色谱分析演讲稿.

太子参根提取物的高压液相色谱（HPLC)指纹图谱和液相色谱飞行时间质谱法的分析演讲人：制作：色谱分析第七小组目录Backgroundandsignificance研究背景及意义Literatureintroduction论文简介Methodsandprocedure研究方法及过程Literaturesummary论文总结Backgroundandsignificance研究背景及意义研究背景近年来，色谱指纹技术作为一种控制药材质量的方法，由于其在实际应用中的有效性和方便性，已受到越来越多的关注。2000年，SFDA（中国国家食品药品监督管理局）颁布的规定要求所有用草药或相关材料制得的注射剂都需要用色谱指纹图谱进行标准化。010203尽管最近这些年进行了大量的研究工作，仍然没有关于如何标准化指纹识别程序的统一协议。进行比较同一批次的样品色谱图的重复性评价中，缺乏对中草药观察所得的复杂色谱之间的相似性的量化的有效的分析技术。SFDA（中国国家食品药品监督管理局）建议，这样的相似性匹配应建立在适当减少原始数据的维数后，计算相关系数和色谱图矢量角余弦值的基础上。论文研究意义Literatureintroduction论文简介在规范中药材方面，最理想的方法是直接量化那些具有生物活性的成分。然而，这往往是很难做的，因为在许多情况下，草药产品的活性成分知之甚少。以太子参为例，在中国药典（2005）里指定的质量控制技术是薄层色谱法。然而，通过薄层色谱法分析所提供的成分信息有限，不足以反映草药的真正质量。基于这些原因，为了对太子参提取物进行鉴别和质量评估，我们建立出一种新的、可靠的方法，即高效液相色谱—飞行时间—质谱法(LC–TOF-MS)论文简介论文简介太子参是一种最受欢迎的传统中药，广泛分布于福建、浙江、江苏、山东和安徽省。太子参在中国广泛用于与肺有关的各种疾病的治疗，并作为健脾补品。由于其在中医药中的广泛使用，因此发展出其有效的质量控制方法尤为重要高效液相色谱（HPLC）用来对太子参进行指纹图谱分析。液相色谱–电喷雾电离–飞行时间质谱（LC–TOF–MS）技术首次被用于识别指纹的成分。通过在线液相色谱飞行时间质谱法，分析出色谱指纹图谱中的十二个主要峰。基于质谱数据，一种环肽被明确确定和五种环肽进行了初步分配。这些环状肽作为高效液相色谱指纹图谱中的标记峰。通过相似性指数的计算和分层聚类分析（HCA）已经分析出色谱指纹图谱。结果表明，高效液相色谱指纹图谱可用于确定太子参最佳收获时间和鉴定草本植物物种。论文简介Methodsandprocedure研究方法及过程实验•材料•收集两组样品进行分析，标记分别为组1和组2。收集来自太子参不同亚种的两组样品。共有21个样品,组1有10个样品，组2有11个样品.在草本植物的生长期内，5,6,7月每隔5天进行一次采样。图1：太子参环肽B的结构样品制备准确称量0.5g的样品磨细粉和使用50ml甲醇超声提取30min、过滤。这种萃取额外重复了两次，合并的滤液在真空中蒸发干燥。然后将残渣溶解并稀释至10ml的容量瓶，在分析前通过一个0.45um的过滤膜进行过滤。将20μL的样品溶液注入色谱柱，并在色谱条件下分离。建立高效液相色谱测定方法在C18分析柱上进行色谱分离(SinoChromODS-BP4.6mm×200mm,5m)。流动相为水—乙酸（A;100:0.1,v/v）—乙腈(B)。A:B如下:0min,98:2;10min,90:10;30min,55:45;40min,45:55;60min,10:90;65min,0:100;75min,0:100;流速为1ml/min，柱温度保持在30度，所有溶剂通过0.45um滤波器，在使用前在超声波浴中超声脱气。飞行时间质谱参数采用高效液相色谱系统连接到飞行时间质谱仪即安捷伦G1969ATOF-MS（安捷伦科技公司），配有在正离子模式下工作的电喷雾接口.操作参数：毛细管电压：3500V;喷雾器电压：40psi;干燥气体：12L/min;气体温度:350度;碰撞诱导解离电压：200V;撇渣器电压：60v。