色谱柱的日常维护

色谱柱的日常维护液相色谱柱的保养柱的稳定性与固定相类型及使用情况有关。如流动相中盐类的存在会使键合相柱的性能衰退；以SiO2为基质的固定相，过程随温度和pH(8)增加而加速。一根柱子使用是否得当，直接影响它的柱效和寿命。对于填装了粒度为10μm以下的固定相的柱子，尤其如此。为了保持柱效、柱容量及渗透性，必须进行仔细地保养。是否会由于柱外效应，使分析柱的柱效明显下降？液相色谱柱的保养1．柱易被极细的颗粒堵塞，因此必须将流动相仔细地蒸馏、过滤。在流动相贮槽与柱之间，使用0.5μm孔径的过滤器。水往往是一个重要的污染源。在水溶液流动相(如缓冲液)中，细菌容易生长，可能堵塞筛板。防止细菌生长的办法是加入抑制剂，如0.01%NaNO3。显然，抑制剂不能干扰分离和测定。液相色谱柱的保养2．在恒定压力下，发现流量减少，柱子可能部分堵塞。堵塞最容易发生在极窄的入口接头处以及入口、出口筛板处。堵塞后需要仔细拆洗，清除堵塞物，但必须防止较强的机械震动，防止用热手接触柱子，以扰动柱内的固定相层，使柱效发生变化。液相色谱柱的保养3．柱子的实际操作压力应低于填装时的最高压力，最好在最高压力的一半以下。实际操作压力过高，易使入口的固定相层下沉，形成一个空穴。若空穴形成，应重新装柱。在空穴中加入新的匀浆或玻璃微珠，也无法恢复到原来的柱效。4．应该用进样阀，而不用注射器进样，以防止注射隔膜碎屑集聚在柱入口。液相色谱柱的保养5．要防止反冲(流动相逆向流动)，否则使固定相层位移，柱效下降。6．柱子两端用金属螺帽封闭，保存在纯净的有机溶剂中。应该将柱子保存在以下pH范围内的水溶液流动相中：2pH8.5。为了长期保存，最好用纯有机溶剂(如甲醇)清洗柱子。7．一定要防止柱子干涸，特别是硬胶柱。液相色谱柱的保养8．使用卫柱(GuardColumn,亦称预柱)。连续注射含有强滞留(不被洗脱)组分的样品，将使柱效下降，保留值改变，选择性变坏，柱寿命缩短。为了延长柱寿命，在进样阀和分析柱之间加上卫柱。卫柱较短(5~10cm)，固定相与分析柱类似。其作用是吸着强滞留的组分，防止对分析柱的污染，保持分析柱性能稳定。实验表明，只要卫柱与高效、小粒度分析柱联用，除了使k’为零的组分的塔板数大大减少外，对k’值较大的组分，其柱效下降很少。色谱柱是否与进样口和检测器正确地连接进样口是否漏更换进样垫检查进样衬管是否损坏柱是否与进样口连接？?是否使用自动进样器检查进样针更换进样针推杆样品瓶中是否有足够的样品，以便进样针能吸到样品？若使用冷柱头进样，检查TEFLON垫是否有漏点火了吗？(FID)柱中是否有载气气相色谱柱的故障诊断与排除无峰或峰很小8火点着了吗?用一个玻璃片放在FID出口----•有水蒸汽冷凝检测仪器的输出值--数值是否大于0.0？•应大约为16.2picoamps•柱中是否有载气?拆开柱到检测器一端用流量计（或皂沫流量计）测量•有流量寻找色谱峰的方法(多数的情况是有漏或堵塞)9•综合已点火柱出口有流量检测器喷嘴可能被堵塞•检查FID组件（注意—请记录零件的安装顺序）检查喷嘴本身--•被石墨碎屑堵塞（拆下柱子时，石墨垫的外型有变化）•用旧的进样针清除堵塞物•重新安装FID组件•再次进样寻找色谱峰的方法(多数的情况是有漏或堵塞)10基线不好的问题(检查气源的质量)使用气体过滤器11柱过载减少进样量或将样品稀释10倍•稀释样品可以得到较好的结果试一下较厚液膜的其他色谱柱前面介绍的所有内容均适用•前伸峰和拖尾峰均说明是非线形的分配——即色谱柱与样品不匹配•使用不同选择性的色谱柱可以解决这个问题色谱柱故障的诊断与排除峰型不好（拖尾）12分析过程中基线位置突然变化偏离基线偏离或漂移基线偏离不规律地升高或降低在整个色谱过程中基线不规律地升高或降低偏离或漂移是由于下列原因产生的温度流速13确保在两次进样之间有足够的平衡时间检查体系是否有漏主要检查进样口部分柱前前次色谱过程中的残余的低挥发性流出物基线漂移漂移正确地使用高纯度的载气色谱柱老化色谱柱的最高使用温度不能超过该柱所规定的最高温度极限进样口温度与检测器温度要高于色谱柱的最高使用温度14基线噪音色谱图的基线噪音太高□进样垫流失密封垫的类型不对或使用时间过常，需要更换□衬管被污染新的密封垫在柱温箱中老化过夜，以除去易挥发性