银杏叶中黄酮类化合物的提取研究意义

银杏叶中黄酮类化合物的提取研究意义银杏被称为裸子植物的“活化石”，是我国特有植物。其主要药用成分为黄酮类和萜内酯类化合物。我国银杏叶资源占世界资源的3/4以上，但在银杏叶的提取和测定上，还很落后。所以，要更深一步对银杏叶进行研究。本文研究了银杏叶中的黄酮类化合物，包括它的成分、提取方法和测定方法。由于黄酮类化合物具有降血脂、血压和治疗冠心病、心绞痛、慢性肝炎等多种药理及保健作用，因此，对其的研究具有广泛的前景。银杏叶为银杏科银杏属植物银杏（GinkgobilobaL.）的叶子。近年来，国内外学者对银杏叶提取物（GBE）进行了大量的研究，药理试验表明其主要药用成分为黄酮类化合物。目前提取银杏叶黄酮类化合物的方法主要有水浸取法和有机溶剂提取法，水浸取法由于浸出效率低、杂质含量高、后处理工艺复杂而很少被采用，而有机溶剂提取法成本高、溶剂残留，工艺有待改进。本文在详细总结了目前银杏叶黄酮类化合物的提取和分离的基础上，对水浸取树脂吸附法进行了研究。通过对浸取温度、浸取液pH值、浸取时间、浸取次数及浸取固液比进行考察，确定了最佳浸取工艺。在对银杏叶黄酮类化合物浸出液进行富集分离时，采用了对环境和人体无毒害作用的树脂吸附工艺，研究了影响吸附和洗脱效果的因素，如吸附液浓度、吸附液pH值、吸附树脂用量、吸附液流速、洗脱剂流速、洗脱剂浓度和用量等，确定出最佳吸附工艺，同时在试验中还考察了水洗和醇洗二次洗涤对GBE质量的影响，以获得质量较高的GBE。大孔吸附树脂近年来广泛应用于天然产物的分离，由于具有选择性强和无毒副作用的优点而受到重视。本研究中使用了DM-130大孔吸附树脂，试验结果表明该树脂对银杏黄酮类化合物具有良好的吸附性和选择性，为合理高效利用银杏开辟了一条新途径。1银杏叶中黄酮类化合物的化学成分黄酮类化合物在银杏叶中含量较高，有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及其苷类，儿茶素类和双黄酮等成分。黄酮类化合物都含有Cl5核，在银杏叶提取物中的含量约占5.91%，目前从银杏叶提取物中已分离的黄酮类化合物有40种。2银杏叶中黄酮类化合物的提取方法1）有机溶剂提取法主要是使用的溶剂为酮、醇类，后再进行净化。近年来越来越多的被采用。在国内，多采用乙醇作溶剂进行提取，在国外，多用丙酮作溶剂进行提取；银杏叶被溶剂粗提后，再进行精制，国内一般采用树脂吸附的方式进行精制，在国外一般采用有机溶剂萃取的方式精制。2）微波提取法微波具有试剂用量少、加热均匀、提取批量大、选择性好等优点。以微波辐射的方式可加快反应速度。在提取黄酮类化合物上取得很好的效果。3）超临界萃取法具有节能明显，工艺流程简单，萃取的效率高，无有机溶剂残留，产品质量好，对环境无污染等优点。但超临界萃取法使用的设备属高压设备，投资比较大，操作比较困难等缺点，很难应用于大规模的生产。4）酶浸渍萃取法是利用酶反应的高度专一性，将细胞壁的组成成分水解或降解，破坏细胞壁，从而提高有效成分的提取率。且要求酶有极高的活性、温和的反应条件，酶法提取的效果主要取决于酶的种类、用量、酶解时间、温度、酸碱度、物料细度、搅拌等多种因素。5）超声波辅助提取法是利用超声波具有的机械效应，空化效应和热效应，通过增大介质分子的运动速度、增大介质的穿透力来提取生物有效成分。近年来越来越受到广泛重视。超声波提取具有节时、节能、节料、提取率高的特点。6）大孔树脂吸附法因为银杏黄酮具有糖苷链和多酚结构，有一定的亲水性和极性，利于弱极性和极性树脂对其吸附。