课题2微生物的分离和计数学案

课题2微生物的分离和计数一、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数（一）筛选菌株：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一氮源，只有能够利用尿素的微生物才能生长，培养基按物理性质划分属于固体培养基。（二）统计菌落数目1、稀释涂布平板法：（活菌计数）为使结果接近真实值，同一稀释度加到三个或三个以上平板上，从平板上选择菌落计数时，一般选菌落数在30-300的平板进行计数，计算菌落的平均数，统计的结果往往比实际数目低，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。2、显微镜直接计数（三）设置对照：用牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。（四）实验过程1、土壤取样细菌计数：一般选用104、105、106倍稀释液2、样品的稀释放线菌计数：一般选用103、104、105倍稀释液真菌计数：一般选用102、103、104倍稀释液3、培养与观察培养：细菌：30-37℃温度下，培养1-2天放线菌：25-28℃温度下，培养5-7天霉菌：25-28℃温度下，培养3-4天观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。（五）鉴定：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，如果指示剂变红，可确定该种细菌能分解尿素。（选择培养基）二、分解纤维素的微生物的分离（一）纤维素酶组成：是一种复合酶，包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶作用：纤维素纤维二糖葡萄糖（二）实验原理：1、刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应；2、纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素，是菌落周围形成透明圈，即可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。（三）实验流程：1、土壤取样：选择富含纤维素的环境2、选择培养目的：增加纤维素分解菌的浓度，确保能够从样品中分离到所需微生物培养基类型：按物理性质划分：属于液体培养基按用途划分：属于选择培养基，以纤维素为主要碳源。3、梯度稀释C1酶、CX酶葡萄糖苷酶4、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上培养基类型：按物理性质划分：属于固体培养基按用途划分：属于鉴别培养基，刚果红染色法：方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应方法二：在倒平板时加入刚果红5、挑选产生透明圈的菌落6、进一步鉴定：为确定得到的是否是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验，有液体发酵和固体发酵两种；纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。