使用具有参考溶液的第二正交喷雾器对以下参考质量进行连续较准，121.0509和922.0098质荷比（在922.0098质荷比下分辨率：9500±500）数据分析采用SPSS软件对样品进行分层聚类分析。采用一种称为组间平均数联结法，选择欧氏距离（EuclideanDistance）作为测量方法。论文研究方法•实验采用光电二极管阵列检测器（DAD）做HPLC分析。其全面扫描初步用于选择最佳波长，在色谱指纹图谱分析中提供了最好的结果。在203nm处的色谱图显示出相较其他波长的最为丰富的组分信息。•提取物的色谱分离对流动相组成的影响进行了研究，结果表明：流动相组成为水：乙酸=100:0.1（体积比）-乙腈对提取物的分离是适用的。HPLC条件优化指纹的标准化•规定不同样品中相同相对保留时间的色谱峰为共有峰。组一（10个样品）测得有42个共有峰，组二（11个样品）有52个共有峰（排除一些与溶剂峰太相近的峰）。在共有峰中，将保留时间39.8min的峰指定为相对保留时间计算的参考峰，因为它是一个位于色谱图中间的强峰。•将组一与组二的共同峰的相对保留时间分别作图二与图三。结果表明：相对保留时间的点叠加较好，且与峰相匹配的结果也是可以的。图二图三相似性分析相似性的分布是对称的，而且在两个低谷中间的时间可能是TZS的生长周期。图中可以看出有两个周期，TZS的最好收获时间是6月5日和7月5日。图中可以看出有三个周期，TZS的最好收获时间是6.5、6.20和7.5。指纹分析的结果表明，两个色谱的特点十分相似（图6和7）。这表明，在样本集1和样本集2中收集的草药主要成分也十分相似。然而，在两组中有些组分的相对丰度有明显差异，如峰11和峰13.在样本集1的提取物中，峰11的强度比峰13更高（图6）。反之，在样本集2的提取物中峰13的强度的比峰11更高（图7）。分层聚类分析聚类分析指将物理或抽象对象的集合分组为由类似的对象组成的多个类的分析过程。聚类分析的目标就是在相似的基础上收集数据来分类。样品是从不同的亚种收集而来。因此，可以看看是否可以基于分层聚类分析（HCA）把样本集进一步分为子群。样本可以分为三个组：样品集1中除了01样本的9个样本，可以划分为组1；样本集2中除了样本01的十个样本，可划分为群2。从剩余样本中，这两个01样本被分为一组。高效液相色谱-飞行时间-质谱分析•高效液相色谱-飞行时间-质谱用于分析从高效液相色谱中分离出的化合物。•在电喷雾电离飞行时间质谱（ESI-TOF-MS）的试验中，可以得到精确的化合物分子量。[M+H]+是质子化分子离子，[M+Na]+、[M+K]+分别是分子的钠和钾加合离子。•质量和化合物的名称•质谱分析结果与太子参环肽B化合物（太子参是一种植物）的标准相比。其他五种化合物基于它们的质谱时间被初步确定。•这是第一次把这些环肽认为是TZS（太子参）的指标成分。3.6根据飞行时间质谱数据推导出六环肽A太子参环肽分子的钠集合离子质量分数为524.2484时，质子化分子离子质量分数是502.2669，推测峰3是太子参环肽A化合物同样的道理其他的各类肽类物质通过峰也能找到：钠集合离子分子量是705.3331时，质子化分子离子的分子量是683.3519，质谱和太子参环肽B标准液相色谱相比较，确定峰6为太子参环肽B等等（但是为什么是峰6我还是有点不懂）Literaturesummary论文总结论文综述总结论文总结论文总结论文总结高效液相色谱已发展为从不同的TZS（太子参）亚种中采集TZS（太子参）指纹的方法。标准化的高效液相色谱指纹图谱显示出良好的稳定性和重现性，因此可以有效地用于草药或其衍生产品的筛选分析或质量评估。论文总结基于余弦夹角值或相关方法的相似性指数计算已经运用于高效液相色谱指纹图谱。对于同一TZS亚种，TZS（太子参）样品的指纹研究与相似的指纹高度相关。在不同的TZS亚种之间，基于分层聚类分析（HCA）样品可以进一步分为子群。一系列环肽化合物已经通过高效液相色谱质谱技术初步确定。因此，这在确定草药产品的质量和安全性上是一个现在的有用工具。谢谢您的观看，欢迎指导答辩人：贝当