而非极性树脂吸附黄酮的量偏小。7）细胞和组织培养合成法是在无菌的条件下将组织或细胞置于培养基内，并放在适宜的环境中，进行连续培养而成的细胞、组织或个体。而银杏具有遗传性稳定、有克隆性、筛选方便等特点，这种技术已广泛应用于农业和生物、医药的研究。8）超滤法是以压力为推动力的膜分离技术之一。对水施加一定的压力后。高分子物质胶体物质就由膜所阻止，而水和低分子物质透过滤膜的过程，可较高选择性的分离体系中的各组分，且方法简便，易操作。9）水提取树脂分离法将银杏叶进行预处理，再以热水作溶剂进行浸提，再经树脂柱吸附精制得到。目前此方法的报道很少。3黄酮类物质的测定方法1）分光光度法多采用芦丁标准品，配制含芦丁的标准液，测定吸光度，绘制标准工作曲线。此法被一些药典所采用，只能粗略估计总的类黄酮，不能对苷元细致地定量、定性，所以测定结果偏高，重复性差，准确度低，但本法具有简单、快速、试剂用量少等优点。2）色谱法。纸色谱法是使用有多孔和强渗透能力的滤纸或纤维素薄膜进行分离测定的方法，但此法分析黄酮选择性比较差。薄层色谱法是将硅胶G、氧化铝等涂在玻璃板上，形成一层薄层，以溶剂为流动相对混合物进行定性或定量的方法；该法与HPLC方法比较无明显优势，因而研究及报道均较少。气相色谱法具有分离效率高、灵敏度高、进样量少、应用范围广等优点；但样品需要预处理，步骤较麻烦；高效液相色谱法测定银杏总黄酮专属性强，灵敏度高，准确度高，己被许多国家采用。超临界CO2萃取色谱法是利用其分离效率高的特点，对样品中黄酮进行分离检测。该法是目前较先进的测定方法，但所需设备大，费用高。高速逆流色谱法是一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，它不需任何固态载体，能避免固相载体表面与样品发生反应而致使样品的被污染、变性、失活和不可逆吸附等不良影响。同时它也具有适用范围广、成本低、快速、回收率高等优点。3）极谱法是通过测定电解过程中所得到的极化电极的电流-电位（或电位-时间）曲线来确定溶液中被测物质浓度的一类电化学分析方法。具有适用范围广、准确度高、选择性好等优点，汞蒸气有毒，须注意通风，检查空气中含汞量。4）滴定法。库仑滴定法与普通滴定法不同的是它的滴定剂是通过电解在电极上产生的，它具有快速、高效等优点，此法不需要使用标准品，非常简便。示波滴定法是采用钨电极为参比电极，铂电极为指示电极，在含KBr的盐酸介质中，以KBrO3标准液为滴定剂进行定量分析，由消耗的KBrO3的量计算总黄酮的含量（以芦丁计）。此法操作简便、测定快速等特点，且可避免杂质、色素的干扰。5）毛细管电泳法是以石英毛细管为分离通道，在高压电场下，跟据样品中各组分间淌度和分配上的差异而实现分离的方法，此法以快速、高效、用样量少、重现性好、耗溶剂少、不易污染等优点。6）液相色谱与质谱联用法由于液相色谱-质谱联用相对于通常的检测方式，具有高选择性、高灵敏度、分析时间短及能够提供分子量与分子结构信息等优点，在许多领域中有广泛应用。7）喷雾HPLCMS法将喷雾接口与HPLC、MS联用，进行双黄酮分离鉴定，既可克服二极管阵列检测器对结构类似的双黄酮分辨不清的困难，又可避免紫外检测没有选择性缺陷。该法简单可靠，适于双黄酮的定性定量分析。但仪器昂贵，在国内报道很少，不便推广。4黄酮类化合物的研究意义黄酮类化合物在食品工业、医药工业及化妆品工业应用广泛。但是它在人体中不能直接合成，仅可在食品中获取，所以人们近年来都在关注在植物中提取高纯度、强活性的天然黄酮类化合物。所以，对黄酮的测定及提取方法的研究有良好的前景。