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前期承担任务及验收情况:前期承担的863项目“功能生物材料与组织器官工程产品研究”子课题“肝脏脱细胞支架材料制备与肝脏组织构建研究”(2012-2015,170万元)。本研究通过筛选和优化程序化的诱导分化方案,将胚胎干细胞和诱导多能干细胞经历定向内胚层、肝干细胞、肝祖细胞,最终分化成为有功能的肝细胞;同时依托具有自主知识产权的快速且温和的脱细胞技术,建立肝脏脱细胞支架的制备方法并获得具有生物活性的肝脏支架;利用人胎肝血窦内皮细胞和诱导分化获得的肝系细胞实现脱细胞支架的再血管化和再细胞化,并优化了再血管化和再细胞化的条件。应用干细胞和组织工程技术构建的功能性肝脏替代物,可为终末期肝病的治疗以及体内外药物安全性评价提供理论及技术平台支持。已按合同规定内容完成了各项考核指标,发表SCI论文1篇,影响因子3.677分,正在结题中。个人简介:王韫芳,女,博士,研究员,博士生导师,北京市科技新星,国际学术期刊Hepatology杂志编委,TissueEngineering、JournalofTissueEngineeringandRegenerativeMedicine等杂志审稿人。长期从事干细胞可塑性及其在组织再生中应用的基础及转化研究,尤其关注人胚胎干细胞/诱导重编程细胞及成体干细胞诱导分化及其调控机制和策略研究。作为负责人获得多项国家863项目、973计划、国科金面上项目等资助,总经费2000余万元。在国际期刊发表SCI收录论文30余篇,总IF202。参编(译)书籍7部。申请国家发明专利、实用新型专利37项,获授权18项,包括2项国际PCT专利。作为主要完成人,获得3项干细胞产品SFDA临床试验批文,2项干细胞临床新技术总后卫生部批文。上述成果分别获国家科技进步二等奖、北京市科学技术一等奖、武警部队科技进步二等奖、三等奖、河北省科技进步二等奖、“十一五”全军后勤重大科技成果各1项,2011年享受军队优秀专业人才岗位津贴,2015年入选军事医学科学院科技创新战略工程“拔尖人才”。支撑条件:实验室长期从事组织工程与干细胞生物学研究,申请者已经在相关的研究领域取得了研究进展,具备本项目研究所需的分子生物学、细胞生物学、病理生理学等方面的主要技术和仪器设备,主要包括:组织冷冻研磨装置、多模式微孔板检测成像系统、MACS磁分选系统、低温高速离心机、RealTimePCR仪、常用DNA和蛋白质电泳系统及转移装置、蛋白电转印系统、化学发光检测系统、光学及荧光显微镜、体式荧光显微镜、全自动脱水机、石蜡切片机、冰冻切片机、超高分辨全光谱切片分析系统、超低温冰箱、超净台、常规细胞培养间等,可以满足研究的需要。同时实验室已有各种应用于不同细胞生物学及分子生物学实验的试剂,具备稳定的试剂采购渠道,故本课题的全部实验研究均可在本实验室完成,能提供课题顺利进行的硬件保障。实验室依托的军事医学科学院下属国家生物医学分析中心配备有激光共聚焦显微镜、透射电子显微镜、小动物活体荧光素酶显像系统等大型先进仪器设备,能实现先进的分子生物学和细胞生物学分析研究。研究室依托的军事医学科学院下属实验动物中心具有大鼠、免疫缺陷小鼠、猕猴、猪等模型动物的繁育基地和国家认证的三级动物房,能充分满足研究课题顺利实施。团队优势:2010年回国后重新组建干细胞与组织再生课题组,2015年成立组织工程研究室,目前主要任务是,以ESCs/iPSCs等为模型,进一步深入阐明干细胞向肝系细胞、胰岛内分泌细胞及表皮细胞分化的谱系成熟规律,利用具有高效扩增和分化潜能的干细胞与生物活性支架相结合,在生物反应器的支持下构建具有特定形状、结构、血液供应和生物功能的组织工程化肝脏与皮肤,为疾病及创伤修复治疗提供新的有效手段,同时为药物研发、毒性安全性评价等建立有效的体外研究平台。整个团队长期从事干细胞生物学及其在肝脏再生中应用的基础研究,尤其关注人ESCs/iPSCs及成体干细胞向肝系细胞诱导分化、调控及其临床转化研究,取得了系列标志性成果:①在国际上首次阐明肝脏基质细胞及其分泌的细胞外基质和可溶性细胞因子构成的微环境具有梯度规律,该分布规律影响肝干细胞谱系特异性分化及命运转归(Hepatology.2010);②建立具有自主知识产权的“四步法原位肝脏脱细胞”技术,对肝细胞外基质进行生物和理化分析,阐明细胞外基质类别对肝脏干细胞增殖及分化的指导意义(Hepatology.2011,coverstory);③国际上首次阐明人肝外胆道周围腺体是多潜能干细胞储备池,其具有内胚层干细胞的特性和向肝脏、胆管和胰岛内分泌腺上皮细胞分化的特性,并作为中方代表参加中/美/意三国联合开展的“肝外胆道系统多潜能干细胞参与肝脏胰腺再生”的基础与临床前试验研究(JournalofHepatology.2014;Stemcells.2013;NatureReviewsGastroenterology&Hepatology.2012;Hepatology.2012;Hepatology.2011);④分别诱导胚胎干细胞、胎肝/脂肪/骨髓等组织来源的成体干细胞向有功能的成熟肝细胞分化,并与支架材料或微囊化培养等技术结合,为规模化肝细胞的分化、培养,进而为构建组织工程化肝脏或细胞治疗奠定基础(TissueEngineeringPartC:Methods.2010;TissueEngineeringPartC:Methods.2009;PLoSOne.2010);⑤参加StemCellsHandbook,2ndEdition肝脏干细胞部分的编写(StewartSell,SpringerSciencePublishers.NewYork.2013)。国际合作:2007-2010年赴北卡罗来纳大学教堂山分校(UniversityofNorthCarolinaatChapelHill),先后在LolaReid和YiZhang博士实验室做博士后研究助理,期间分别于2009年1月、7月和2010年3月到维克森林再生医学研究所(TheWakeForestInstituteforRegenerativeMedicine,WFIRM),匹兹堡大学Mcgowan再生医学研究所(McGowanInstituteforRegenerativeMedicine,UniversityofPittsburgh)和迈阿密大学糖尿病研究所(DiabetesResearchInstitute,UniversityofMiami)各进行为期1个月的访问合作,深入系统地就胚胎干细胞、成体干细胞肝向/胰向分化及其在组织构建及组织再生中的应用开展相关基础研究,取得了系列标志性成果。自2010年起,在国际上首次阐明人肝外胆道周围腺体是多潜能干细胞储备池,其具有内胚层干细胞的特性和向肝脏、胆管和胰岛内分泌腺上皮细胞分化的特性,并作为中方代表参加中/美/意三国(美国UNCReid实验室和意大利Sapienza罗马大学DomenicoALVARO团队)联合开展的“肝外胆道系统多潜能干细胞参与肝脏胰腺再生”的基础与临床前试验研究。期间,联合申请国际专利4项,其中1项已获授权;共同发表有国际影响力的文章10篇,并参与StemCellHandbook第二版的部分章节撰写。
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