PBS缓冲溶液的配制

PBS标准配方如下（1L）：成分分子量终浓度（mM）用量（g）近似用量（g）半数用量（g）NaCl58.441378.0068.004.00KCl74.5512.70.2010.200.10Na2HPO4·12H2O358.14103.5813.581.79KH2PO4136.0861.760.2400.240.12理论上需要调pH，但在实际操作中，用蒸馏水或者超纯水配制后，pH在7.3左右，所以通常不用调pH。10×PBS配方如下（1L）：成分近似用量（g）NaCl80.0KCl2.0Na2HPO4·12H2O35.8KH2PO42.410×PBS保存于4℃时，会析出晶体，且不易复溶，因此10×PBS要在室温保存。PBS在室温保存时容易长菌，应保存于4℃。关于PBS配方的比较与讨论：我们平时会用到PBS，但网上PBS的配方有多种，不知如何选择？参考一：看你的用途了。配方虽然有多种，但在“等渗”这个概念上相差都不大。常见的配方一般有三种：1、0.9%的生理盐水有些人也把它叫做PBS，实际上是错误的概念，它并没有“PB”，没有缓冲能力，纯化少用。2、pH7.3，137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，1.8mMKH2PO4。经验证，这种配方是没有办法加钙离子和镁离子的，会形成沉淀。此配方为0.01M的PBS，所对应的质量分别为8gNaCl，0.2gKCl，1.44g（1.42g）Na2HPO4和0.24g（0.27g）KH2PO4。考虑到Na2HPO4通常为Na2HPO4·12H20，所以应该加3.58g。（修正过的）。这个配方比较常用的，含K，特别在分子生物学上常用。通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100u/ml青霉素和链霉素之后再调pH、定容、灭菌消毒。3、pH7.2～7.4，20mMPB，150mMNaCl这个配方是蛋白质纯化常用的PBS，配制起来比较方便。具体到称量方面，要注意试剂是否有结晶水，分子量是不同的。参考二：关键看用途，如果是要活性，要考虑你的目的蛋白在什么样的环境下稳定，主要是掌握好钠钾平衡和生理状态下离子强度，在此前提下有一定的缓冲能力。参考三：PBS是phosphate-bufferedsaline的意思。看看下面这个，或许对你有用ApplicationsPBShasmanyusesbecauseitisisotonicandnon-toxictocells.Itcanbeusedtodilutesubstances.Itisusedtorinsecontainerscontainingcells.PBScanbeusedasadiluentinmethodstodrybiomolecules,aswatermoleculeswithinitwillbestructuredaroundthesubstance（protein,forexample）tobe'dried'andimmobilizedtoasolidsurface.Thethinfilmofwaterthatbindstothesubstancepreventsdenaturationorotherconformationalchanges.Carbonatebuffersmaybeusedforthesamepurposebutwithlesseffectiveness.PBScanbeusedtotakeareferencespectrumwhenmeasuringtheproteinadsorptioninellipsometry.Additivescanbeusedtoaddfunction.Forexample,PBSwithEDTAisalsousedtodisengageattachedandclumpedcells.Divalentmetalssuchaszinc,however,cannotbeaddedasthiswillresultinprecipitation.Forthesetypesofapplications,Good'sbuffersarerecommended.PreparationTherearemanydifferentwaystopreparePBS.Someformulationsdonotcontainpotassium,whileotherscontaincalciumormagnesium.Oneofthemostcommonpreparationsisdescribedbelow.ThesimplestwaytoprepareaPBSsolutionistousePBSbuffertablets.TheyareformulatedtogiveareadytousePBSsolutionupondissolutioninaspecifiedquantityofdistilledwater.Theyareavailableinthestandardvolumes:100,200,500and1000ml.A10literstockof10xPBScanbepreparedbydissolving800gNaCl,20gKCl,144gNa2HPO4and24gKH2PO4in8Lofdistilledwater,andtoppingupto10L.ThepHis~6.8,butwhendilutedto1xPBSitshouldchangeto7.4.Whenmakingbuffersolutions,itisgoodpracticetoalwaysmeasurethepHdirectlyusingapHmeter.Ifnecessary,pHcanbeadjustedusinghydrochloricacidorsodiumhydroxide.Ondilution,theresultant1xPBSshouldhaveafinalconcentrationof137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMSodiumPhosphatedibasic,2mMPotassiumPhosphatemonobasicandapHof7.4.AnotherpreparationisdescribedinMolecularCloningbySambrook,FritschandManiatis,ApendixB.12asfollows:For1litreof1xPhosphate-bufferedsaline（1xPBSbuffer）use:-Dissolvein800mlofdistilledH2O:-8gofNaCl（137mM）-0.2gofKCl（2.7mM）-1.44gofNa2HPO4（10mM）-0.24gofKH2PO4（1.76mM）-AdjustthepHto7.4withHClorNaOH-AddH2Oto1liter.Dispensethesolutionintoaliquotsandsterilizethembyautoclaving（20min,121℃,liquidcycle）.Storeatroomtemperature.参考四：含钾盐的PBS应该和生理条件最为接近，可能是保持某些生物大分子功能性的要求，如酶的活性。而在蛋白质纯化过程中，钠盐或钾盐所提供的就是离子强度，从方便性考虑，用一种就够了。钠盐最普通，就选择氯化钠了。但也不是绝对的，在GST亲和柱纯化中所用的平衡缓冲液就是含钾盐的PBS，可能因为它的结合是酶和底物之间的关系吧。PBS（Phosphate-bufferedSaline）分子克隆上的配方NaCl8g137mMKCl0.2g2.7mMNa2HPO41.44g10mMKH2PO40.24g2mM溶到800ml蒸馏水中，用HCl调pH到7.4，然后加水补充到1000ml，15psi（1.034×105）20min高压灭菌或者滤膜除菌，室温保存。一般用于实验室中的PBS缓冲液都是这样配制，而不用摩尔分数表示。分子克隆上补充“PBS是一种通用试剂。值得指出的是本文列出的配方缺乏双价阳离子，如果需要，PBS可以补加成1mMCaCl2和0.5mMMgCl2”。但本人在试验过，加入后立马形成沉淀，不明何故。免疫学手册上的配方：NaCl19.00g154mMNa2HPO41.15g8.1mMNaH2PO40.23g1.9mM加水900ml调pH7.2～7.4再加水补充到1L0.05M储存液NaCl100.00gNa2HPO412H2O66.15gNaH2PO4H2O6.66gKCl4.50g加双蒸水至4500ml，用HCl或NaOH调pH到7.4即可。使用时稀释5倍，即0.01M。PBS（0.1M，pH7.4）贮存液配方（10倍浓缩）NaCl80gNa2HPO412H2O32.3gNaH2PO42H2O4.5g加蒸馏水至1000ml或者NaCl80gNa2HPO42H2O11.5gKH2PO42gKCl2g加蒸馏水至1000ml天津百浩生物科技有限公司PBS（0.01M）NaCl8gNa2HPO4·12H2O2.9gNaH2PO4·2H2O0.2964g加蒸馏水至1000mltakara公司：与分子克隆基本相同，不同之处为Na2HPO41.42g（分子克隆是1.44g），并且也提示可以加入钙镁离子。