转基因植物中报告基因表达检测-gus活性检测的思考题

1、对实验结果进行文字描述。2、根据你的实习谈谈gus活性检测时应注意哪些问题。注意事项：用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1-3mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。3、gus基因为什么被称之为报告基因？在转基因应用中有哪些优缺点。报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。报告基因必须具备的条件：(1)已被克隆和全序列已测定;(2)表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;(3)报告基因编码的产物的检测应该快速、简便、灵敏度高而且重现性好，表达产物能进行定量测定。(4)细胞内其它的基因产物不会干扰报告基因产物的检测。GUS活性检测优点（1）在大多数植物组织中GUS活性的本底低；（2）反应产物基本不扩散，在植物细胞内积累；（3）通过简单的扩散或真空渗入，底物易被植物细胞吸收。GUS基因作为报告基因的优势：GUS蛋白在植物细胞中稳定存在，对较高的温度和去污剂有一定的耐受性；检测方法简单，可定性或定量：使用X-Gal为底物，通过显色反应来观察；使用4-MU为底物，反应以后生成荧光物质，通过相应的荧光检测仪来进行经确定量；多数植物组织中GUS背景表达低，样品表达能够很好区分。缺点（1）不适用于活体组织的观察；（2）在GUS表达水平很高的组织中会发生无色反应产物渗漏的现象，但是可以通过在底物溶液中加入氧化剂氰化钾或亚铁氰化钾或者二者都加（终浓度为5mmol/L），来使这种渗漏减至最少。