化合物vespel密封垫不能超过使用温度(350℃)□衬管被污染较脏的样品每进样15—20次后，更换新的衬管□气源可能被污染选择正确的在线气体净化器(traps)□实验室是否有异常的气体每使用四瓶气体，至少要更换一次气体净化器检测器可能已被污染——清洗检测器噪音15流失(MSD)由柱外产生的杂峰色谱柱：HP5MS30mx0.25mmx0.25um柱温：80℃25℃/min160℃，160℃3℃/min(4)320℃，320℃20℃/min(4)325℃进样：分流比100:1;1ulof100ng/ul检测器：MSD(HP-5973)4.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.00峰高大约相当于5ppbofPAH(真正的杂质)166.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0050000100000150000200000250000300000350000400000450000500000Time--AbundanceTIC:PC241NG1.DHP绿色的高级进样垫P/N5183-4594(11mm)320℃325℃进样垫17隔垫类型性能流失及温度优化的进样垫(BTO)橙/红色高温进样垫适合与进样口温度在400℃以上使用（批检）HP绿色高级进样垫350℃以上普通用途的高温进样垫HP黄色长寿命进样垫长寿命的进样垫，无需特殊保护（可用于自动进样器）灰色低流失进样垫经济型—比BTO、高级绿色垫、长寿命黄色垫（较贵）的流失高，但更经济红色低流失进样垫与灰色低流失进样垫接近—流失高于BTO、绿色垫、黄色垫柱故障的诊断与排除附加峰(第一页)鬼峰柱头污染烘焙色谱柱，然后做空运行（无样品）进样垫流失使用高质量的产品进样口污染残留在进样口或衬管中的物质载气不纯使用高纯度的载气及高质量的气体净化器，并定期更换有两种类型的附加峰1.即使不进样也会出现的峰(鬼峰)，并且在色谱分析过程中也会出现在真实的峰之中2.由样品产生的附加峰18柱故障的诊断与排除附加峰(第二页)载气中杂质与固定相发生反应若使用分离/无分流进样口进样口底部的密封垫可能会与样品反应使用金制进口密封垫即使进纯样，也会出现附加峰柱故障的诊断与排除附加峰(第三页)做一次空运行--如果这些峰还存在，不是由样品产生的，按照前面介绍的方法检查进样口温度过热，可以导致样品组分的降解每次将进样口降低20℃，观察这些峰是否还出现衬管与样品起反应使用脱活的衬管衬管内填充物有活性更换衬管内填充物或使用无填充物的衬管样品在进样口停留的时间太长增加柱流速样品组分稳定性差尽可能降低进样口温度使用脉冲式无分流或脉冲式分流进样20柱故障的诊断与排除丢失色谱峰进样口温度太低高沸点的化合物不能很快地气化增加进样口温度进样口温度太高许多挥发性的组分在进样口降解降低进样口温度进样口被污染进样口的污染物与样品发生反应清洗进样口，更换衬管和进样垫衬管有活性使用脱活的衬管色谱图中没有出现你希望得到的样品组分峰21柱故障的诊断与排除峰型不好柱过载将样品稀释10倍重新进样使用较厚液膜但固定液相同的色谱柱减少进样量小体积进样增加分流比可能是几个未分离的色谱峰将柱温降低20℃再进样局部的分离可以显示其它额外的样品组分22使用较长的色谱柱试一试不同选择性或不同极性的柱子如将HP-1换成HP-5如将HP-5换成HP-35或HP-50+例如半挥发性的苯甲酸（色谱性能不好）柱故障的诊断与排除峰型很差合并的峰（未分离的峰）将柱温降低20-30℃在进样口的底部安装柱子的地方安装绝缘帽将进样口温度增加20-30℃检查样品与溶剂的选择是否正确峰顶分叉（双肩峰）23对极性的化合物使用极性的溶剂检测器过载减少进样量或将稀释样品10倍,或者使用较大的分流比稀释样品可以达到较好的效果色谱柱安装位置可能引起的问题色谱柱到检测器安装位置不正确;使其不能到达FID喷嘴色谱柱到进样口安装位置不正确.使其不能到达进样口色谱柱到进样口及检测器的位置安装正确24色谱柱安装到进样口评定因素安装深度--柱到针的间隙按照厂方的介绍,在进样针头到柱保留1-2厘米的间隙对分析物和样品基质选择适用的衬管使用专用的柱切割器保证所有的柱接头及其它接口不漏25