脂肪间充质干细胞移植后肝硬化大鼠血生化指标的变化

中国组织工程研究第20卷第36期2016–09–02出版ChineseJournalofTissueEngineeringResearchSeptember2,2016Vol.20,No.36P.O.Box10002,Shenyang110180·研究原著·韩海燕，女，1983年生，天津市人，汉族，2009年河北北方学院毕业，检验技师，主要从事医学检验方面的研究。并列第一作者：宋文广，主管技师。中图分类号:R394.2文献标识码:B文章编号:2095-4344(2016)36-05364-07稿件接受：2016-07-27脂肪间充质干细胞移植后肝硬化大鼠血生化指标的变化韩海燕1，宋文广2(武警后勤学院附属医院，1检验科，2生殖医学研究中心，天津市300162)引用本文：韩海燕，宋文广.脂肪间充质干细胞移植后肝硬化大鼠血生化指标的变化[J].中国组织工程研究，2016，20(36):5364-5370.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.36.007ORCID:0000-0002-0801-0866(韩海燕)文章快速阅读：文题释义：脂肪间充质干细胞移植：人或者动物的脂肪组织经培养后可能得到具有复制和分化潜能的脂肪源性间充质干细胞，脂肪间充质干细胞具有和骨髓间充质干细胞相似的特性，具有相似的标记抗原、基因转导能力、多向分化能力等。与骨髓间充质干细胞相比，具有取材方便、细胞获得率高、增殖不需要特定血清或基质补充等优点，因此具有比骨髓间充质干细胞更为广泛的应用前景。肝纤维化：是多种原因引起的慢性肝损害所致的病理改变，表现肝为内细胞外间质成分过度异常地沉积，并影响肝脏的功能，是慢性肝病发展到肝硬化必经之阶段。肝纤维化形成过程已趋明朗，其形成过程与血清生化有关，大致可分为慢性肝损害，细胞因子网络失调和细胞外间质代谢异常3个环节。任何原因如肝炎病毒、血吸虫病、酒精、药物及毒物等长期持续损害肝脏，都将导致肝纤维化形成，所以肝纤维化的病因是多样的、复杂的。摘要背景：干细胞移植是晚期肝病比较有前景的治疗方法，脂肪间充质干细胞是继骨髓间充质干细胞后的又一研究热点。目的：观察脂肪间充质干细胞移植后对肝硬化大鼠血生化指标的影响作用。方法：将60只大鼠随机分为正常对照组、模型组及脂肪间充质干细胞组，各20只。模型组及脂肪间充质干细胞组采用四氯化碳灌胃诱导建立肝硬化大鼠模型。建模成功后1周，脂肪间充质干细胞组腹腔注射脂肪间充质干细胞悬液，正常对照组及模型组注射生理盐水。结果与结论：与对照组相比，模型组大鼠肝组织中丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、总蛋白含量及血清丙二醛含量显著升高，血清白蛋白、血清蛋白含量与球蛋白比值及肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶及环磷酸鸟苷含量明显下降，且吲哚氰绿15min滞留率及肝纤维化程度明显上升，而与模型组相比，脂肪间充质干细胞组相比丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、总蛋白含量及血清丙二醛含量显著下降，血清白蛋白、血清蛋白含量与球蛋白比值肝组织中明显升高，且吲哚氰绿15min滞留率及肝纤维化程度明显减轻，同时脂肪间充质干细胞组大鼠肝脏组织中可见CM-Dil标记的阳性脂肪间充质干细胞。提示脂肪间充质干细胞能够影响大鼠肝硬化的血生化指标水平，脂肪间充质干细胞移植后可以减轻大鼠肝硬化程度。关键词：干细胞；移植；脂肪间充质干细胞；肝硬化；肝纤维化；肝功能主题词：肝硬化；干细胞移植；组织工程脂肪间充质干细胞移植后可以减轻大鼠肝硬化程度四氯化碳灌胃给药诱导大鼠肝硬化模型脂肪间充质干细胞组腹腔注射移植治疗观察各组大鼠的肝脏病理组织学变化，肝功能及肝纤维化程度验证脂肪间充质干细胞移植治疗可以改善肝脏功能，减轻肝硬化程度韩海燕，等.脂肪间充质干细胞移植后肝硬化大鼠血生化指标的变化ISSN2095-4344CN21-1581/RCODEN:ZLKHAH5365(1DepartmentofClinicalLaboratory,2ReproductiveMedicineCenter,AffiliatedHospitalofLogisticsUniversityofCAPF,Tianjin300162,China)AbstractBACKGROUND:Stemcelltransplantationisapromisingtreatmentofadvancedliverdisease,andadipose-derivedmesenchymalstemcellshavebecomeanotherkindofpopularcellsfollowingbonemarrowmesenchymalstemcells.OBJECTIVE:Toinvestigatetheinfluenceofadipose-derivedmesenchymalstemcelltransplantationonbloodbiochemicalindicesoflivercirrhosisrats.METHODS:Sixtyratswereequallyrandomizedintonormalcontrol,modelandcelltransplantationgroups.Modelratsoflivercirrhosisweremadeinthelattertwogroupsthroughintragastricadministrationofcarbontetrachloride.Oneweekaftersuccessfulmodeling,ratsweregivenintraperitonealinjectionofadipose-derivedmesenchymalstemcellsuspensioninthecelltransplantationgroup,andgivennormalsalineintheothertwogroups.RESULTSANDCONCLUSION:Comparedwiththenormalcontrolgroup,themodelgroupshowedasignificantincreaseinthelevelsofalanineaminotransferase,aspartateaminotransferase,totalbilirubin,totalproteininlivertissues,serumlevelofmalondialdehyde,15-minuteindocyaninegreenretentionrateanddegreeofhepaticfibrosis,andasignificantdecreaseinserumalbuminlevel,serumalbumin/globulin,levelsofglutathioneperoxidaseandcyclicguanosinemonophosphateinlivertissues.Onthecontrary,theseindicatorswereallimprovedinthecelltransplantationgroupcomparedwiththemodelgroup.Moreover,CM-Dil-positivecellswerevisibleinthelivertissueofratsundergoingadipose-derivedmesenchymalstemcelltransplantation.Allthesefindingsindicatethatadipose-derivedmesenchymalstemcelltransplantationcanreducelivercirrhosisinratsbyactingonbloodbiochemistrylevels.Subjectheadings:LiverCirrhosis;StemCellTransplantation;TissueEngineeringCitethisarticle:HanHY,SongWG.Variationofbloodbiochemicalindicesinlivercirrhosisratsafteradipose-derivedmesenchymalstemcelltransplantation.ZhongguoZuzhiGongchengYanjiu.2016;20(36):5364-5370.0引言Introduction肝硬化是一种慢性肝病，多呈慢性进行性发病[1]，其致病因素有很多，严重威胁着人类的健康，若得不到有效的治疗，还有可能进一步发展成为肝癌[2-3]。然而目前对于中晚期肝硬化的治疗方法特别少，肝移植几乎是惟一的治疗方案，但是由于肝脏来源有限，且移植后由于存在排异反应需要服用免疫抑制剂，且肝移植费用昂贵，手术风险很高，限制了肝移植的广泛应用[4-6]。因此迫切需要寻找一种新的治疗中晚期肝硬化方案。干细胞移植是近年来疾病生物疗法的研究热点，为临床各种疾病的治疗带来了新的希望。干细胞是一类能够在特定条件下分化成为各种组织器官的细胞[7-8]，因此广泛用于各种疾病的治疗。大量研究将干细胞移植运用于各种疾病的治疗中，试图依靠干细胞移植来解决先前存在的治疗方法无法解决的问题，并且已经取得了令人嘱目的进展[9-10]，包括对于肝病治疗的研究。研究证实干细胞移植能够明显改善终末期肝病患者的肝功能，并且能够显著延长终末期肝病患者的生存期[11-12]，改善患者的生活质量[13]。脂肪间充质干细胞不仅来源广泛，而且具有较强的分化能力及强大的增殖能力[14-15]，这些特点使得脂肪间充质干细胞成为继骨髓干细胞之后干细胞研究领域中的又一热点。文章旨在观察肝硬化模型大鼠移植脂肪间充质干细胞后生化指标的变化，从而判断脂肪间充质干细胞移植对肝硬化的治疗作用。1材料和方法Materialsandmethods1.1设计随机对照动物实验。1.2时间及地点实验于2014年1月至2015年8月在天津医科大学动物实验室完成。1.3材料实验动物：清洁级雌性Wistar大鼠80只，体质量120-250g，鼠龄4.0-5.0周，由天津医科大学动物实验中心提供，实验动物使用许可证号为SYXK(津)2013-0001。脂肪间充质干细胞由天津医科大学内分泌研究所提供，脂肪间充质干细胞来自48岁女性吸脂患者的臀上韩海燕，等.脂肪间充质干细胞移植后肝硬化大鼠血生化指标的变化P.O.Box10002,Shenyang110180方深层脂肪组织，经过离心、分离、培养后得到[16]，实验获得患者的知情同意。1.4方法1.4.1脂肪间充质干细胞的体外培养复苏冻存的脂肪间充质干细胞，加入完全培养基(含体积分数为10%胎牛血清、10