A亚群ALV9/11AGP-2/11，MD+，PCR-3/8MD+公鸡40%A亚群江苏病例（乌鸡和麻鸡）肾脏肿40和60日龄，10%山东110日龄，10000只，发病20-30%，9/10MD+腺胃肿瘤化为特征的病例大连沈阳腺胃肿瘤化为特征的病例哈尔滨牡丹江脾脏肿瘤年度省份鸡场数病料数MD阳性鸡场数MD阳性病料数MD阳性率2013755159378767.3%201210512143915276.5%2011630149199563.3%合计13652295334平均69.1%2011-2013年MDV流行病学检测---我国MDV呈经常性、普遍性散发状态省鸡场病料阳性鸡场阳性病料阳性率年度MDVMDV+REVMDV+ALVMDV+CAVMDV+REV+CAVMDV+ALV+CAVMDV+REV+ALV+CAV201337403120201239135142201119141011合计95679273MDV与REV、ALV和CAV的混合感染（2011-2013）---混合感染是常见现象序号病毒名称分离时间病料采集地点发病鸡日龄代次132bp拷贝数Meq(bp)致病性1SY062006.06辽宁NAF321020vvMDV2CGZ072007.09黑龙江NAF3多1197mMDV3MS072007.08四川NAF621020vvMDV4QQHE2007.12黑龙江NAF421020vvMDV5HuaY2008.09四川50F321020—6HC1102008.05辽宁110F3多1120—7HC32008.12辽宁NAF221020—8HC1352008.05辽宁135F921020vv+MDV9DH12008.05吉林NAF221020—10HC1402008.05辽宁NAF421020—11DH72009.04吉林NAF321020—12LY112011.06辽宁NAF421020vvMDV13MDJ112011.02黑龙江NAF221020—14Hrb112011.03黑龙江NAF321020—15ChangZou2011.03江苏NAF4多1197—16JLCC2011.10吉林114F421020vv+MDV17SDWC2011.11山东110F321020vvMDV18SDCY2011.11山东40F721020vv+MDV19JSYC2012.10江苏NAF321020vvMDV20HB122012.08河北60F221020vvMDV21MDJ20122012.12黑龙江100F421020—22HLJWC122012.03黑龙江95F321020vvMDV23ZY122012.03江苏NAF421020vvMDV24JLSY2012.04吉林125F521020—25SYTS72012.03辽宁80F421020—26SY122012.09辽宁63F3多1197mMDV27TS62012.03辽宁NAF321020vv+MDV28JZ52012.04辽宁NAF321020—29YH112012.04辽宁NAF321020—30DH132013.07吉林112F321020—31LY132013.09吉林140F221020—32MDJ132013.05黑龙江NAF321020—MDV分离毒株特性注：NA表示未知，“—”表示未检测。MDV流行毒株致病性多在vv（9）-vv+（4）符合强、弱毒的分子特征177bp病毒Virus鸡数NumberofchickensMD早期死亡率（%）PercentageMDEMSMD死亡率（%）PercentageMDmortalityMD阳性率（%）PercentagetotalMDSY1764.764.7100ZY17035.394.1YC15202080FY15040100QQHE152020100HB13038.5100WC122001095ZY12201020100JS1210251421.428.6100WC1114021.3100GA17023.582.4PBS1500010株MDV分离毒株对SPF鸡的致病性MDV流行毒株对鸡具有高致病性病毒疫苗鸡数MD死亡鸡数MD阳性率保护指数（PI）HBCVI9881108/1127.3WC12CVI9881600/16100ZY12CVI9881703/1782.3JS121025CVI9881026/1040WC11CVI9881202/1283.3GACVI9881700/17100PBSCVI9881500/15-PBSPBS1500/15-5株MDV分离毒株对免疫鸡（CVI988疫苗）的致病性---MDV致病性增加；现有疫苗对某些毒株不能提高完全保护。