芸苔素内酯测定方法

芸苔素内酯的测定方法1、方法提要试样用甲醇溶液溶解，在室温下与苯硼酸衍生化反应30分钟，以乙腈+水为流动相，使用以C18为填料的不锈钢柱和紫外检测器（222nm），对试样中的芸苔素进行反相高效液相色谱分离。2、试剂和溶液甲醇：色谱纯；乙腈：HPLC级；水：新制二次蒸馏水；苯硼酸：已知含量；苯硼酸溶液：1.0mg/mL苯硼酸甲醇溶液；芸苔素标样：(阿拉丁试剂网aladdin）已知质量分数。3、仪器高效液相色谱仪：具有紫外可变波长检测器；色谱工作站；色谱柱：250mL×4.6mm（i.d.)不锈钢柱，内装C18、5µm填充物；过滤器：滤膜孔径为0.45µm；微量进样器：50µL；超声波清洗器；真空泵。4、高效液相色谱仪操作条件流动相：乙腈：水=80:20（v/v)，经滤膜过滤，并进行脱气；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；检测波长：222nm；进样体积：满环进样；保留时间：14-羟基芸苔素甾醇约14.613min，3-表芸苔素内酯约15.822min，28-表高芸苔素内酯约16.749min，24-表芸苔素内酯约17.826min,28-高芸苔素内酯约19.735min，本产品天然油菜素内酯保留时间14.33至18.36min。上述操作参数是典型的，可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。5、测定步骤（1）标准溶液的配制称取芸苔素标准品约0.010g（精确至0.0002g）置于25ml容量瓶中，用10mL甲醇溶解，加入浓度为1.0mg/mL的苯硼酸甲醇溶液10mL，置于环境温度20℃温度下反应0.5小时。反应完毕，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过孔径0.45µm滤膜即得标样溶液。（2）试样溶液的配制准确称取样品10g（精确至0.0002g），小心放入50mL的锥形瓶中，量取15mL正己烷倒入锥形瓶中，将锥形瓶里的物料用电动振荡仪振荡3-5分钟，静置20min后，加入蒸馏水适量，振荡后静置30min，待溶液完全分层后，取上层正己烷溶液共10mL于25mL容量瓶中，在水浴锅（80℃）中加热，直至完全赶净正己烷，再加入浓度为1.0mg/mL的苯硼酸甲醇溶液10mL，置于环境温度20℃下，反应0.5小时。反应完毕，用甲醇稀释至刻度，摇匀，再部分转入两支5mL离心管中，离心分离2分钟，过孔径0.45µm滤膜即得待测溶液。（3）测定在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针待测溶液，计算各针相对响应值，待相邻两针的相对响应值变化小于1%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。（4）计算将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中芸苔素峰面积分别进行平均。试验中芸苔素的质量分数按式（1）计算：A2.M1.PX%=×B×100（1）A1.M2式中：A1——标样溶液中芸苔素内酯的峰面积（或峰高）的平均值；A2——试样溶液中芸苔素内酯的峰面积（或峰高）的平均值；M1——芸苔素内酯标样的质量，g；M2——试样的质量，g；B——系数为1.5；P——标样芸苔素内酯的质量分数。6、允许差芸苔素质量分数两次平行测定结果之差，应不大于1.23%，取其算术平均值作为测定结果。