MDV与REV混感和分子重组一个混感感染病例2011年某鸡场商品蛋鸡，40日龄开始发病。症状--腺胃炎，腺胃肿；鸡瘦小；有死亡；无明显肿瘤。送检鸡--52日龄。检测结果—MDV+、REV+电镜负染切片MDVREV存在MDV和REV病毒粒子组别疫苗发病率肿瘤率死亡率保护指数攻毒组—15/15，100%15/15，100%14/15，93%—CVI9889/14，64%7/14，50%0/14，0%36空白对照组—0/15，0%0/15，0%0/15，0%—----高发病率、高致死率、高肿瘤率；突破疫苗保护.致病性分离株攻毒-腺胃MDV肿瘤特征肿瘤组织病理学观察组织上以多形态的淋巴细胞增生浸润为基础，包括小型、中型和大型淋巴细胞。即，细胞的大小不一，形态各异。细胞核淡明，核仁大而明显。浸润范围广泛，取代原来的正常组织（腺胃）。腺胃的肿瘤细胞可见多数的异常核分裂像。同时可见肿瘤细胞的坏死（核浓缩）CVI988-分离株组-肾-肝-腺胃-----肿瘤的差异REV肿瘤特征肿瘤细胞为成淋巴细胞。细胞大小均一，细胞核淡明，核仁1-数个。细胞浆淡染，细胞界限不明显。未见核分裂像。肿瘤细胞呈占位性，呈局灶性浸润。肿瘤组织病灶通常呈圆形或类圆形。未见肿瘤细胞凋亡和坏死。背景：反转录病毒—REV在疱疹病毒MDV基因组中的插入重组基础混合感染现象---商业鸡群---多致瘤病毒共感染共同的宿主---淋巴细胞和相同的微环境，MDV-感染B和T淋巴细胞，转化T；ALV引起骨髓细胞转化MDV和ALV都在成纤维细胞中复制，ALV胸腺，法氏囊中复制；REV，淋巴细胞或网状内皮细胞，成纤维细胞中复制反转录病毒为了自身复制，可以整合到任何双链DNA中（宿主、MDV、HVT、禽痘病毒）细胞中相同的复制位置REV在MDV基因组中的插入验证Hot-SpotPCR（REV和MDV上下游交叉引物检测，病毒重组的验证）MDVpBAC-C全基因组序列C全长TRLULIRLIRSUSTRSREVLTR大小(bp)1778111291311354212913129411035012346533（2）位置1-177811964-1387613877-127418127419-140331141210-154150154151-164500164501-176846153096-152564165795-165263IRs区插入的相对位置（MDVMd5）LTRMDV086（细胞质蛋白）MDV085（预测蛋白）MDV083（反义RNA蛋白）MDV084（ICP4）MDV087（MDV1S2）MDV088（ICP22）MDV089（Us10）IRs区TRs区插入的相对位置（MDVMd5）LTRMDV097（MDV1S2）MDV096（gE）MDV095（gI）MDV098（细胞质蛋白）MDV099（预测蛋白）MDV101（反义RNA蛋白）MDV100（ICP4）TRs区插入重组的意义：反转录病毒是混乱宿主和疱疹病毒遗传物质的元件之一。这种重组可能改变MDV的组织趋向性、传播方式、致病性、疫苗保护性---MDV的进化？MDVmeq序列-88株，测定序列-63株（2006-2013）参考序列-25株（中国分离毒株-11株，国外毒株-14株）我们测的63株中除了3株位于弱毒分支外，其他的60株位于一个独立进化分支（不同于国外的毒株）。L-MDJ-5-201305L-LY-201310182L-MDJ-2-20130130L-LY-2013091620L-CC-20131204L-JLSY2012020730LSY2L-HB2012083030LNMGYL040920DQ174459China3L-MDJ2011GX070079EU427304China200LHuaYGX070060EU427303China3L-WC120120312LQQHE200LCZL-HN201203263L-YH201203GXY2EF546430China200